目的:篩選出反映骨質(zhì)疏松癥(osteoporosis,OP)發(fā)生發(fā)展的血漿外泌體(exosomes)microRNA的標志物,作為早期預(yù)測骨質(zhì)疏松癥的實驗室檢查手段之一,為臨床醫(yī)生提供骨質(zhì)疏松癥診斷及防治的新思路。方法:收集西安市中心醫(yī)院內(nèi)分泌科2016年1月至2017年10月門診及住院患者為研究對象,排除以下情況:內(nèi)分泌及代謝性疾病、自身免疫性疾病、長期服用影響骨代謝的藥物者、胃腸道手術(shù)史、肝腎功能不全、惡性血液疾病、遺傳性疾病、孕婦、準備妊娠、哺乳期婦女、血壓控制不良、嚴重心臟病、慢性缺氧性疾病、應(yīng)激情況、全身一般狀況較差、年齡40歲及76歲以上。骨質(zhì)疏松癥的診斷標準采用2011年中華骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病雜志發(fā)布的《原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥診療指南(2011)》實行:骨質(zhì)疏松癥:T值≤-2.5;骨量減少:-2.5T值-1;正常骨量:T值≥-1。篩選出原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥患者、低骨量患者及正常體檢人員共24例,其中骨質(zhì)疏松癥組(A組,包括嚴重骨質(zhì)疏松癥)患者6例,骨量減少組(B組)患者10例,正常對照組(C組)8例,根據(jù)腰椎正位及股骨頸雙能X線骨密度檢查分組,記錄所有可納入本實驗的受試者的年齡、性別(女性還需記錄絕經(jīng)年齡)、個人史、用藥史,測量其身高、體重、收縮壓及舒張壓,計算BMI=體重/身高~2(kg/m~2),并簽署知情同意書。檢測所有受試者的電解質(zhì)(包括血鈣、血磷)、肝功(包括堿性磷酸酶ALP)、腎功、血糖、血脂、甲狀腺功能(FT3、FT4、TT3、TT4、TSH)及甲狀腺過氧化物酶抗體(TPOAb)、甲狀腺球蛋白抗體(TgAb)、雌二醇(E2)、甲狀旁腺素(PTH)、25(OH)D3、鐵蛋白(SF)等指標。每組選取3名受試者血漿,應(yīng)用Ribo exosome Isolation reagent試劑提取血漿外泌體,進一步提取microRNA后運用ND-1000 Nanodrop和Agilent 2200 TapeStation程序?qū)悠愤M行質(zhì)檢,構(gòu)建文庫后進行測序。分別使用log_2Ratio及散點圖比較共同表達的microRNA及其表達量的差異,采用edgeR程序來分析各組間microRNA的差異及其顯著性,并計算出P值。運用Pearson相關(guān)系數(shù)r來分析組間的相關(guān)性,明確測序結(jié)果的可靠程度。進一步篩選出差異倍數(shù)較大、表達量較高、既往文獻中已證實與骨質(zhì)疏松癥有關(guān)的miRNAs標志物。結(jié)果:1.A組與C組差異及分析:檢測出A組與C組有表達的miRNA共514個,其中有高顯著差異的miRNA共316個,有一般顯著差異的miRNA共60個。篩選出A組與C組差異倍數(shù)較大、表達量較高、既往文獻中已證實與骨質(zhì)疏松癥有關(guān)的miRNA共37個,其中上調(diào)的miRNA共17個,下調(diào)的miRNA共20個。2.B組與C組間的差異及分析:檢測出B組與C組有表達的miRNA共735個,其中有高顯著差異的miRNA共60個,有一般顯著差異的miRNA共44個。篩選出B組與C組差異倍數(shù)較大、表達量較高、既往文獻中已證實與骨量減少及骨質(zhì)疏松癥有關(guān)的miRNA共34個,其中上調(diào)的miRNA共28個,下調(diào)的miRNA共6個。3.A組與B組間的關(guān)系:檢測出A組與B組共同表達的miRNA為372個,其中均與C組有差異的基因共有39個,表達量較高且有顯著性差異的miRNA共5個。結(jié)論:1.骨質(zhì)疏松癥患者與正常人群相比,的確存在差異表達的miRNAs。2.檢測出的71個高表達量的miRNAs與成骨細胞及破骨細胞有著密不可分的關(guān)系,且A組與B組中均與C組有差異的miRNA共有39個,表達量較高且有顯著性差異的miRNA共5個。這些miRNAs很可能成為骨質(zhì)疏松癥及骨量減少的潛在分子標志物。但由于樣本量偏少,且miRNA本身就存在個體差異,所以還需擴大樣本量進行進一步的后期重復(fù)驗證,驗證方法采用熒光定量PCR,以精簡及完善骨質(zhì)疏松癥的microRNA表達譜。3.A、B、C三組樣本相互之間的表達模式均呈正相關(guān),且均為高相關(guān)程度,這說明檢測出的microRNAs與骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系。4.通過對本研究篩選出的血漿外泌體microRNA進行檢測,可以及時預(yù)測骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生,進而減少脆性骨折的風(fēng)險,對骨質(zhì)疏松癥的早期診斷有著重要意義。
【學(xué)位單位】：延安大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R580
【部分圖文】：

表 2-1 A 組與 C 組間 miRNA 差異表達統(tǒng)計計tistical counting of miRNA differential expression between分類 計數(shù)（個）|log2(foldchange)|①≥1 5140.01≤P 值＜0.05 60P 值＜0.01 316nge)：以 2 為底，對數(shù)化的表達差異倍數(shù)。|log2(foldchange)|≥1| ≥1 且 P 值< 0.05，則為一般顯著差異；若 |log2(Fold Change)| ≥C 組間 的 miRNA 表達差異如圖 2-1 所示，兩了所有 miRNA 表達差異，以 |log2(Fold Chang表達下調(diào)，灰色點表示 miRNA 表達沒有變化，

A 組 C 組圖 2-2 A 組與 C 組間 miRNA 表達聚類分析圖The cluster analysis of miRNA between group Aand g間相關(guān)性分析關(guān)系數(shù) r 來分析兩組間的變量關(guān)系，|r| 越，證明該測序結(jié)果的可靠性較高。r 為正值值則代表兩組樣本呈負相關(guān)。其標準為：|r|相關(guān)程度普通；0.5≤|r|< 0.7 表示相關(guān)程度顯|r|<1.0 表示相關(guān)程度極高。通過 Pearson 相相關(guān)系數(shù) r=0.737，呈正相關(guān)，且相關(guān)程度

圖 2-3 A 組與 C 組間 Pearson 相關(guān)系數(shù)圖. 2-3 Pearson Correlation Coefficient between group Aand grou C 組間的差異及分析 C 組間的 miRNA 差異表達統(tǒng)計計數(shù)組與 C 組有表達的 miRNA 共 735 個，其中有 個，有一般顯著差異的 miRNA 共 44 個。見表 表 2-3 B 組與 C 組間 miRNA 差異表達統(tǒng)計計數(shù)tical counting of miRNA differential expression between group B分類 計數(shù)（個）|log2(foldchange)|①≥1 7350.01≤P 值< 0.05 44P 值< 0.01 60
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 唐慧;伍海姍;楊怡;趙靖平;陳晉東;;外泌體源性microRNA在疾病診療中的研究進展[J];中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2015年11期

本文編號：2840968