【目的】:通過比較高尿酸血癥(Hyperuricemia,HUA)小鼠與正常小鼠的牙槽骨的骨微結(jié)構(gòu)、骨量、破骨及成骨能力初步探究HUA對小鼠牙槽骨骨微結(jié)構(gòu)、骨量、骨代謝及增齡性變化趨勢的影響�！痉椒ā�:1、實驗動物分組:8周齡及32周齡的尿酸氧化酶基因敲除(urate oxidase gene knocked out,Uox-KO)小鼠各4只為實驗組,8周齡及32周齡的野生型(Wild type,WT)小鼠各4只作為對照組。實驗前檢測所有小鼠的尿酸,血糖及體重分別為:Uox-KO組小鼠的血清尿酸濃度大于WT組小鼠;同周齡兩組小鼠的體重、血糖間無差異。2、解剖分離每只小鼠的雙側(cè)上下頜骨。3、牙槽骨骨微結(jié)構(gòu)的檢測分析(1)Micro-CT掃描后,通過影像圖及三維重建后矢狀向切面圖的觀察,分析第一磨牙牙根之間牙槽骨的骨質(zhì)破壞的特點。(2)牙槽骨的骨微結(jié)構(gòu)的檢測:觀察分析牙槽骨的骨微結(jié)構(gòu),檢測BV/TV值、Tb.N值、Tb.Th值、Tb.Sp值。4、牙槽骨骨代謝的檢測:上頜骨行HE染色,OCN、OPN免疫組化染色檢測成骨活性,RANKL蛋白的染色檢測破骨活性,并觀察、比較分析牙槽骨的骨代謝情況。5、牙頸部牙槽骨吸收高度的測量:下頜骨經(jīng)亞甲藍(lán)染色后分別測量比較下頜兩側(cè)第一磨牙近遠(yuǎn)中的牙槽嵴頂至釉牙骨質(zhì)界的距離,兩側(cè)測量結(jié)果取平均值作為每只小鼠的牙頸部牙槽骨吸收的最終高度,以此高度間接反應(yīng)牙槽骨的骨量。6、用GraphPad Prism7.0統(tǒng)計軟件比較分析Uox-KO與WT小鼠間以及每組不同周齡小鼠的牙槽骨骨小梁微結(jié)構(gòu)、牙槽骨骨量、牙槽骨成骨和破骨活性的差異�！窘Y(jié)果】:1、牙槽骨骨微結(jié)構(gòu)的檢測分析:(1)Micro-CT掃描后的影像圖及重建后矢狀向切面圖均未見8周齡Uox-KO與WT小鼠第一磨牙牙根之間牙槽骨骨質(zhì)破壞的明顯差別;32周齡Uox-KO組小鼠掃描后的影像圖及重建后矢狀向切面圖均發(fā)現(xiàn)牙槽骨骨質(zhì)破壞面積比WT組小鼠小。(2)牙槽骨的骨微結(jié)構(gòu)檢測結(jié)果:與8周齡小鼠相比,Uox-KO組和WT組32周齡小鼠的BV/TV、Tb.N較小(P0.05),Tb.Sp較大(P0.05),Uox-KO組32周齡小鼠Tb.Th較大(P0.05)。32周齡Uox-KO組小鼠的BV/TV和Tb.N均大于WT組小鼠(P0.05),Tb.Sp小于WT組小鼠(P0.05)。2、牙槽骨骨代謝檢測結(jié)果:HE染色比較發(fā)現(xiàn),Uox-KO組和WT組的32周齡小鼠牙槽骨均發(fā)生了明顯的缺損,骨陷窩面積大而多。32周齡小鼠的HE染色可見兩組小鼠均存在牙槽骨被吸收后的骨陷窩,免疫組化染色結(jié)果未見明顯差異。8周齡小鼠的免疫組化染色結(jié)果為Uox-KO組小鼠的OPN、OCN染色比WT組顏色深,僅Uox-KO組小鼠OCN染色圖片的平均光密度值大于WT組(P0.05);RANKL染色未見明顯差別。3、牙頸部牙槽骨骨吸收高度測量結(jié)果:Uox-KO組32周齡小鼠下頜第一磨牙近中牙頸部牙槽骨吸收高度大于8周齡小鼠(P0.05);32周齡Uox-KO組小鼠的下頜第一磨牙遠(yuǎn)中的牙槽骨吸收高度大于WT組小鼠(P0.05)。8周齡Uox-KO組與WT組小鼠的牙槽骨吸收高度未見明顯差異�！窘Y(jié)論】:1、HUA影響8周齡至32周齡生長過程中的小鼠牙槽骨骨微結(jié)構(gòu)和骨代謝的變化,在此生長過程中,HUA小鼠的骨質(zhì)疏松趨勢沒有正常小鼠明顯,并且32周齡HUA小鼠較同周齡正常小鼠的骨小梁結(jié)構(gòu)破壞丟失得少,說明HUA可能會降低小鼠骨質(zhì)疏松的趨勢,保護(hù)牙槽骨組織。2、小鼠的牙槽骨存在增齡性變化趨勢,隨年齡增長,小鼠牙槽骨骨微結(jié)構(gòu)破壞,骨陷窩增多,存在骨質(zhì)疏松趨勢。
【學(xué)位單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R589.7
【部分圖文】：

自青島大學(xué)附屬醫(yī)院山東省于青島大學(xué)附屬醫(yī)院 SPF 實燈光、飲水及飲食。如下分組：尿酸氧化酶基因敲除（ura青少年和成年 Uox-KO 小周出生的 8 周齡及 32 周齡和成年實驗組小鼠的對照小測，小鼠檢測的基本信息如ox-KO 組和 WT 組小鼠基第 1 泳道所示。WT 組小鼠只具有 202bp 和 250bp 兩個條 2.1）。

且不同周齡小鼠間以及 Uox-KO 小鼠與 WT 小鼠間無顯著性差異，可排除糖病造成的牙槽骨吸收（表 2.1、圖 2.2）。表 2.1 Uox-KO 與 WT 組小鼠間的尿酸、體重及血糖濃度的比較（ ±s，n=4）Uox-KO 組 WT 組 P8 周齡尿酸（μmol/L） 454.50 ± 64.17 120.50 ± 13.39 0.003**體重（g） 17.25 ± 0.49 20.00 ± 1.03 0.053血糖（nmol/L） 7.86 ± 0.94 8.53 ± 0.93 0.62932 周齡尿酸（μmol/L） 470.30 ± 70.87 193.50 ± 20.34 0.004**體重（g） 28.55 ± 1.05 27.65 ± 0.82 0.525血糖（nmol/L） 7.93 ± 0.58 9.056 ± 0.78 0.292** P<0.01

圖 2.3：動物解剖顯微鏡下的上下頜骨(左為上頜骨，右為下頜骨)2.2 骨微結(jié)構(gòu)的檢測分析將小鼠上頜骨行 Micro-CT 掃描，分析檢測小鼠牙槽骨的骨微結(jié)構(gòu)及三維圖像中槽骨特點；固定后的上頜骨通過 Micro-CT（uCT-50 , SCANCO Medical AG,abrikweg2, CH-8306 Bruettisellen, 瑞士）進(jìn)行骨組織斷層掃描及重建。掃描條件為：壓 70KV，掃描電流為 200uA，分辨率為 8um，每個樣本掃描時間大概為 1 小時。興趣區(qū)域（the region of interest，ROI）的選擇：選擇上頜骨第一磨牙牙根之間的槽骨作為骨微結(jié)構(gòu)定量分析的區(qū)域，在此區(qū)域選擇近似位置的 400*400*400 微米積的組織行三維立體分析。（1）三維重建圖像的比較：取經(jīng)第一磨牙近遠(yuǎn)中邊緣嵴中點連線并垂直于咬合的矢狀向切面圖進(jìn)行觀察比較第一磨牙牙根之間牙槽骨骨質(zhì)缺損的特點。（2）骨微結(jié)構(gòu)的分析參數(shù)：使用 Micro-CT 自帶的分析軟件分別對兩個周齡的組小鼠 ROI 區(qū)域進(jìn)行骨定量分析，分析指標(biāo)為；相對骨體積或骨體積分?jǐn)?shù)（BV/TV）、

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10 姚曉琳;

本文編號：2809309