發(fā)布時(shí)間：2020-09-03 10:50

　　 目的:探討糖尿病小鼠大腦組織中HSP22的表達(dá)情況,及HSP22對(duì)腦內(nèi)炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激和組織損傷的影響。方法:(1)第一部分:8-9周齡的野生型C57BL/6雄性小鼠30只,隨機(jī)分為正常組、高脂組、糖尿病組;第二部分:將同周齡的野生型和HSP22過表達(dá)轉(zhuǎn)基因型C57BL/6雄性小鼠各20只,隨機(jī)分為野生型正常組、野生型糖尿病組、轉(zhuǎn)基因型正常組、轉(zhuǎn)基因型糖尿病組。采用高脂飲食聯(lián)合鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射法建立2型糖尿病模型。(2)Western Blot法檢測(cè)大腦組織HSP22、NLPR3、Caspase1、TNF-α、Active-Caspase-3的表達(dá)。(3)PCR法檢測(cè)大腦組織IL-1β、IL-18的表達(dá)。(4)比色法測(cè)定大腦組織超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性,及丙二醛(MDA)含量。(5)HE染色法觀察大腦組織病理改變。結(jié)果:(1)血糖的變化各組小鼠空腹血糖基線水平無差異(P0.05);給予STZ干預(yù)后,糖尿病組小鼠的空腹血糖明顯高于正常組和高脂組(P0.01),正常組和高脂組小鼠的空腹血糖水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);野生型、轉(zhuǎn)基因型糖尿病組小鼠的空腹血糖明顯高于野生型、轉(zhuǎn)基因型正常組(P0.01),轉(zhuǎn)基因型糖尿病組小鼠的空腹血糖低于野生型糖尿病組(P0.01),野生型正常組與轉(zhuǎn)基因型正常組之間,小鼠的空腹血糖水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。(2)Western Blot法檢測(cè)大腦組織HSP22、NLPR3、Caspase1、TNF-α、Active-Caspase-3的表達(dá)在正常組、高脂組、糖尿病組中,糖尿病組的HSP22、NLPR3、Caspase1、TNF-α、Active-Caspase-3的表達(dá)較正常組和高脂組升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);正常組與高脂組比較,HSP22、NLPR3、Caspase1、TNF-α、ActiveCaspase-3的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在野生型正常組、野生型糖尿病組、轉(zhuǎn)基因型正常組、轉(zhuǎn)基因型糖尿病組四組中,與野生型正常組相比,野生型糖尿病組、轉(zhuǎn)基因型正常組、轉(zhuǎn)基因型糖尿病組HSP22蛋白表達(dá)均升高(P0.05);轉(zhuǎn)基因型糖尿病組HSP22蛋白表達(dá)高于野生型糖尿病組、轉(zhuǎn)基因型正常組(P0.05);野生型糖尿病組與轉(zhuǎn)基因型正常組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);野生型正常組NLPR3、Caspase1、TNF-α、Active-Caspase-3蛋白表達(dá)與轉(zhuǎn)基因型正常組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);野生型、轉(zhuǎn)基因型糖尿病組NLPR3、Caspase1、TNF-α、Active-Caspase-3蛋白表達(dá)高于野生型、轉(zhuǎn)基因型正常組(P0.05);轉(zhuǎn)基因型糖尿病組NLPR3、Caspase1、TNF-α、Active-Caspase-3蛋白表達(dá)低于野生型糖尿病組(P0.05)。(3)PCR法檢測(cè)大腦組織IL-1β、IL-18的表達(dá)在正常組、高脂組、糖尿病組中,糖尿病組的IL-1β、IL-18mRNA的表達(dá)較正常組和高脂組升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);正常組與高脂組比較,IL-1β、IL-18mRNA的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在野生型正常組、野生型糖尿病組、轉(zhuǎn)基因型正常組、轉(zhuǎn)基因型糖尿病組四組中,野生型正常組IL-1β、IL-18 mRNA的表達(dá)與轉(zhuǎn)基因型正常組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);野生型、轉(zhuǎn)基因型糖尿病組IL-1β、IL-18mRNA表達(dá)高于野生型、轉(zhuǎn)基因型正常組(P0.05);轉(zhuǎn)基因型糖尿病組IL-1β、IL-18mRNA的表達(dá)低于野生型糖尿病組(P0.05)。(4)比色法測(cè)定大腦組織超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性,及丙二醛(MDA)含量在正常組、高脂組、糖尿病組中,糖尿病組的SOD、GSH-PX活性低于正常組和高脂組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);正常組與高脂組比較,SOD、GSH-PX活性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);糖尿病組MDA含量高于正常組和高脂組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);正常組與高脂組比較,MDA含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在野生型正常組、野生型糖尿病組、轉(zhuǎn)基因型正常組、轉(zhuǎn)基因型糖尿病組四組中,野生型正常組SOD、GSH-PX活性及MDA含量與轉(zhuǎn)基因型正常組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);野生型、轉(zhuǎn)基因型糖尿病組SOD、GSH-PX活性低于野生型、轉(zhuǎn)基因型正常組(P0.05);轉(zhuǎn)基因型糖尿病組SOD、GSH-PX活性高于野生型糖尿病組(P0.05);野生型、轉(zhuǎn)基因型糖尿病組MDA含量高于野生型、轉(zhuǎn)基因型正常組(P0.05);轉(zhuǎn)基因型糖尿病組MDA含量低于野生型糖尿病組(P0.05);(5)病理學(xué)觀察:小鼠大腦組織HE染色示,正常組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)正常,核仁清晰,排列層次規(guī)則,呈柵欄樣排列;高脂組神經(jīng)元結(jié)構(gòu)基本正常,少見神經(jīng)元細(xì)胞退變;糖尿病組海馬CA1區(qū)見大量神經(jīng)元胞體縮小變形,核固縮,染色質(zhì)凝集,呈深伊紅色,細(xì)胞排列紊亂;轉(zhuǎn)基因型糖尿病組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元病理形態(tài)結(jié)構(gòu)及排列層次均改善,細(xì)胞變性壞死減少。結(jié)論:(1)糖尿病小鼠大腦組織中,神經(jīng)炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激水平增加,腦組織受損;(2)糖尿病環(huán)境可誘導(dǎo)大腦組織中HSP22的表達(dá);(3)上調(diào)HSP22的表達(dá),可減輕糖尿病小鼠大腦組織中炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激水平,改善腦組織損傷。
【學(xué)位單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R587.2
【部分圖文】：

圖 3.1 Western Blot 法檢測(cè)小鼠腦組織 HSP22 蛋白表達(dá)（n=3）圖 3.2 Western Blot 法檢測(cè)小鼠腦組織 HSP22 蛋白表達(dá)的比較（n=3）(注：兩組之間比較，*為 P<0.05；**為 P<0.01；NS 為 P>0.05)

18圖 3.2 Western Blot 法檢測(cè)小鼠腦組織 HSP22 蛋白表達(dá)的比較（n=3(注：兩組之間比較，*為 P<0.05；**為 P<0.01；NS 為 P>0.05)大腦組織 NLRP3 炎癥小體相關(guān)蛋白的表達(dá)rn Blot 法檢測(cè)正常對(duì)照組、高脂組、糖尿病組小鼠大腦組 蛋白的表達(dá)（見圖 3.3），結(jié)果顯示，與正常組比較，糖尿病組 蛋白表達(dá)明顯升高（P<0.01），高脂組 NLRP3、Caspase-1 高趨勢(shì)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與高脂組比較，Caspase-1 蛋白表達(dá)升高（P<0.05）（見圖 3.4、3.5）。

.3 Western Blot 法檢測(cè)小鼠腦組織 NLRP3、Caspase-1 蛋白表達(dá)（n 3.4 Western Blot 法檢測(cè)小鼠腦組織 NLRP3 蛋白表達(dá)的比較（n=3（注：兩組之間比較，*為 P<0.05；**為 P<0.01；NS 為 P>0.05）

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 譚巍;任澎;;JAK/STAT信號(hào)通路與小分子熱休克蛋白22在心力衰竭中的研究[J];嶺南心血管病雜志;2017年01期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 葉燕平;在ox-LDL致內(nèi)皮細(xì)胞損傷中HSP22的保護(hù)作用及他汀的干預(yù)作用[D];南昌大學(xué);2014年

本文編號(hào)：2811330