【摘要】：目的:在大鼠膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型中,使用不同離子型谷氨酸受體拮抗劑,即N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-asparticacid,NMDA)受體拮抗劑MK-801及非NMDA受體拮抗劑NBQX,通過阻斷谷氨酸與相應(yīng)受體結(jié)合而產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用,進而研究兩種拮抗劑在鎮(zhèn)痛作用方面對大鼠行為的影響,以及對分子生物學(xué)指標(biāo)產(chǎn)生的影響,即應(yīng)用上述拮抗劑后大鼠血清及組織液中環(huán)氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)和Janus激酶-3(Janus-activated kinase,Jak3)等表達的變化。方法:建立大鼠CIA模型,通過體內(nèi)研究,向大鼠關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射不同離子型谷氨酸受體拮抗劑MK-801和NBQX,觀察CIA大鼠行為和分子生物學(xué)指標(biāo)的改變。行為評估內(nèi)容包括大鼠的觸痛及關(guān)節(jié)腫脹情況,觸痛情況使用機械性縮足閾值(paw-withdrawal threshold,PWT)來評價,同時使用排水法測足容積來評估腫脹情況。分子生物學(xué)指標(biāo)相關(guān)研究即由大鼠心臟采血,并取組織勻漿液,檢測血清及組織液中在拮抗劑使用后COX-2和Jak3等表達的變化。結(jié)果:MK-801和NBQX在單獨或聯(lián)合使用時均能表現(xiàn)出鎮(zhèn)痛作用(P0.01),且鎮(zhèn)痛作用持續(xù)時間均大于24 h,兩種拮抗劑均在注射后4 h達到鎮(zhèn)痛作用的峰值,且NBQX比MK-801鎮(zhèn)痛作用更強(P0.05);MK-801和NBQX在單獨及聯(lián)合使用時,均不能改變CIA大鼠的足跖腫脹(P0.05);MK-801可降低CIA大鼠COX-2的表達(P0.01),NBQX則未見此作用(P0.05);MK-801和NBQX對CIA大鼠的Jak3表達增高均未見產(chǎn)生影響(P0.05)。結(jié)論:MK-801及NBQX均可產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用,且NBQX比MK-801表現(xiàn)更強,但兩者對腫脹均未見效果;NMDA受體與COX-2炎癥通路有一定的交叉作用,而對于Jak3尚不能發(fā)現(xiàn)其與離子型谷氨酸信號通路存在交叉作用。
【圖文】：

試劑牛Ⅱ型膠原、完全弗氏佐劑和非N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-asparticacid，NMDA)受體拮抗劑NBQX購自美國Sigma公司，NMDA受體拮抗劑MK-801購自美國Selleck公司，環(huán)氧化酶-2(cyclooxygenasez-2，COX-2)、Janus激酶-3(Janus-activatedkinase，Jak3)ELISA試劑盒購自上海豐翔生物科技有限公司。1．2方法1．2．1CIA模型造模方法按文獻［6］方法，將牛Ⅱ型膠原與等體積完全弗氏佐劑充分乳化，在無菌條件下自大鼠尾根1．5～2．0cm處皮內(nèi)注射0．2mL，此為初次免疫，二次免疫以相同方法注射0．1mL，兩次免疫間相隔1周(圖1)。A，blankcontrolgroup;B，collagen-inducedarthritis．圖1動物模型Figure1Animalmodels1．2．2動物分組實驗共分為空白對照組、CIA組、CIA+MK-801組、CIA+NBQX組、CIA+MK-801+NBQX組和8．7%二甲基亞砜(dimethylsulfo-xide，DMSO)+CIA組(即溶媒組:選取DMSO終濃度較高值作為該組的DMSO濃度)共6組，每組6只。COX-2為誘導(dǎo)型表達，在空白組不表達，故檢測COX-2濃度時不設(shè)空白組。1．2．3各指標(biāo)評估時間(1)觸痛評估時間:記錄·978·北京大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)JOUＲNALOFPEKINGUNIVEＲSITY(HEALTHSCIENCES)Vol．48No．6Dec．2016

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試劑牛Ⅱ型膠原、完全弗氏佐劑和非N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-asparticacid，NMDA)受體拮抗劑NBQX購自美國Sigma公司，NMDA受體拮抗劑MK-801購自美國Selleck公司，環(huán)氧化酶-2(cyclooxygenasez-2，COX-2)、Janus激酶-3(Janus-activatedkinase，Jak3)ELISA試劑盒購自上海豐翔生物科技有限公司。1．2方法1．2．1CIA模型造模方法按文獻［6］方法，將牛Ⅱ型膠原與等體積完全弗氏佐劑充分乳化，在無菌條件下自大鼠尾根1．5～2．0cm處皮內(nèi)注射0．2mL，此為初次免疫，二次免疫以相同方法注射0．1mL，兩次免疫間相隔1周(圖1)。A，blankcontrolgroup;B，collagen-inducedarthritis．圖1動物模型Figure1Animalmodels1．2．2動物分組實驗共分為空白對照組、CIA組、CIA+MK-801組、CIA+NBQX組、CIA+MK-801+NBQX組和8．7%二甲基亞砜(dimethylsulfo-xide，DMSO)+CIA組(即溶媒組:選取DMSO終濃度較高值作為該組的DMSO濃度)共6組，每組6只。COX-2為誘導(dǎo)型表達，在空白組不表達，故檢測COX-2濃度時不設(shè)空白組。1．2．3各指標(biāo)評估時間(1)觸痛評估時間:記錄·978·北京大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)JOUＲNALOFPEKINGUNIVEＲSITY(HEALTHSCIENCES)Vol．48No．6Dec．2016

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本文編號：2760577