目的:糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(diabetes mellitus,DM)最常見、最嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥之一,已成為終末期腎病(end stage renal disease,ESRD)的主要原因之一。研究顯示DN的發(fā)病機(jī)制與糖代謝紊亂、血流動力學(xué)改變、內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙、炎癥、氧化應(yīng)激及自噬等多種因素有關(guān),糖尿病并發(fā)癥病理學(xué)的統(tǒng)一機(jī)制學(xué)說的提出,充分體現(xiàn)了高糖誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激在DN發(fā)生發(fā)展中的重要作用。近年來,誘導(dǎo)機(jī)體細(xì)胞的自然保護(hù)反應(yīng)正引起關(guān)注,即轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)的因子2(Nrf2)與其負(fù)調(diào)控蛋白Keap1共同調(diào)控的II相酶的表達(dá),被認(rèn)為是細(xì)胞抵御氧化應(yīng)激的最主要途徑。本研究通過建立糖尿病大鼠模型,測定腎組織中丙二醛(MDA)含量及總抗氧化能力(T-AOC)反應(yīng)糖尿病大鼠腎臟氧化應(yīng)激程度;應(yīng)用免疫組織化學(xué)、熒光定量PCR等方法檢測腎組織的Nrf2、HO-1、VEGF的表達(dá)情況;并給予II相酶誘導(dǎo)劑萊菔硫烷(sulforaphane,SF)進(jìn)行干預(yù),觀察其對腎臟MDA、T-AOC、Nrf2、HO-1、VEGF表達(dá)影響;探討Nrf2/ARE通路與DN氧化應(yīng)激的關(guān)系以及萊菔硫烷的干預(yù)效果,旨在為糖尿病腎病的防治提供實驗性理論依據(jù)。方法:清潔級健康雄性SD大鼠36只,體重200±20 g,按隨機(jī)數(shù)字法分為:正常對照組(NC組)、糖尿病模型組(DM組)、藥物干預(yù)組(DM+SF組),每組12只,其中DM組及DM+SF組給予腹腔一次性注射鏈脲佐菌素(STZ)65 mg/kg(溶于0.1 mol/L檸檬酸緩沖液中,PH 4.2),72 h后尾尖取血測定血糖,以血糖≥16.7 mmol/L,尿糖+++~++++,作為糖尿病模型成功的標(biāo)志,NC組給予等量檸檬酸緩沖液腹腔注射。實驗期間動物自由進(jìn)食、飲水,不使用降糖藥物。DM+SF組予以SF500μg/kg(溶于植物油中),灌胃,1次/日;NC組、DM組予以等量的植物油灌胃,1次/日。分別于實驗的第8周、第12周每組隨機(jī)取6只大鼠稱重后分別用代謝籠收集24 h尿,用于測定尿蛋白定量。心臟取血測定血糖、肌酐、尿素氮。留取腎組織標(biāo)本用于制作腎皮質(zhì)勻漿測定MDA及T-AOC濃度。制備病理組織切片并進(jìn)行HE、PAS染色明確腎臟病理變化。應(yīng)用免疫組織化學(xué)及熒光定量PCR方法檢測Nrf2、HO-1、VEGF在腎臟的表達(dá)部位并對其進(jìn)行定量檢測。對于滿足正態(tài)方差齊的數(shù)據(jù)采用單因素方差分析(One-Way ANOVA)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理,非正態(tài)或方差不齊時采用多個獨立樣本的秩和檢驗。P0.05表示有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1一般情況:NC組大鼠飲食及尿量無明顯變化,毛發(fā)光澤,反應(yīng)靈敏,體重明顯增長;DM組及DM+SF組逐漸出現(xiàn)多飲、多尿、多食、毛發(fā)枯黃,體重相對于同期NC組大鼠明顯下降(P0.05);但兩時間點DM組與DM+SF組相比體重差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2生化指標(biāo):各時間點血肌酐、尿素氮、血糖、24h尿蛋白定量DM組及DM+SF組較NC組明顯升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);DM組及DM+SF組血糖值無明顯差異(P0.05);與DM組相比SF+DM組血肌酐、尿素氮、24h尿蛋白定量降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3 MDA、T-AOC水平:DM組及DM+SF組腎皮質(zhì)勻漿中MDA濃度高于NC組(P0.05),T-AOC活性小于NC組(P0.05);與DM組比較,兩個時間點,DM+SF組腎皮質(zhì)勻漿MDA濃度降低(P0.05),T-AOC活性增高(P0.05)。4腎臟組織HE及PAS染色:NC組大鼠腎小球結(jié)構(gòu)正常,腎小管上皮細(xì)胞排列整齊,結(jié)構(gòu)清晰,基底膜染色粗細(xì)均勻一致,無系膜細(xì)胞及系膜基質(zhì)增多等異常改變;DM組部分腎小球體積增大,系膜細(xì)胞及基質(zhì)增多,系膜區(qū)增寬,基底膜粗細(xì)不均,部分部位出現(xiàn)腎小管擴(kuò)張,部分腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)空泡變性,12周末上述病理改變最為突出,DM+SF組與DM組比較上述病理變化相對減輕。5免疫組織化學(xué)染色:Nrf-2、HO-1、VEGF在NC組腎臟組織少量表達(dá);兩時間點,DM組Nrf-2、HO-1、VEGF表達(dá)量較NC組相對增加;DM+SF組較DM組Nrf-2、HO-1表達(dá)增多,VEGF表達(dá)減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。6熒光定量PCR:與NC組相比兩時間點DM組中Nrf2、HO-1、VEGFm RNA相對表達(dá)量增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);DM+SF組較DM組Nrf2、HO-1m RNA表達(dá)量增加,VEGFm RNA表達(dá)量減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1糖尿病狀態(tài)下,大鼠腎臟存在氧化應(yīng)激,在氧化應(yīng)激狀態(tài)下Nrf2/ARE通路調(diào)控的抗氧化蛋白表達(dá)增多。2萊菔硫烷可以降低腎組織MDA含量,增加T-AOC的活力,誘導(dǎo)Nrf2及其下游的抗氧化蛋白HO-1的表達(dá),改善糖尿病大鼠腎臟的氧化應(yīng)激狀態(tài);也可通過抑制VEGF的表達(dá)來改善糖尿病時腎臟內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙。3萊菔硫烷對糖尿病大鼠腎臟具有保護(hù)作用,其機(jī)制可能是通過改善腎臟氧化應(yīng)激及內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙實現(xiàn)的。
【學(xué)位單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R587.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 馮敏;徐成波;溫俊平;林桂芳;呂琦;黃國良;;糖基化終產(chǎn)物對人腎小球系膜細(xì)胞氧化應(yīng)激及MCP-1表達(dá)的影響及機(jī)制[J];中國應(yīng)用生理學(xué)雜志;2014年04期

2 邵侃;黃珊;盧蘇梅;湯瑜斌;衡曉湘;裘佳穎;夏莉莉;;人體生物刺激反饋儀對2型糖尿病患者心血管自主神經(jīng)病變的篩查及相關(guān)危險因素分析[J];中國全科醫(yī)學(xué);2013年23期

3 馮曉紅;楊雪輝;吳巧敏;魏佳平;;高尿酸血癥對早期2型糖尿病腎病的影響[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2010年08期

本文編號：2813899