目的谷氨酸(glutamate,Glu)信號在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)的發(fā)生發(fā)展中可能起重要作用。本研究旨在分析不同濃度Glu對體外培養(yǎng)的RA滑膜成纖維細(xì)胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)分泌白介素-17(IL-17)及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的影響,探討Glu在RA的發(fā)生發(fā)展過程中的作用。方法本研究采用RA患者關(guān)節(jié)術(shù)后滑膜標(biāo)本,培養(yǎng)原代細(xì)胞,采用3-5代RA-FLS,選取光鏡下觀察生長狀態(tài)良好的FLS進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)按Glu不同的濃度共分4組,包括A組(空白組)、B組(100umol/L Glu)、C組(500umol/L Glu)、D組(1000umol/L Glu),刺激RA-FLS 15小時(shí)后,用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測上清液中IL-17及TNF-α的分泌變化情況。實(shí)驗(yàn)共重復(fù)三次。結(jié)果用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果(1)RA-FLS在無任何刺激下自身可分泌一定量的IL-17及TNF-α;(2)Glu對RA-FLS分泌IL-17結(jié)果示:A-B組、A-D組、B-D組、C-D組組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,P0.01,P0.01,P0.01),其余組間對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。即當(dāng)濃度在100umol/L時(shí),Glu刺激RA-FLS分泌更多的IL-17,當(dāng)濃度在1000umol/L時(shí),Glu則抑制RA-FLS分泌IL-17;(3)Glu對RA-FLS分泌TNF-α結(jié)果示:A-D組組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其余組間對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。即當(dāng)Glu濃度在100umol/L及500umol/L時(shí),Glu對RA-FLS TNF-α的分泌與無Glu刺激時(shí)的TNF-α分泌影響沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,當(dāng)濃度在1000umol/L時(shí),Glu則抑制RA-FLS分泌TNF-α。結(jié)論Glu能通過不同的濃度調(diào)控RA-FLS對于IL-17及TNF-α的分泌,低濃度的Glu對RA-FLS分泌IL-17起刺激作用,高濃度的Glu對RA-FLS分泌IL-17及TNF-α起抑制作用。
【學(xué)位單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R593.22
【部分圖文】：

RA滑膜中Glu信號作用模式圖

蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 谷氨酸對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響第三章 結(jié)果3.1 RA-FLS 的形態(tài)處理后的組織在37°C、5%CO2培養(yǎng)箱中過夜后，倒置顯微鏡下可見部分FLS從組織邊緣爬出，多為梭形，細(xì)胞核位于細(xì)胞中央，生長狀態(tài)呈旋渦狀，偶可見有偽足的巨噬細(xì)胞，7-10天細(xì)胞可融合至80%-90%，培養(yǎng)傳代至第三代時(shí)細(xì)胞狀態(tài)相對穩(wěn)定。3.2 RA-FLS 免疫熒光鑒定熒光顯微鏡下，滑膜成纖維細(xì)胞胞漿被Vimentin染成綠色，DAPI染料染核呈藍(lán)色，軟件合并后可見RA-FLS核位于細(xì)胞中間，細(xì)胞純度達(dá)大于99%（圖2）。

學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 谷氨酸對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞分泌細(xì)胞因lu 濃度為 500umol/L 時(shí)，其刺激 RA-FLS 表達(dá)的 IL-17 較空白組及無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而當(dāng) Glu 濃度上升至 1000umol/L 時(shí)，其刺激 RA-17 不僅沒有增加，反而較空白組、100umol/L 及 500umol/L 時(shí)減計(jì)學(xué)意義，提示在高濃度 1000umol/L 時(shí)，Glu 時(shí)抑制 RA-FLS 表表 1、圖 3）。表 1 不同濃度 Glu 對 RA-FLS 表達(dá) IL-17 的影響IL-17 濃度（pg/ml）第一次 第二次 第（空白組） 4.29 3.79 （100um/L） 5.19 4.62 （500um/L） 4.56 4.155 （1000um/L） 0.65 0.945

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2819246