目的:篩選出反映骨質(zhì)疏松癥(osteoporosis,OP)發(fā)生發(fā)展的血漿外泌體(exosomes)microRNA的標(biāo)志物,作為早期預(yù)測(cè)骨質(zhì)疏松癥的實(shí)驗(yàn)室檢查手段之一,為臨床醫(yī)生提供骨質(zhì)疏松癥診斷及防治的新思路。方法:收集西安市中心醫(yī)院內(nèi)分泌科2016年1月至2017年10月門診及住院患者為研究對(duì)象,排除以下情況:內(nèi)分泌及代謝性疾病、自身免疫性疾病、長(zhǎng)期服用影響骨代謝的藥物者、胃腸道手術(shù)史、肝腎功能不全、惡性血液疾病、遺傳性疾病、孕婦、準(zhǔn)備妊娠、哺乳期婦女、血壓控制不良、嚴(yán)重心臟病、慢性缺氧性疾病、應(yīng)激情況、全身一般狀況較差、年齡40歲及76歲以上。骨質(zhì)疏松癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)采用2011年中華骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病雜志發(fā)布的《原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥診療指南(2011)》實(shí)行:骨質(zhì)疏松癥:T值≤-2.5;骨量減少:-2.5T值-1;正常骨量:T值≥-1。篩選出原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥患者、低骨量患者及正常體檢人員共24例,其中骨質(zhì)疏松癥組(A組,包括嚴(yán)重骨質(zhì)疏松癥)患者6例,骨量減少組(B組)患者10例,正常對(duì)照組(C組)8例,根據(jù)腰椎正位及股骨頸雙能X線骨密度檢查分組,記錄所有可納入本實(shí)驗(yàn)的受試者的年齡、性別(女性還需記錄絕經(jīng)年齡)、個(gè)人史、用藥史,測(cè)量其身高、體重、收縮壓及舒張壓,計(jì)算BMI=體重/身高~2(kg/m~2),并簽署知情同意書。檢測(cè)所有受試者的電解質(zhì)(包括血鈣、血磷)、肝功(包括堿性磷酸酶ALP)、腎功、血糖、血脂、甲狀腺功能(FT3、FT4、TT3、TT4、TSH)及甲狀腺過氧化物酶抗體(TPOAb)、甲狀腺球蛋白抗體(TgAb)、雌二醇(E2)、甲狀旁腺素(PTH)、25(OH)D3、鐵蛋白(SF)等指標(biāo)。每組選取3名受試者血漿,應(yīng)用Ribo exosome Isolation reagent試劑提取血漿外泌體,進(jìn)一步提取microRNA后運(yùn)用ND-1000 Nanodrop和Agilent 2200 TapeStation程序?qū)悠愤M(jìn)行質(zhì)檢,構(gòu)建文庫(kù)后進(jìn)行測(cè)序。分別使用log_2Ratio及散點(diǎn)圖比較共同表達(dá)的microRNA及其表達(dá)量的差異,采用edgeR程序來分析各組間microRNA的差異及其顯著性,并計(jì)算出P值。運(yùn)用Pearson相關(guān)系數(shù)r來分析組間的相關(guān)性,明確測(cè)序結(jié)果的可靠程度。進(jìn)一步篩選出差異倍數(shù)較大、表達(dá)量較高、既往文獻(xiàn)中已證實(shí)與骨質(zhì)疏松癥有關(guān)的miRNAs標(biāo)志物。結(jié)果:1.A組與C組差異及分析:檢測(cè)出A組與C組有表達(dá)的miRNA共514個(gè),其中有高顯著差異的miRNA共316個(gè),有一般顯著差異的miRNA共60個(gè)。篩選出A組與C組差異倍數(shù)較大、表達(dá)量較高、既往文獻(xiàn)中已證實(shí)與骨質(zhì)疏松癥有關(guān)的miRNA共37個(gè),其中上調(diào)的miRNA共17個(gè),下調(diào)的miRNA共20個(gè)。2.B組與C組間的差異及分析:檢測(cè)出B組與C組有表達(dá)的miRNA共735個(gè),其中有高顯著差異的miRNA共60個(gè),有一般顯著差異的miRNA共44個(gè)。篩選出B組與C組差異倍數(shù)較大、表達(dá)量較高、既往文獻(xiàn)中已證實(shí)與骨量減少及骨質(zhì)疏松癥有關(guān)的miRNA共34個(gè),其中上調(diào)的miRNA共28個(gè),下調(diào)的miRNA共6個(gè)。3.A組與B組間的關(guān)系:檢測(cè)出A組與B組共同表達(dá)的miRNA為372個(gè),其中均與C組有差異的基因共有39個(gè),表達(dá)量較高且有顯著性差異的miRNA共5個(gè)。結(jié)論:1.骨質(zhì)疏松癥患者與正常人群相比,的確存在差異表達(dá)的miRNAs。2.檢測(cè)出的71個(gè)高表達(dá)量的miRNAs與成骨細(xì)胞及破骨細(xì)胞有著密不可分的關(guān)系,且A組與B組中均與C組有差異的miRNA共有39個(gè),表達(dá)量較高且有顯著性差異的miRNA共5個(gè)。這些miRNAs很可能成為骨質(zhì)疏松癥及骨量減少的潛在分子標(biāo)志物。但由于樣本量偏少,且miRNA本身就存在個(gè)體差異,所以還需擴(kuò)大樣本量進(jìn)行進(jìn)一步的后期重復(fù)驗(yàn)證,驗(yàn)證方法采用熒光定量PCR,以精簡(jiǎn)及完善骨質(zhì)疏松癥的microRNA表達(dá)譜。3.A、B、C三組樣本相互之間的表達(dá)模式均呈正相關(guān),且均為高相關(guān)程度,這說明檢測(cè)出的microRNAs與骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系。4.通過對(duì)本研究篩選出的血漿外泌體microRNA進(jìn)行檢測(cè),可以及時(shí)預(yù)測(cè)骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生,進(jìn)而減少脆性骨折的風(fēng)險(xiǎn),對(duì)骨質(zhì)疏松癥的早期診斷有著重要意義。
【學(xué)位單位】：延安大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R580
【部分圖文】：

表 2-1 A 組與 C 組間 miRNA 差異表達(dá)統(tǒng)計(jì)計(jì)tistical counting of miRNA differential expression between分類 計(jì)數(shù)（個(gè)）|log2(foldchange)|①≥1 5140.01≤P 值＜0.05 60P 值＜0.01 316nge)：以 2 為底，對(duì)數(shù)化的表達(dá)差異倍數(shù)。|log2(foldchange)|≥1| ≥1 且 P 值< 0.05，則為一般顯著差異；若 |log2(Fold Change)| ≥C 組間 的 miRNA 表達(dá)差異如圖 2-1 所示，兩了所有 miRNA 表達(dá)差異，以 |log2(Fold Chang表達(dá)下調(diào)，灰色點(diǎn)表示 miRNA 表達(dá)沒有變化，

A 組 C 組圖 2-2 A 組與 C 組間 miRNA 表達(dá)聚類分析圖The cluster analysis of miRNA between group Aand g間相關(guān)性分析關(guān)系數(shù) r 來分析兩組間的變量關(guān)系，|r| 越，證明該測(cè)序結(jié)果的可靠性較高。r 為正值值則代表兩組樣本呈負(fù)相關(guān)。其標(biāo)準(zhǔn)為：|r|相關(guān)程度普通；0.5≤|r|< 0.7 表示相關(guān)程度顯|r|<1.0 表示相關(guān)程度極高。通過 Pearson 相相關(guān)系數(shù) r=0.737，呈正相關(guān)，且相關(guān)程度

圖 2-3 A 組與 C 組間 Pearson 相關(guān)系數(shù)圖. 2-3 Pearson Correlation Coefficient between group Aand grou C 組間的差異及分析 C 組間的 miRNA 差異表達(dá)統(tǒng)計(jì)計(jì)數(shù)組與 C 組有表達(dá)的 miRNA 共 735 個(gè)，其中有 個(gè)，有一般顯著差異的 miRNA 共 44 個(gè)。見表 表 2-3 B 組與 C 組間 miRNA 差異表達(dá)統(tǒng)計(jì)計(jì)數(shù)tical counting of miRNA differential expression between group B分類 計(jì)數(shù)（個(gè)）|log2(foldchange)|①≥1 7350.01≤P 值< 0.05 44P 值< 0.01 60
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 唐慧;伍海姍;楊怡;趙靖平;陳晉東;;外泌體源性microRNA在疾病診療中的研究進(jìn)展[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2015年11期

本文編號(hào)：2840968