【摘要】：目的:探討曲克蘆丁對卵巢切除誘導的骨質疏松小鼠骨量的影響及其對破骨細胞和成骨細胞的作用機制。方法:在體內動物實驗中,給經(jīng)過假手術或卵巢切除術的雌性小鼠腹腔內注射生理鹽水、50mg/kg曲克蘆丁或150mg/kg曲克蘆丁 6周,然后處死并用于微型計算機斷層攝影術(micro-CT)分析、組織學分析和生物力學測試。在體外細胞實驗中,用不同濃度的曲克蘆丁處理自RAW264.7細胞分化而來的破骨細胞和自MC3T3-E1細胞分化而來的成骨細胞,以探究曲克蘆丁對破骨細胞的形成及其骨吸收功能和成骨細胞的分化及其鈣化能力的影響。結果:在體內實驗中,曲克蘆丁通過減少破骨細胞生成和促進成骨生成來防止去卵巢小鼠中的皮質骨和小梁骨的丟失。在體外實驗中,曲克蘆丁抑制分化自RAW264.7的破骨細胞的形成和骨吸收功能以及活化T細胞核因子1(NFATcl)和組織蛋白酶K(CTSK)的表達。同時,曲克蘆丁通過增強Runt相關的轉錄因子2(Runx2)、Osterix和I型膠原蛋白αl亞基(COL1A1)的表達來促進MC3T3-E1的成骨和礦化。結論:曲克蘆丁可以通過調節(jié)破骨細胞和成骨細胞的生成及活性從而預防小鼠卵巢切除所誘導的骨質疏松癥,有望用于治療絕經(jīng)后骨質疏松癥。
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R580
【圖文】：

我們首先研究了邋ＴＲＸ對ＯＶＸ小鼠引起的骨質疏松癥的影響。既往的研究逡逑表明，雌激素缺乏性小鼠骨質疏松模型的建立總是伴隨著小鼠體重的增加和子宮逡逑重量的減少［２５］，而這種現(xiàn)象也出現(xiàn)在了我們的實小鼠當中（圖１Ａ），意味著逡逑ＯＶＸ手術的有效實施。在小鼠飼養(yǎng)的６周內，Ｓｈａｍ組、Ｖｅｈｉｃｌｅ組、ＬＤ組和ＨＤ逡逑組在相同條件下腹腔注射不同濃度的ＴＲＸ并相互對照，其左側脛骨均使用逡逑Ｍｉｃｒｏ－ＣＴ進行評估。在松質骨骨小梁方面，與Ｓｈａｍ組相比，ＯＶＸ組的三維重逡逑建圖像顯現(xiàn)出相對較細且少的骨小梁（圖１Ｂ）。然而，與Ｖｅｈｉｃｌｅ組相比，ＴＲＸ逡逑治療組（ＬＤ和ＨＤ組）的ＢＷＴＶ，Ｔｂ．Ｎ和Ｔｂ．Ｔｈ以劑量依賴性顯著增加（圖逡逑１Ｃ）；同時這兩組中ＴＲＸ的施用降低了骨小梁的Ｔｂ．Ｓｐ邋（圖１Ｃ）。組織學分析進逡逑一步證實了邋ＴＲＸ對骨小梁骨質流失的保護作用（圖１Ｄ）。在Ｖｅｈｉｃｌｅ組中使用Ｈ逡逑＆Ｅ染色，與Ｓｈａｍ組相比，股骨小梁骨量顯著降低；然而，在ＴＲＸ治療組中，逡逑股骨小梁的骨量均多于Ｖｅｈｉｃｌｅ組。通過ＩｍａｇｅＪ邋（ＮＩＨ，邋Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，邋ＵＳＡ）逡逑獲得的ＢＶ／ＴＶ、Ｔｂ．Ｎ、Ｔｂ．Ｔｈ和Ｔｂ

邐正文實驗結果逡逑ＴＲＸ對皮質骨厚度的保護作用（圖２Ｃ，邋Ｄ）。股骨三點彎曲試驗進一步證實，通逡逑過腹腔內注射ＴＲＸ，有效抑制了由ＯＶＸ導致的皮質骨薄弱，表現(xiàn)為在載荷－位逡逑移曲線中，ＬＤ組和ＨＤ組的最大彎曲力和導致骨折的最大功均大于Ｖｅｈｉｃｌｅ組，逡逑但略低于Ｓｈａｍ組（圖２Ｅ）。逡逑總的來說，以上這些發(fā)現(xiàn)表明ＴＲＸ可以有效防止由卵巢切除引起的骨小梁逡逑和皮質骨中的骨量丟失。逡逑Ａ邐Ｃ逡逑Ｓｈａｍ逡逑ＳＳ邋Ｔｉｌｌ逡逑W■邋：１］逡逑Ｂ邐Ｄ逡逑ＷＨｆｔ邋ｌ？邋ｔｍ邐ＳＨＷＷ邋Ｗｈ邋ＩＬ？邋Ｗ＆逡逑Ｅｆ邐５逡逑ｉｌｉｉｉ邋ｔｌｉｌｉ逡逑圖２：邋（Ａ）脛骨皮質骨的ｍｉｃｒｏ－ＣＴ三維重建圖像。比例尺，４００（ｘｍ。（Ｂ）根逡逑據(jù)脛骨ｍｉｃｒｏ－ＣＴ掃描結果計算出的皮質厚度（Ｃｔ．Ｔｈ）。（Ｃ）股骨皮質骨的蘇逡逑木精和伊紅（Ｈ＆Ｅ）染色。比例尺，４００ｐｍ。（Ｄ）邋Ｈ＆Ｅ染色中股骨節(jié)段的皮逡逑質厚度（Ｃｔ．Ｔｈ）。（Ｅ）從股骨的三點彎曲測試獲得的最大力（ＭａｘｉｍｕｍＦｏｒｃｅ）逡逑和骨折時的做功（Ｅｎｅｒｇｙ邋ｔｏ邋ｆａｉｌｕｒｅ）。以上所有結果均以平均值±標準偏差（ｎ逡逑＝６）表示。＊代表與邋Ｖｅｈｉｃｌｅ邋組相比，＊Ｐ＜０．０５邋和＊＊Ｐ＜０．０１邋（ｔ邋檢驗）。Ｖｅｈｉｃｌｅ：逡逑ＯＶＸ＋生理鹽水；ＬＤ：邋ＯＶＸ＋低劑量邋ＴＲＸ邋（５０ｍｇ／ｋｇ）；邋ＨＤ：邋ＯＶＸ＋高劑量逡逑ＴＲＸ邋（１５０ｍｇ／ｋｇ）。逡逑１２逡逑

圖３：邋（Ａ，邋Ｂ）甲苯胺藍和抗酒石酸酸性磷酸酶（ＴＲＡＰ）染色的股骨圖像。逡逑比例尺，ｌ0（Ｈｉｍ。邋（Ｃ，邋Ｄ）成骨細胞與骨的表面積比值（ＯｂＳ／ＢＳ）和單位逡逑骨周長的成骨細胞數(shù)（ＮＯｂ／ＢＰｍ），破骨細胞與骨的表面積比值（ＯｃＳ／ＢＳ）逡逑和單位骨周長的破骨細胞數(shù)（ＮＯｃ／ＢＰｍ）。（Ｅ－Ｈ）股骨的免疫組織化學染色。逡逑比例尺，ｌＯＯ＾ｏｎ。計算堿性磷酸酶（ＡＬＰ）陽性細胞數(shù)和活化Ｔ細胞核因子１逡逑（ＮＦＡＴｃｌ）陽性細胞數(shù)。以上所有結果均以平均值±標準偏差（ｎ＝邋６）表示。逡逑＊代表與邋Ｖｅｈｉｃｌｅ邋組相比，＊Ｐ邋＜０．０５邋和＊＊Ｐ邋＜０．０１邋（ｔ邋檢驗）。Ｖｅｈｉｃｌｅ：邋ＯＶＸ＋生逡逑理鹽水；ＬＤ：邋ＯＶＸ＋低劑量邋ＴＲＸ（５０ｍｇ／ｋｇ）；邋ＨＤ：邋ＯＶＸ＋高劑量邋ＴＲＸ（１５０ｍｇ逡逑／ｋｇ）0逡逑３．２邋ＴＲＸ于體內可以調節(jié)由成骨細胞和破骨細胞介導的骨代謝。逡逑１

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1 記者 葉明e

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