【摘要】：目的:通過觀察干擾素調(diào)節(jié)因子-1(IRF-1)在系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者外周血T淋巴細(xì)胞中的表達(dá),及其與疾病活動(dòng)性、臨床特征、實(shí)驗(yàn)室檢查及Th1型細(xì)胞因子白介素(IL)-12相關(guān)性,探討其在SLE發(fā)生發(fā)展中的可能作用。方法:(1)收集廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科2017年7月至2017年10月間病房及門診SLE的活動(dòng)期初治患者25人,并同期選取年齡性別匹配的健康對(duì)照25人,采集抗凝外周靜脈血,分離單個(gè)核細(xì)胞(PBMC),Real-timePCR法檢測患者組及對(duì)照組IRF-1mRNA表達(dá)水平,收集患者臨床資料,對(duì)IRF-1的表達(dá)與臨床指標(biāo)的相關(guān)性進(jìn)行分析;(2)選取2017年11月至2018年4月間病房及門診SLE的活動(dòng)期初治患者及健康對(duì)照者分別為35人和25人,分離PBMC,免疫磁珠法分選CD4~+T細(xì)胞,RT-PCR法檢測各組IRF-1mRNA表達(dá)水平,收集患者臨床資料,對(duì)IRF-1的表達(dá)與臨床指標(biāo)的相關(guān)性進(jìn)行分析;(3)ELISA法檢測39例患者(PBMC組16例,CD4~+T細(xì)胞組23例)及22例健康對(duì)照者外周血血漿中Th1型細(xì)胞因子IL-12表達(dá),Pearson相關(guān)分析其與臨床指標(biāo)的相關(guān)性,并進(jìn)行分析IL-12與PBMC及CD4~+T細(xì)胞中IRF-1mRNA表達(dá)的相關(guān)性;(4)選取2018年4月至2018年5月SLE的活動(dòng)期初治患者及健康對(duì)照者分別10人和8人,分離PBMC,免疫磁珠法分選CD8~+T細(xì)胞,RT-PCR法檢測患者組及對(duì)照組IRF-1表達(dá)水平,并分析其與臨床指標(biāo)的相關(guān)性。結(jié)果:(1)SLE患者PBMC中IRF-1mRNA表達(dá)較正常對(duì)照組均顯著下降(P0.01),與疾病活動(dòng)性,抗dsDNA滴度、補(bǔ)體、免疫球蛋白等實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)無相關(guān)性(P0.05),在有和無口腔潰瘍、光過敏、關(guān)節(jié)炎等臨床表現(xiàn)中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);(2)SLE患者外周血CD4~+T細(xì)胞中IRF-1mRNA表達(dá)較正常對(duì)照組下降(P0.05),與疾病活動(dòng)性及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)無相關(guān)性(P0.05),在有和無的一些常見臨床表現(xiàn)中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);(3)外周血血漿中Th1型細(xì)胞因子IL-12p70表達(dá)水平下降(P0.05),與病情活動(dòng)顯著正相關(guān)(r=0.421,P=0.008),與補(bǔ)體C4顯著負(fù)相關(guān)C4(r=-0.439,P=0.007);(4)血漿中IL-12p70表達(dá)水平與CD4~+T細(xì)胞中IRF-1mRNA表達(dá)顯著正相關(guān)(r=0.644,P=0.001),而與PBMC中IRF-1 mRNA表達(dá)無相關(guān)性(r=0.46,P=0.07);(5)外周血CD8~+T中IRF-1mRNA表達(dá)較正常對(duì)照組均顯著下降(P0.01),并與CD8~+T數(shù)量正相關(guān)(r=0.75,P=0.02),與余實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)及疾病活動(dòng)性無相關(guān)性(P0.05),在有和無的一些常見臨床表現(xiàn)中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:(1)初治SLE患者PBMC、外周血CD4~+T及CD8~+T細(xì)胞中,IRF-1mRNA表達(dá)降低,CD8~+T細(xì)胞中IRF-1mRNA表達(dá)與CD8~+T數(shù)量顯著正相關(guān)。(2)SLE患者外周血血漿中Th1型細(xì)胞因子IL-12表達(dá)水平下降,與病情活動(dòng)正相關(guān),與補(bǔ)體C4負(fù)相關(guān),并與CD4~+T細(xì)胞中IRF-1mRNA表達(dá)呈顯著正相關(guān)。(3)IRF-1可能參與SLE免疫反應(yīng),與CD4~+T及CD8~+T細(xì)胞和IL-12相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R593.241
【圖文】：

9）留在原管內(nèi)的陽選細(xì)胞可用適當(dāng)?shù)木彌_液(無菌 PBS+3-10%熱滅活進(jìn)口胎牛血清)或培養(yǎng)基重懸以備后續(xù)應(yīng)用，包括流式細(xì)胞學(xué)檢測。10）流式細(xì)胞分析細(xì)胞純度(圖 1-1)，如果純度未能達(dá)到 90％以上，將應(yīng)用以上提到的技術(shù)再次純化。11）將重懸細(xì)胞轉(zhuǎn)移至 1.5mlRNase free EP 管內(nèi)，300g 5min 離心后，倒掉上清；12）1ml PBS 重懸沉淀，300g 5min 離心，倒掉上清；13）加入 1mL Trizol，適當(dāng)?shù)恼袷幒痛荡蛑良?xì)胞完全裂解為均 溶液管中,充分混勻,室溫靜置 10min，后放至-80℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?

27圖 2-1 目的基因 IRF-1 與內(nèi)參基因 GAPDH 的基因擴(kuò)增及熔解曲線Fig2-1 Gene amplification curve and melting curve of target gene IRF-1 and reference GAPDH

者外周血 CD8+T 細(xì)胞中 IRF-1mRNA 表達(dá)與 CD8+T 細(xì)胞計(jì)數(shù)相關(guān)性orrelation between mRNA expression of IRF-1 in enriched CD8+T cells an因子 IL-12p70 在患者及健康對(duì)照組外周血血漿組與健康對(duì)照組血漿中 IL-12p70 表達(dá)水平比較檢測患者及 HC 外周血血漿中 IL-12p70 的表達(dá)，結(jié)果L-12p70 水平低于正常對(duì)照組（p=0.03）。詳見表 4- IL-12p70 細(xì)胞因子濃度 SLE（n，mean±SD） HC（n，mean±SD） 0(pg/ml) 39，0.98±2.9 22，1.15±0.25

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本文編號(hào)：2768093