【摘要】：目的糖尿病性視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病的一種常見微血管并發(fā)癥,是一種神經(jīng)血管性疾病,氧化應激學說是DR主要發(fā)病機制之一。高血糖或糖尿病(diabetes mellitus,DM)時氧化應激反應將增強并導致視網(wǎng)膜組織損傷。Nrf2/ARE信號通路是非常重要的內(nèi)源性抗氧化應激通路,當活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)或親電試劑刺激核因子EF-E2相關因子(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)時,Nrf2轉(zhuǎn)移入核內(nèi),識別并結合抗氧化反應元件(antioxidant response element,ARE),啟動血紅素氧合酶1(heme oxygenase 1,HO-1)等下游抗氧化基因蛋白的轉(zhuǎn)錄,增強細胞抗氧化能力,減輕氧化應激損傷,從而保護視網(wǎng)膜。本實驗通過采用高脂高糖飲食結合腹腔注射小劑量鏈脲佐菌素(strepptozotocin,STZ)的方法制備2型糖尿病大鼠模型,研究叔丁基對苯二酚(tert-butyl hydroquinone,t BHQ)對2型糖尿病大鼠視網(wǎng)膜不同時間節(jié)點Nrf2/ARE信號通路表達的影響,探討t BHQ對視網(wǎng)膜是否具有保護作用及其機制,以期為DR防治提供理論依據(jù)。方法選取體重在180~200g的4w齡SD雄性大鼠60只,適應性喂養(yǎng)1w后,隨機分成正常對照組(NC組,n=20)和造模組(n=40),NC組給與基礎飼料喂養(yǎng),造模組給予高脂高糖飼料喂養(yǎng),1月后待造模組大鼠空腹12h之后給與腹腔注射30mg/kg的小劑量stz建立2型糖尿病大鼠模型(7d后尾部采血測定空腹血糖濃度若大于16.7mmol/l說明建立模型成功),nc組予以相同體積的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液腹腔注射作為對照。造模成功者,隨機分成糖尿病組(dm組)、藥物干預組(tbhq組)。tbhq組于成模后1w使用添加1%tbhq的高脂高糖飼料喂養(yǎng),而nc組、dm組飼養(yǎng)方法不變。tbhq干預的第4w、第12w末時,檢測各組大鼠體重,心臟穿刺采血測定其血糖、血脂水平。取大鼠眼球,部分用于he染色觀察視網(wǎng)膜組織結構的改變及免疫組化檢測nrf-2、ho-1蛋白在視網(wǎng)膜組織中的分布,剩余眼球視網(wǎng)膜組織用于熒光定量pcr檢測nrf-2、ho-1mrna在視網(wǎng)膜組織中的表達。結果1、35只大鼠成功建立了2型糖尿病大鼠模型,成模率為87.5%。2、一般情況:dm組、tbhq組大鼠逐漸出現(xiàn)體重減輕、精神萎靡、反應遲鈍、多食、多尿、多飲等癥狀,tbhq組上述情況較dm組輕,接近于nc組。nc組大鼠體重正常、精神佳、飲食飲水正常。3、生化指標與nc組相比,4w與12wdm組血糖明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(t=3.015,2.977,p=0.000,0.000,均p0.01);與nc組相比,4w與12wtbhq組血糖明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(t=5.915,5.018,p=0.000,0.000,均p0.01);與12wdm組相比,12wtbhq組的血糖下降,差異有統(tǒng)計學意義(t=3.415,p=0.002,p0.01);與nc組相比,4w與12wdm組總膽固醇(tc)、甘油三酯(tg)、低密度脂蛋白膽固醇(ldl)升高,差異有統(tǒng)計學意義(ftc=65.641,ftg=63.415,fldl=61.241,p=0.01,0.01,0.01,均p0.05),高密度脂蛋白膽固醇(hdl)降低(fhdl=58.317,p=0.02,p0.05)。與nc組相比,4w與12wtbhq組總膽固醇(tc)、甘油三酯(tg)、低密度脂蛋白膽固醇(ldl)升高(ftc=48.810,ftg=51.443,fldl=53.127,p=0.03,0.02,0.02,均p0.05),高密度脂蛋白膽固醇(hdl)降低(f=49.312,p=0.03,p0.05)。4、組織學變化:he染色顯示,4wnc組大鼠視網(wǎng)膜組織結構清晰,未見明顯病理改變;dm組大鼠視網(wǎng)膜細胞排列稍紊亂,內(nèi)外核層稍融合,出現(xiàn)不同程度細胞水腫的現(xiàn)象;tbhq組大鼠視網(wǎng)膜細胞排列較整齊,個別細胞可見輕度水腫。12wnc組大鼠視網(wǎng)膜組織he染色顯示視網(wǎng)膜各層結構基本正常,排列基本整齊,余未見明顯病理變化;dm組大鼠視網(wǎng)膜組織結構排列疏松,內(nèi)、外核層排列紊亂,細胞水腫現(xiàn)象明顯;tbhq組大鼠視網(wǎng)膜組織結構較清晰,部分細胞水腫,余未見明顯異常。5、免疫組織化學結果:與nc組比較,4wdm組大鼠視網(wǎng)膜組織中nrf2、ho-1蛋白表達增多(tnrf2=3.115,pnrf2=0.002,pnrf20.01;tho-1=3.485,pho-1=0.000,pho-10.01),4wtbhq組nrf2、ho-1表達高于4wdm組(tnrf2=2.473,pnrf2=0.031,pnrf20.05;tho-1=2.785,pho-1=0.024,pho-10.05);與nc組比較,12wdm組nrf2、ho-1蛋白表達增多(tnrf2=3.781,pnrf2=0.000,pnrf20.01;tho-1=3.785,pho-1=0.000,pho-10.01);12wtbhq組表達高于12wdm組(tnrf2=2.576,pnrf2=0.038,pnrf20.05;tho-1=2.879,pho-1=0.018,pho-10.05);12wdm組nrf2表達較4wdm組高,差異有統(tǒng)計學差異(t=0.276,p=0.040,p0.05);12wtbhq組nrf2、ho-1表達高于4wtbhq組,差異有統(tǒng)計學意義(tnrf2=2.516,PNrf2=0.042,PNrf20.05;tH O-1=2.776,PH O-1=0.037,PH O-10.05)。6、熒光定量PCR:與NC組比較,4w DM組Nrf2、HO-1m RNA表達增多(tNr f2=4.758,PN r f 2=0.031,PN r f 20.05;tH O-1=5.114,PH O-1=0.029,PH O-10.05);4w t BHQ組表達高于4w DM組(tN r f 2=5.133,PN r f 2=0.023,PN r f 20.05;tH O-1=4.758,PH O-1=0.033,PH O-10.05);與NC組比較,12w DM組Nrf2、HO-1 m RNA表達增多(tN r f 2=4.285,PN r f 2=0.041,PN r f 20.05;tH O-1=4.514,PH O-1=0.037,PH O-10.05);12w t BHQ組Nrf2、HO-1m RNA表達高于12w DM組(tN r f 2=4.976,PN r f 2=0.028,PN r f 20.05;tH O-1=4.251,PH O-1=0.039,PH O-10.05);12w DM組Nrf2 mRNA表達高于4w DM組,差異有統(tǒng)計學意義(t=5.114,P=0.022,P0.05);12w tBHQ組Nrf2、HO-1 mRNA表達高于4w tBHQ組,差異有統(tǒng)計學意義(tNrf2=4.292,PNrf2=0.040,PNrf20.05;tH O-1=4.974,PH O-1=0.028,PH O-10.05)。結論?t BHQ干預可以有效誘導視網(wǎng)膜組織Nrf2、HO-1的表達,增強視網(wǎng)膜組織抗氧化損傷能力,減輕氧化應激損傷,延緩DR的發(fā)展。?t BHQ干預可降低糖尿病大鼠血糖,減輕視網(wǎng)膜組織病理改變,可能成為一種新型視網(wǎng)膜保護劑。
【學位授予單位】：四川醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R587.2;R774.1
【圖文】：

周NC組石蠟切片HE染色(x40FiglR}suitofr}fana}4weekNo:g功up場HEs儷汕域x4ttQ)

周DM組石蠟切片}3E染色(x4Fig2Resultofretina運4waek))MgroubyHEsfai}(x41})

- 26 -12w NC 組大鼠視網(wǎng)膜組織 HE 染正常，排列基本整齊，個別細胞輕度水4)； DM 組大鼠視網(wǎng)膜組織結構排列疏桿細胞層排列紊亂，細胞水腫現(xiàn)象明顯分融合，部分視網(wǎng)膜可見神經(jīng)上皮層與tBHQ 組大鼠視網(wǎng)膜組織結構較清晰，

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本文編號：2792769