【摘要】：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)患者在疾病發(fā)生過(guò)程中往往會(huì)伴隨著不同程度的骨損傷,如關(guān)節(jié)僵直、變形等,而破骨細(xì)胞在骨的破壞和吸收中起到至關(guān)重要的作用。單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、不成熟DC及MDSC均可以作為前體細(xì)胞在RANK-RANKL信號(hào)通路的作用下向破骨細(xì)胞分化。巨噬細(xì)胞作為機(jī)體重要的免疫細(xì)胞之一,在體內(nèi)外不同的微環(huán)境的影響下可分化成具有不同功能的表型,主要包括兩大類,即經(jīng)典活化型巨噬細(xì)胞M1和替代活化型巨噬細(xì)胞M2。有文獻(xiàn)報(bào)道在RA病人關(guān)節(jié)腔浸潤(rùn)的炎性細(xì)胞中,CD163+CD206+M2巨噬細(xì)胞占很高的比例,但其在RA中的作用尚不明確,其是否能夠向破骨細(xì)胞分化尚未可知。本課題旨在探討M2型巨噬細(xì)胞在RA中發(fā)揮的骨破壞作用,并對(duì)其分子機(jī)制進(jìn)行深入研究。首先,我們用MSCF和IL-4在體外分化了人和小鼠M2表型的巨噬細(xì)胞,在此基礎(chǔ)上用M-CSF和RANKL誘導(dǎo)其分化6-9天后,結(jié)果發(fā)現(xiàn)M-CSF和RANKL可以誘導(dǎo)M2型巨噬細(xì)胞分化成有功能的破骨細(xì)胞(TRAP染色、F actin-ring染色、Q-PCR及骨破壞功能檢測(cè)實(shí)驗(yàn))。且我們比較了體外分化的人和小鼠M0、M1、M2三種巨噬細(xì)通過(guò)M-CSF+RANKL誘導(dǎo)向破骨細(xì)胞分化的能力,發(fā)現(xiàn)M2巨噬細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化的能力更強(qiáng)。我們建立了膠原蛋白誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎的小鼠模型,通過(guò)流式分選的辦法從發(fā)病小鼠骨髓及發(fā)病關(guān)節(jié)中分選出M1和M2巨噬細(xì)胞并在體外利用M-CSF+RANKL誘導(dǎo)分化,結(jié)果發(fā)現(xiàn)無(wú)論是骨髓還是發(fā)病關(guān)節(jié)中M2巨噬細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化的能力都是明顯強(qiáng)于M1表型的細(xì)胞。流式結(jié)果顯示,M2型巨噬細(xì)胞表面表達(dá)更高水平的CD206和RANK,這可能是導(dǎo)致其更容易向破骨細(xì)胞分化的原因。CD206的配體甘露糖能夠明顯阻斷M2表型的巨噬細(xì)胞向破骨細(xì)胞的分化,這進(jìn)一步驗(yàn)證了CD206在M2向破骨細(xì)胞分化過(guò)程中的作用。我們也將健康人外周血單核細(xì)胞中CD14+CD206+和CD14+CD206-的單核細(xì)胞分選出來(lái)并在體外用M-CSF+RANK誘導(dǎo)分化,結(jié)果同樣是CD206+的細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化的能力強(qiáng)于CD206-的細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn),在RA患者血清中乳鐵蛋白免疫復(fù)合物(LTF-IC)水平顯著升高,且能夠通過(guò)單核細(xì)胞表面的CD32a誘導(dǎo)其分化成破骨細(xì)胞。在本課題中我們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)LTF-IC能誘導(dǎo)人M2細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化,且CD32的阻斷性抗體及syk的抑制劑均能夠有效地阻斷LTF-IC誘導(dǎo)M2細(xì)胞分化為破骨細(xì)胞,提示CD32及其下游信號(hào)分子在此過(guò)程中發(fā)揮主要作用�？傊�,本課題發(fā)現(xiàn)了不管是經(jīng)典途徑(M-CSF+RANKL)還是非經(jīng)典途徑(LTF-IC)均可誘導(dǎo)CD206高表達(dá)的M2型巨噬細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化。這為破骨細(xì)胞的形成提供新的信號(hào)途徑及為臨床治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎提供了新的靶點(diǎn)和思路。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R593.22
【圖文】：

康志愿者外周血，利用密度梯度離心法分離人的外周血 blood mononuclear cell, PBMC），接著利用美天旎 CD14 陽(yáng)選細(xì)胞分離出來(lái)，并對(duì)其分選純度進(jìn)行流式鑒定，如圖 2-1 所純度的 CD14+單核細(xì)胞，為人巨噬細(xì)胞的分化提供基礎(chǔ)。

圖 2-2 人單核細(xì)胞來(lái)源的巨噬細(xì)胞表型鑒定ure 2-2. Phenotype identification of human monocyte-derived macrophages. Hnocyte-derived M0/M1/M2 macrophages were stained with PE-conjugated anti-human CC-conjugated anti-human CD163, PE-conjugated anti-human CD206, APC-conju

檢測(cè)其細(xì)胞培養(yǎng)上清中腫瘤壞死因子（TNF-α）及白介素-10（I如圖 2-3 所示，經(jīng) LPS 活化后的 M0 及 M1 細(xì)胞，釋放大量 TNF-α[21胞則釋放大量 IL-10。上述 M0、M1、M2 細(xì)胞活化后，其細(xì)胞因子獻(xiàn)報(bào)道一致。

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本文編號(hào)：2800065