目的:現(xiàn)有研究表明肥胖的發(fā)生會影響生物節(jié)律的表達水平,同時會造成腸道菌群失調(diào),但是肥胖的生物節(jié)律與腸道菌群的相互關(guān)系卻鮮有報道,本課題探索營養(yǎng)型肥胖模型大鼠肝臟Clock、Per3和Arntl生物鐘基因以及Scd1非生物鐘基因表達水平和腸道菌群的關(guān)系及葛根芩連湯(GQD)的調(diào)節(jié)作用,從生物節(jié)律角度上為GQD預(yù)防和治療高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖提供臨床用藥參考,為糖尿病前期的研究做臨床參考。方法:為模擬人類高脂血癥伴肥胖發(fā)生的飲食行為,本實驗通過高脂飲食誘導(dǎo)營養(yǎng)型肥胖大鼠模型,對模型組與空白組分別給予高脂飼料和普通飼料,對造模成功后大鼠進行末端回腸組織病理切片、HE染色和WB實驗。對模型進一步進行確定,模型組給予GQD干預(yù),q-PCR(Taq Man)法檢測大鼠肝臟的生物鐘基因Clock、Arntl、Per3以及脂肪沉積相關(guān)酶Scd1基因m RNA轉(zhuǎn)錄表達水平。16S r RNA測序技術(shù)對大鼠腸道菌群DNA測序,最后,基于生物信息學(xué)手段分析生物鐘基因Clock、Per3、Arntl以及非生物鐘基因Scd1和腸道菌群的關(guān)系。結(jié)果:1.動物實驗結(jié)果:給予60%高脂飼料1周后,體重、體長較空白組比較,有顯著差異(P0.01),造模第4周,模型組的甘油三酯水平也顯著高于空白組(P0.01),GOD干預(yù)后12周后,甘油三酯水平明顯下降(P0.01)。2.HE染色和WB結(jié)果:造模16周后,空白組大鼠回腸黏膜上皮細胞排列緊密,缺損少見。固有膜結(jié)構(gòu)正常,無裂隙發(fā)生。腸壁肌層結(jié)構(gòu)正常,與固有層結(jié)合緊密。模型組絨毛偏短,排列不均勻,絨毛間脂肪細胞多并且清晰可見。和普通飼料喂養(yǎng)的空白組比較,高脂模型組大鼠的盲腸claudin1、IAP、ZO1蛋白表達量下調(diào),occluding兩組表達差異不明顯。3.q-PCR結(jié)果:給藥后12周后,肥胖模型組大鼠肝臟Clock、Arntl基因表達高于空白組(P0.05),Per3、Scd1較空白組低(P0.05),GQD較模型組上調(diào)肝臟Clock、Arntl基因表達轉(zhuǎn)錄水平(P0.05),對Per3、Scd1的m RNA轉(zhuǎn)錄表達水平影響不明顯(P0.05)。4.16S r RNA結(jié)果:模型組與空白組相比較,菌群種類相同,但比例不同�？瞻捉M擬桿菌門最高(56.32%)、厚壁菌門其次(40.32%)、疣微菌門(1.99%)次之。模型組中厚壁菌門最高(57.00%),擬桿菌門其次(33.84%)、疣微菌門次之(7.06%)。在屬水平上兩組差異較大,空白組norank_f__Bacteroidales_S24-7_group最高(38.59%)、Bacteroides其次(17.03%)、Lachnospiraceae_NK4A136_group(10.31%)次之、unclassified_f__Lachnospiraceae(4.02%);模型組中norank_f__Bacteroidales_S24-7_group最高(23.83%),Bacteroides其次(9.26%)、Clostridium_sensu_stricto_1次之(7.65%)。藥物干預(yù)后,陽性藥組辛伐他汀(SIM)對腸道菌群幾乎沒有變化,與模型組菌群構(gòu)造相似,GQD組對腸道菌群結(jié)構(gòu)影響較大。5.Clock、Per3、Arntl生物鐘基因以及Scd1基因和腸道菌群關(guān)聯(lián)結(jié)果:與Clock成正相關(guān)的菌種有4種菌群:Bacteroidales_S24-7_group、Ruminiclostridium_9、Anaerostipes、Tyzzerella、負相關(guān)的菌種有3種:vadin BB60_group、Ruminococcus_1、Turicibacter與Arntl成正相關(guān)的菌種有8種:Roseburia、Epulopiscium、Blautia、Lachnospiraceae、cellulosilyticus、muciniphila、Peptococcaceae、Ruminiclostridium_9負相關(guān)的菌種有9種:Clostridiales_vadin BB60_group、Turicibacter、unclassified_g__Lactobacillus、Ruminococcus_1、Lachnospiraceae_UCG-010、Lactobacillus_johnsonii、Roseburia、leptum_g__norank、Ruminiclostridium與Per3成正相關(guān)的菌種有7種:Clostridiales_vadin BB60_group、Ruminococcus_1、unclassified_g__Lactobacillus、Turicibacter、Lactobacillus_johnsonii、Lachnospiraceae、leptum_g__norank負相關(guān)的菌種有5種:Lachnospiraceae_UCG-010、Epulopiscium、unclassified_g__Blautia、cellulosilyticus、Peptococcaceae與Scd1成正相關(guān)的菌種有3種:Lachnospiraceae_NK4A136_group、Lactobacillus_johnsonii、vadin BB60_group負相關(guān)的菌種有4種:Ruminiclostridium_9、cellulosilyticus、Ruminococcaceae、Bacteroidales_S24-7_group結(jié)論:1.高脂飼料誘導(dǎo)的營養(yǎng)型肥胖大鼠造模速度快、時間短。2.營養(yǎng)型肥胖大鼠回腸腸道壁細菌的附著能力下降,肥胖使大鼠腸道緊密連接蛋白claudin1、ZO1和IAP含量表達量下調(diào),對occluding表達改變不明顯。3.GQD能明顯影上調(diào)營養(yǎng)型肥胖大鼠肝臟生物節(jié)律基因的表達,中、低劑量組影響給為明顯。4.GQD對營養(yǎng)型肥胖大鼠腸道菌群的影響有差別,低劑量使用時,需達到一定時間后才改變菌群結(jié)構(gòu),中高劑量使用時,對腸道菌群影響迅速,且菌群更相似。5.Clock、Per3、Arntl生物鐘基因以及Scd1基因?qū)I養(yǎng)型肥胖大鼠腸道菌群影響較為重要的有Ruminiclostridium_9且與Clock、Arntl基因成正相關(guān),與Scd1成負相關(guān),文獻報道該菌群與體重的關(guān)系有待進一步確定;vadin BB60_group與Arntl、Scd1基因成正相關(guān),與Clock成負相關(guān),文獻報道與肥胖體重有負相關(guān);Ruminococcus_1、Turicibacter與Clock、Arntl基因成負相關(guān),與Per3成正相關(guān),文獻報道與肥胖體重有正相關(guān)。
【學(xué)位單位】：江西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R589.2
【部分圖文】：

圖 1-1 生物鐘與環(huán)境的關(guān)系re 1-1 relationship between biological clock and environmen對機體的影響通過共用一套分子機制，由相互連接的反饋回路組成（水平進行調(diào)節(jié)人體的生命活動[39]。正向回路包括 Clock 和們是 E-box 轉(zhuǎn)錄因子。它們共同誘導(dǎo)負反饋調(diào)節(jié)因子、Pchrome (Cry) 1 2 基因組分的轉(zhuǎn)錄。Per 和 Cry 蛋白形成一以進入細胞核，抑制時鐘和Bmal1(因此也包括Pers和Cr回路涉及到 REV-ERB 和 ROR 家族的核激素受體(NRs)，al1。時鐘蛋白的磷酸化狀態(tài)表現(xiàn)出時間上的變化，并影響、蛋白復(fù)合物的形成、它們的穩(wěn)定性以及轉(zhuǎn)錄活性[40]�？偵镧姳３趾愣ǖ墓�(jié)奏，長期處于黑暗中，機體的生物節(jié)

圖 1-2 生物鐘基因網(wǎng)絡(luò)調(diào)控圖Figure 1-2. Regulation diagram of biological clock gene network節(jié)律對肥胖的影響腦中有一個由正反饋和負反饋基因環(huán)相互連接而成的中樞時鐘，它將活動與一天24小時聯(lián)系在一起。中樞時鐘控制著大多數(shù)外周組織中存反饋回路，以協(xié)調(diào)器官之間的代謝基因表達，并與進食活動協(xié)調(diào)，從地利用資源。最近的研究闡明了中央和外周時鐘之間復(fù)雜的反饋機制動和代謝穩(wěn)態(tài)中的作用。脂肪組織是主要的能量儲存器官，通過分泌素和內(nèi)分泌激素向其他器官發(fā)出能量狀態(tài)的信號。在脂肪組織中，時核激素受體之間的轉(zhuǎn)錄反饋調(diào)節(jié)，以及這些分子之間的直接蛋白質(zhì)聯(lián)代謝基因在適當?shù)臅r間表達[46]。肥胖患者表現(xiàn)為機體的脂質(zhì)堆積，導(dǎo)衡的破壞，生物節(jié)律參與了此平衡的調(diào)節(jié)[47]。瘦素是一種內(nèi)源性的激脂肪細胞的分泌，在基因轉(zhuǎn)錄與蛋白表達水平都表現(xiàn)出生物節(jié)律性。

圖 3-1 腸道緊密連接蛋白構(gòu)成圖Figure 3-1. Composition of intestinal tight junction protein驗建立大鼠肥胖模型，對造模成功的大鼠進行末端回腸的病理切察肥胖與正常生理狀態(tài)的動物末端回腸組織形態(tài)與超微結(jié)構(gòu)變化lot 檢測盲腸組織蛋白的方法，分析腸道緊密連接蛋白 occluZO1 和腸道堿性磷酸酶 IAP 蛋白水平的變化。方法物：同第二章材料與方法 1盲腸樣品采集：第 16 周處理大鼠，分別取回腸與盲腸樣本，先找到十二指腸，順找，空腸下端即為回腸，在與盲腸連接處往上剪 1cm 左右的末端

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2 陳榮,孫焱;耐力運動對幼年肥胖大鼠血清瘦素水平的影響[J];武漢體育學(xué)院學(xué)報;2005年06期

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4 楊志民;席莉;宋旭;;運動對肥胖大鼠胰島素抵抗、血清瘦素及飲食量的影響[J];合肥工業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2013年02期

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6 楊春壯;徐永良;劉春玲;馬英;;針刺對肥胖大鼠血脂及腫瘤壞死因子α的影響[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2010年07期

7 田吉明;汪軍;王瑞元;;一次性運動對肥胖大鼠脂肪水解調(diào)節(jié)因素的影響[J];北京體育大學(xué)學(xué)報;2008年11期

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本文編號：2822312