發(fā)布時間：2020-10-16 19:51

　　 目的 本研究通過用冠心丹參滴丸觀察其對2型糖尿病HOMA-IR等生化代謝指標以及骨骼肌和心肌細胞葡萄糖轉運體(GLUT-4)表達和膜轉位的影響,通過GLUT-4分子角度探討冠心丹參滴丸改善胰島素抵抗的作用及機制。方法 建立2型糖尿病胰島素抵抗大鼠模型,給予冠心丹參滴丸干預,研究磷酸肌醇3激酶(PI3K)信號通路中骨骼肌和心肌細胞GLUT-4表達、膜轉位的變化;體外研究采用棕櫚酸(palmitic acid,PA)誘導的大鼠L6細胞IR模型,給予冠心丹參滴丸干預,研究其對骨骼肌和心肌IR模型GLUT-4 mRNA表達、胞膜轉位的影響。體外研究采用骨骼肌成肌細胞L6作為研究對象,采用MTT法檢測冠心丹參滴丸對骨骼肌細胞活力的影響,確定冠心丹參滴丸作用于體外細胞培養(yǎng)的適宜濃度;采用棕櫚酸誘導大鼠L6細胞,建立胰島素抵抗骨骼肌細胞模型;冠心丹參滴丸干預細胞后,采用葡萄糖氧化酶法(GOP-POD)檢測上清液的葡萄糖濃度,研究冠心丹參滴丸對胰島素抵抗細胞糖攝取的影響;采用酶法檢測細胞內甘油三酯和游離脂肪酸的濃度,研究冠心丹參滴丸對胰島素抵抗細胞脂質沉積的影響;采用Western Blot法檢測冠心丹參滴丸對胰島素抵抗GLUT-4蛋白表達的影響。動物實驗以糖尿病大鼠為研究對象,冠心丹參滴丸干預后,大鼠處死,保存大鼠靜脈血,靜脈血離心后檢測血清胰島素、膽固醇、葡萄糖、甘油三酯、糖化血紅蛋白生化指標,研究冠心丹參滴丸對糖尿病大鼠胰島素抵抗相關指標的影響;用免疫組化的方法觀察GLUT-4在骨骼肌和心肌組織中的定位并測定其光密度值以表示蛋白量探討冠心丹參滴丸改善胰島素抵抗的機制。結果 通過建立胰島素抵抗模型,研究冠心丹參滴丸對于細胞或動物模型的作用效果;通過體外培養(yǎng)骨骼肌細胞,建立胰島素抵抗模型;細胞實驗研究了冠心丹參滴丸對于細胞IR模型的作用效果,通過體外培養(yǎng)骨骼肌細胞,棕櫚酸誘導L6細胞胰島素抵抗,冠心丹參滴丸干預后,L6細胞對葡萄糖的攝取明顯增加,改善了PA誘導的L6細胞胰島素抵抗程度;冠心丹參滴丸干預后,L6細胞內甘油三酯、游離脂肪酸的含量降低,減少了PA誘導的L6細胞脂質沉積;通過建立糖尿病動物模型,得到相似的結論,并得出了冠心丹參滴丸具有降低血糖,改善血脂代謝的結果;通過免疫組織化學的方法進一步證實了冠心丹參滴丸改善了GLUT-4在骨骼肌、心肌組織中的表達,表明了冠心丹參滴丸具有通過GLUT-4通路改善機體胰島素抵抗的功效,GLUT-4廣泛存在于胰島素敏感的骨骼肌,其介導的葡萄糖轉運在糖穩(wěn)態(tài)調控中發(fā)揮著重要作用。冠心丹參滴丸干預后,增加了GLUT-4的表達,從而促進葡萄糖的攝取,改善胰島素抵抗。結論 冠心丹參滴丸通過干預胰島素抵抗中的一些關鍵因素,促進GLUT-4轉位,增加GLUT-4的表達,初步驗證了冠心丹參滴丸對于胰島素抵抗具有一定的作用效果,從而增加機體胰島素敏感性,具有改善血糖以及降低血脂的效果。
【學位單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R587.1
【部分圖文】：

天津醫(yī)科大學碩士學位論文于一個穩(wěn)定狀態(tài)。當人體胰島素下降時，細胞表面 GLUT-4 能夠恢復到初始狀態(tài)下的水平。GLUT-4 在機體糖穩(wěn)態(tài)調控過程中發(fā)揮著重要作用，在 2 型糖尿病患者的相關肌組織（以骨骼肌、心肌等為主）中，能夠看到此蛋白表達呈下降趨勢[8]。在小鼠模型中，GLUT-4 蛋白表達水平降低使小鼠產生胰島素抵抗和糖尿病。GLUT-4 在肌肉組織和脂肪組織中過量表達可以改善小鼠的血糖控制和糖耐受不良[9, 10]。

天津醫(yī)科大學碩士學位論文關研究人員在胰島素抵抗和糖尿病中發(fā)現(xiàn)了 AKT2 突變。AS160（TBC1D4，分子量 160kD）是 AKT2 的一個重要底物，敲除 AS160 和其類似功能蛋白 TBC1D1，可顯著減少胰島素刺激的葡萄糖運輸[11]。AS160 含有一個 GTP 酶激活蛋白（GAP）結構域，其能特異地作用于 G 蛋白 Rab。Rab 是一類能促進囊泡運輸?shù)腉TP 結合蛋白，通過與 GDP 結合的狀態(tài)來進行轉化，通常是從失活到活化的一個轉化，該過程能夠發(fā)生系列催化反應來改變膜運輸量。AS160 在基礎狀態(tài)下處于去磷酸化狀態(tài)，能通過 GTP 酶將 GTP 轉化成 GDP[12]。這使 Rab 蛋白處于失活狀態(tài)，從而抑制了 GLUT-4 囊泡在細胞內的運輸。在胰島素刺激下，AS160的氨基酸殘基被 AKT2 磷酸化后無法進行 GAP 表達[13]，使 Rab 蛋白可以與 GTP結合，促進 GLUT-4 囊泡運輸同時敲低 Rabl0 則會減弱基礎狀態(tài)時由于 AS160缺失所引起的表面 GLUT-4 增多現(xiàn)象。另外，文獻報道的 AS160 的下游 Rab 蛋白除 Rabl0 外，還有 Rab8、Rabl3 和 Rabl4 等[14]。

抑制率可達 24.9％，其細胞毒性顯著強于對照組（P＜0.05，圖 3），根據(jù)實驗結果，選取作用于 L6 細胞的適宜濃度范圍是 0.2-0.8 g/L。圖3 不同濃度冠心丹參滴丸干預 24 h后對L6細胞存活率的影響（與空白對照組比較，* P ＜0.05）1.2.2 胰島素抵抗骨骼肌細胞模型的建立
【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

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本文編號：2843699