【摘要】：目的:通過觀察和測量煤煙燃燒產(chǎn)生的細(xì)顆粒物(Particulate matter 2.5,PM2.5)對卵清白蛋白(Ovalbumin,OVA)建立的哮喘小鼠模型的炎性損傷及病理改變,研究煤煙PM2.5對OVA建立的哮喘小鼠模型體內(nèi)與天然免疫關(guān)系密切的白細(xì)胞介素(Interleukin,IL)、細(xì)胞炎性因子表達(dá)的影響,為揭示燃煤PM2.5參與和加重哮喘的相關(guān)途徑和機制提供依據(jù)。方法:1.PM2.5采集:以某地散裝煙煤為樣,采用空氣采樣器,裝備PM2.5濾膜,燃煤燃燒時進(jìn)行PM2.5采集,采集完畢后對濾膜進(jìn)行超聲水洗,過濾后低溫真空干燥。2.動物分組和模型建立:將40只6周齡雄性昆明小鼠隨機分為四組(Control組、OVA組、PM2.5組、OVA+PM2.5組)。致敏階段OVA組及OVA+PM2.5組腹腔注射10μgOVA和1mgAl(OH)3混懸液,Control組及PM2.5組腹腔注射等量的PBS,1周/次,共3次。激發(fā)階段OVA組及OVA+PM2.5組采取霧化吸入PBS配置的10mg/mlOVA進(jìn)行激發(fā),Control組及PM2.5組采取霧化吸入PBS,每次30min,1次/3day,共六次,其中PM2.5組及OVA+PM2.5霧化吸入前鼻腔滴注4μg/μl的PM2.5混懸液5μl,左右鼻孔各一次。3.組織處理和因子檢驗:組織采集在染毒完畢后24小時內(nèi)進(jìn)行。主要采集小鼠支氣管肺泡灌洗液、右上肺組織。BALF離心后分離沉淀涂片,鏡下觀察炎性細(xì)胞分布,上清液酶聯(lián)免疫吸附法檢測IL-4、IL-7、IL-8、IL-17、轉(zhuǎn)化生長因子β1(Transforming growth factorβ1,TGF-β1)、γ干擾素(Interferonγ,IFN-γ)、血清內(nèi)特異性免疫球蛋白(Immunoglobulins,Ig)E、IgG1。肺組織與電鏡切片取后送檢,Real-time Polymerrase chain reaction(RT-PCR)檢測肺組織內(nèi)IL-7mRNA、IFN-γmRNA的水平。結(jié)果:1.Control組小鼠行為正常,無明顯改變;OVA組小鼠可觀察到抓耳洗面行為,呼吸偶有起伏劇烈;PM2.5組小鼠偶見抓耳,煩躁不安;OVA+PM2.5組小鼠呼吸可聞及加深加快,多數(shù)出現(xiàn)抓耳行為,煩躁易怒。肉眼觀察肺組織Control組小鼠肺部色澤粉紅,邊緣輪廓平滑,無明顯形態(tài)學(xué)異常;OVA組肺偶見水腫,表面較粗糙;PM2.5組肺色澤較灰暗,偶見水腫,肺底表面較為粗糙;OVA+PM2.5組肺色澤異常,出現(xiàn)白色或半透明病理改變,水腫明顯,組織疏松,肺部表面失去光澤,彈性減少,邊緣粗糙,出現(xiàn)明顯的缺口狀改變。2.小鼠BALF中炎性細(xì)胞分布,OVA組單核細(xì)胞(Monocyte,Mon)、淋巴細(xì)胞(Lymphocyte,Lym)、中性粒細(xì)胞(Neutrophil,Neu)、嗜酸性粒細(xì)胞(Eosinophil,Eos)、細(xì)胞總數(shù)較Control組明顯增加(p0.05);PM2.5組Mon、Lym、Neu、Eos、細(xì)胞總數(shù)較Control組明顯增加(p0.05);OVA+PM2.5組Mon、Lym、Neu、Eos、細(xì)胞總數(shù)較其余三組均明顯增加(p0.05)。肺組織切片進(jìn)行劉氏染色后鏡下見Control組無明顯改變;OVA組可見大量嗜酸性粒細(xì)胞聚集,支氣管壁及周圍可見單核細(xì)胞及淋巴細(xì)胞,粘膜上皮細(xì)胞出現(xiàn)變形,脫落;PM2.5組肺泡內(nèi)出現(xiàn)嗜酸性粒細(xì)胞聚集,可見充血紅腫肺泡,與OVA組相比,炎性細(xì)胞較少;OVA+PM2.5組肺組織、支氣管周圍內(nèi)大量炎性細(xì)胞聚集,組織間浸潤明顯,支氣管粘膜上皮嚴(yán)重脫落,管內(nèi)大量滲出。電鏡結(jié)果:Control組毛細(xì)血管管腔部分可見中性粒細(xì)胞,II型上皮細(xì)胞胞質(zhì)中可見豐富嗜鋨板層小體;OVA組毛細(xì)血管管腔個別可見中性粒細(xì)胞,II型上皮細(xì)胞胞質(zhì)中可見少量嗜鋨板層小體,板層小體排空。線粒體未見明顯異常,細(xì)胞表面微絨毛樣突起減少、消失,可見巨噬細(xì)胞浸潤;PM2.5組可見I型上皮細(xì)胞個別腫脹明顯,II型上皮細(xì)胞胞質(zhì)中可見少量嗜鋨板層小體,板層小體排空,線粒體腫脹,細(xì)胞表面微絨毛樣突起消失;OVA+PM2.5組可見I型上皮細(xì)胞個別腫脹明顯,II型上皮細(xì)胞胞質(zhì)中可見少量嗜鋨板層小體,板層小體排空,線粒體腫脹,偶見巨噬細(xì)胞,個別肺泡隔明顯束狀膠原纖維。Elisa檢測結(jié)果,IL-4:OVA組、PM2.5組、OVA+PM2.5組均高于Control組(p0.05),OVA+PM2.5組高于其余三組(p0.05),F=26.884;IL-7:PM2.5組與Control組無明顯差異(p=0.776),其余組從低到高排列如下PM2.5OVAOVA+PM2.5(p0.05),F=15.327;IL-8:OVA+PM2.5組高于Control組、OVA組及PM2.5組(p0.05),OVA組及PM2.5組均高于Control組(p0.05),F=45.324;IL-17:四組從低到高排列如下ControlOVAPM2.5OVA+PM2.5(p0.05),F=26.744;IFN-γ:PM2.5組與Control組無明顯差異(p=0.071),其余組間均有差異(p0.05),F=17.526;TGF-β:PM2.5組與Control組無明顯差異(p=0.144),其余組間均有差異(p0.05),F=144.332。IgE:四組從低到高排列如下:ControlOVAPM2.5OVA+PM2.5,(p0.05),F=19.374;OVA-IgG1:OVA組、PM2.5組、OVA+PM2.5組均高于Control組(p0.05),OVA組高于PM2.5組(p0.05),F=33.611。RT-PCR檢測,IL7 mRNA組間僅有上升趨勢(p0.05),F=0.028;IFN-γmRNA OVA組、PM2.5組、OVA+PM2.5組的表達(dá)量低于Control組,(p0.05),F=63.651。3.IL-17析因分析結(jié)果顯示OVA與PM2.5單獨作用均可使小鼠IL-17水平上升(p0.05),且二者之間存在協(xié)同作用(p0.05),可能存在交互作用。結(jié)論:燃煤PM2.5在OVA誘導(dǎo)哮喘小鼠模型中通過影響與IL-17相關(guān)的炎癥因子,改變調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Regulatory cell,Treg)/輔助性T細(xì)胞(T helper cell,Th)平衡,進(jìn)而加重哮喘小鼠呼吸道炎性損傷及組織結(jié)構(gòu)改變。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R562.25
【圖文】：

2 結(jié)果.1 動物行為學(xué)觀察Control 組小鼠行為正常，無明顯改變；OVA 組小鼠可觀察到抓耳洗面行為，呼有起伏劇烈；PM2.5 組小鼠偶見抓耳，煩躁不安；OVA+PM2.5 組小鼠呼吸可聞深加快，抓耳頻率明顯增加，煩躁易怒。.2 肺部大體觀察Control 組小鼠肺部色澤粉紅，邊緣輪廓平滑，無明顯形態(tài)學(xué)異常；OVA 組肺偶腫，表面較粗糙；PM2.5 組肺色澤較灰暗，偶見水腫，肺底表面較為粗糙；VA+PM2.5 組肺色澤異常，出現(xiàn)白色或半透明病理改變，水腫明顯，組織疏松，表面失去光澤，彈性減少，邊緣粗糙，出現(xiàn)明顯的缺口狀改變。

遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文 唐寅2.3 小鼠 BALF 細(xì)胞分布圖 2 為小鼠 BALF 中炎性細(xì)胞分布，OVA 組 Mon、Lym、Neu、Eos、細(xì)胞總數(shù)較Control 組明顯增加(p<0.05)；PM2.5 組 Mon、Lym、Neu、Eos、細(xì)胞總數(shù)較 Control組明顯增加(p<0.05)，但與 OVA 組均無明顯差異(p 值均大于 0.05)；OVA+PM2.5 組Mon、Lym、Neu、Eos、細(xì)胞總數(shù)較其余三組均明顯增加(p 值均小于 0.05)。

注：A 為 Control 組；B 為 OVA 組；C 為 PM2.5 組；D 為 OVA+PM2.5 組圖 5：小鼠肺 HE 染色切片.5 電鏡結(jié)果Control 組毛細(xì)血管管腔部分可見中性粒細(xì)胞，I 型上皮細(xì)胞未見異常，II 型上皮胞胞質(zhì)中可見豐富嗜鋨板層小體。線粒體未見明顯異常，未見炎性細(xì)胞浸潤；OV可見毛細(xì)血管管腔個別可見中性粒細(xì)胞，I 型上皮細(xì)胞未見異常，II 型上皮細(xì)胞中可見少量嗜鋨板層小體，板層小體排空。線粒體未見明顯異常，細(xì)胞表面微絨突起減少、消失，可見巨噬細(xì)胞浸潤；PM2.5 組可見 I 型上皮細(xì)胞個別腫脹明顯I 型上皮細(xì)胞胞質(zhì)中可見少量嗜鋨板層小體，板層小體排空。線粒體腫脹，細(xì)胞表絨毛樣突起消失，未見增生；OVA+PM2.5 組可見 I 型上皮細(xì)胞個別腫脹明顯，上皮細(xì)胞胞質(zhì)中可見少量嗜鋨板層小體，板層小體排空。線粒體腫脹，偶見巨噬

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2777664