本文關(guān)鍵詞：津力達(dá)對(duì)高脂喂養(yǎng)大鼠胰島素抵抗及肝臟氧化應(yīng)激的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：胰島素抵抗是指外周靶器官對(duì)胰島素作用的敏感性下降。目前認(rèn)為，胰島素抵抗不僅是2型糖尿病的發(fā)病基礎(chǔ)，也是多種代謝性疾病如肥胖、代謝綜合癥的共同病理生理基礎(chǔ)。研究表明游離脂肪酸、炎癥、細(xì)胞因子、氧化應(yīng)激等多種因素共同參與胰島素抵抗的發(fā)生發(fā)展。 研究表明氧化應(yīng)激是引起胰島素抵抗的關(guān)鍵性因素。過量攝入高脂飲食可導(dǎo)致機(jī)體能量過剩，脂質(zhì)異位沉積于肌肉及肝臟，造成活性氧簇（ROS）生成過多，機(jī)體氧化應(yīng)激水平顯著增加。已證實(shí)2型糖尿病（T2DM）患者體內(nèi)氧化應(yīng)激水平增加，導(dǎo)致核酸、脂質(zhì)及蛋白質(zhì)等多種生物大分子受到不同程度的氧化損傷。最近的研究表明氧化應(yīng)激可顯著抑制胰島素信號(hào)通路。因此氧化應(yīng)激高脂誘導(dǎo)的胰島素抵抗中起著至關(guān)重要的作用，而抗氧化治療可能在一定程度上治療或預(yù)防胰島素抵抗。 津力達(dá)是由人參、黃精、蒼術(shù)（炒）、苦參等17味中藥組成的中藥復(fù)方制劑，，臨床試驗(yàn)證實(shí)其可有效降糖，改善2型糖尿病患者的癥狀。既往研究表明津力達(dá)可保護(hù)胰島β細(xì)胞，增加胰島素分泌，改善胰島素抵抗，降低血清炎癥因子水平，降低血脂水平。但津力達(dá)通過何種機(jī)制改善胰島素抵抗仍不明確。黃精作為津力達(dá)的主要成分之一，具有明確的抗氧化作用，由此我們提出假設(shè)，津力達(dá)是否通過抗氧化作用減輕胰島素抵抗呢？ 本研究首先建立了高脂飲食誘導(dǎo)的胰島素抵抗大鼠模型，其后進(jìn)一步評(píng)價(jià)了津力達(dá)對(duì)高脂喂養(yǎng)大鼠胰島素抵抗的影響，并檢測(cè)了肝臟氧化應(yīng)激水平、胰島素信號(hào)通路及應(yīng)激信號(hào)通路的蛋白及基因表達(dá)，探討氧化應(yīng)激與胰島素抵抗的關(guān)系，從而揭示津力達(dá)改善胰島素抵抗的分子機(jī)制，為臨床用藥提供理論依據(jù)。 目的：研究中藥復(fù)方制劑津力達(dá)對(duì)高脂喂養(yǎng)的大鼠胰島素抵抗及肝臟氧化應(yīng)激的影響，探討津力達(dá)改善胰島素抵抗的機(jī)制。 方法：雄性SD大鼠48只（體重125g-145g），適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為2組：正常對(duì)照組（Con）12只，高脂飲食組（HF）36只，正常對(duì)照組給予予普通飼料喂養(yǎng)，熱量組成：碳水化合物65.5%，脂肪10.3%，蛋白質(zhì)24.2%，總熱量為348kcal/100g；高脂飲食組給予高脂飼料喂養(yǎng)，熱量組成:碳水化合物20.1%，脂肪59.8%，蛋白質(zhì)占20.1%，總熱量為501kcal/100g。為評(píng)估大鼠整體胰島素敏感性，于喂養(yǎng)后6周后每組隨機(jī)選6只大鼠，行高胰島素-正葡萄糖鉗夾試驗(yàn)，腹腔注射葡萄糖耐量試驗(yàn)（IPGTT），計(jì)算葡萄糖輸注率（GIR）、葡萄糖曲線下面積（AUCglu）；隨后處死大鼠，留取血及肝臟組織標(biāo)本。測(cè)定大鼠空腹血糖（FBG）、血清胰島素（FINS）；油紅O染色觀察大鼠肝臟形態(tài)變化。6周高脂飲食誘導(dǎo)胰島素抵抗大鼠成模后，將剩余高脂飲食大鼠隨機(jī)分為五組（n=6）：高脂組（HF）、津力達(dá)低劑量組，（JLD-L）（0.75g/kg）、津力達(dá)中劑量組（JLD-M）（1.5g/kg）、津力達(dá)高劑量組（JLD-H）（3.0g/kg）和二甲雙胍組(Met)（0.2g/kg)，正常飲食組（Con）繼續(xù)喂以普通飼料，分別干預(yù)8周。于第8周行高胰島素-正葡萄糖鉗夾和IPGTT試驗(yàn)，計(jì)算AUCglu和GIR；其后處死大鼠，留取血清及肝臟標(biāo)本，測(cè)定FBG、FINS、TC、TG、游離脂肪酸（FFA）糖化血紅蛋白（HbA1c）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、總膽紅素（TBIL）、計(jì)算HOMA-IR指數(shù)；測(cè)定肝臟脂質(zhì)過氧化物（LPO）、還原型谷胱甘肽（GSH）含量，檢測(cè)總超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、過氧化氫酶（CAT）的活性，DHE熒光探針檢測(cè)肝細(xì)胞活性氧簇（ROS）含量；Real-Time PCR檢測(cè)肝臟胰島素信號(hào)通路胰島素受體（INSR）、胰島素受體底物-1（IRS-1）、蛋白激酶β（AKT）、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2（GLUT2）的mRNA表達(dá)水平；Western Blot檢測(cè)肝臟c-jun氨基末端激酶（JNK）、p38絲裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、IRS-1、AKT的總蛋白及磷酸化蛋白表達(dá)水平；油紅O染色、電鏡觀察大鼠肝臟形態(tài)變化。 結(jié)果： 1高脂飲食喂養(yǎng)6周后，各項(xiàng)指標(biāo)變化： （1）體重及攝食量：兩組大鼠實(shí)驗(yàn)起始體重?zé)o明顯差異，飼料喂養(yǎng)6周后，高脂組大鼠體重高于對(duì)照組（P0.05），每日平均攝入熱量?jī)山M間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）。提示高脂飲食喂養(yǎng)引起的體重增長(zhǎng)并不依賴于攝食量的增加。 （2）血液生化指標(biāo)：與對(duì)照組相比，高脂組大鼠FBG、FINS、HOMA-IR均顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 （3）腹腔注射葡萄糖耐量試驗(yàn)（IPGTT）：與對(duì)照組相比，高脂組0’、5’、60’、120’血糖顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；與對(duì)照組相比，高脂組葡萄糖曲線下面積（AUCglu）顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。提示高脂組大鼠餐后血糖高峰后延。 （4）高胰島素-正葡萄糖鉗夾實(shí)驗(yàn)：計(jì)算各組大鼠葡萄糖輸注率（GIR），高脂組大鼠GIR明顯低于正常對(duì)照組（減少47%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。提示高脂組大鼠出現(xiàn)明顯胰島素抵抗。 （5）肝臟油紅O染色：高脂組肝細(xì)胞可見大量脂滴，提示肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積和脂肪變性。 2藥物干預(yù)8周后，各項(xiàng)指標(biāo)變化： （1）體重及攝食量：在第8周末，高脂組大鼠體重明顯高于對(duì)照組（P0.05）；而津力達(dá)及二甲雙胍干預(yù)組體重較高脂組明顯減輕（P0.05），但仍高于對(duì)照組（P0.05）。高脂組大鼠日均攝食量明顯高于對(duì)照組（P0.05），而津力達(dá)及二甲雙胍干預(yù)組日均攝食量與高脂組及對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）。提示提示津力達(dá)可降低高脂組大鼠體重，且其減重作用不依賴于攝入熱量的減少。 （2）血液生化指標(biāo)：高脂組FBG、HbA1c、TG、ALT、AST均對(duì)照組明顯增加（P0.05），津力達(dá)及二甲雙胍干預(yù)后，上述指標(biāo)均顯著低于高脂組（P0.05），但仍高于對(duì)照組（P0.05），且津力達(dá)降脂效果優(yōu)于二甲雙胍。高脂組FINS、FFA、較對(duì)照組明顯增加，津力達(dá)及二甲雙胍干預(yù)后FINS、FFA低于高脂組（P0.05），且與正常對(duì)照組相比無明顯差異（P0.05）。高脂組TC與對(duì)照組無明顯差異（P0.05），津力達(dá)及二甲雙胍治療后TC顯著低于高脂組（P0.05）。高脂組TBIL較對(duì)照組有升高趨勢(shì)，幾組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）。 （3）整體胰島素敏感性評(píng)估：高脂組GIR較對(duì)照組明顯降低（P0.05），津力達(dá)及二甲雙胍干預(yù)后GIR明顯升高（P0.05）。IPGTT結(jié)果示：高脂組0’、5’、30’、60’、120’血糖均較對(duì)照組升高（P0.05)，津力達(dá)干預(yù)后30’、60’血糖較高脂組下降，二甲雙胍干預(yù)后5’、30’、60’、120’血糖較高脂組下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05)。高脂組大鼠AUCglu高于對(duì)照組（P0.05），經(jīng)津力達(dá)及二甲雙胍治療后AUCglu顯著低于高脂組，但仍高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。提示高脂組大鼠發(fā)生胰島素抵抗，津力達(dá)干預(yù)后大鼠糖耐量改善，胰島素敏感性有所恢復(fù)。 （4）肝臟胰島素敏感性：與對(duì)照組相比，高脂組大鼠INSR、IRS-1、PI3K、AKT、GLUT2的mRNA表達(dá)下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05)；與高脂組相比，津力達(dá)干預(yù)上調(diào)INSR、IRS-1、AKT、GLUT2的mRNA表達(dá)（P0.05)，而對(duì)PI3K無明顯影響（P0.05）；二甲雙胍干預(yù)均可上調(diào)INSR、IRS-1、PI3K、AKT、GLUT2的mRNA表達(dá)（P0.05)。與對(duì)照組相比，高脂組p-IRS-1/IRS-1比值顯著升高，p-AKT/AKT比值顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；與高脂組相比，津力達(dá)及二甲雙胍干預(yù)組p-IRS-1/IRS-1比值顯著降低，p-AKT/AKT比值顯著增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。提示高脂組大鼠肝臟對(duì)胰島素敏感性降低，胰島素信號(hào)傳導(dǎo)減弱，而津力達(dá)干預(yù)后大鼠肝臟胰島素敏感性有所恢復(fù)。 （5）肝臟氧化應(yīng)激：與對(duì)照組相比，高脂組大鼠肝臟ROS生成明顯增加，LPO含量明顯增多，GSH含量明顯下降，抗氧化酶GSH-Px、SOD明顯減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05)；兩組間CAT活力無明顯差異（P0.05）。津力達(dá)及二甲雙胍干預(yù)后，ROS、LPO含量較高脂組減少（P0.05)，GSH含量、GSH-Px、SOD、CAT活力較高脂組增高（P0.05)。提示津力達(dá)可減少肝臟的氧化應(yīng)激。 （6）JNK、p38MAPK信號(hào)通路：與對(duì)照組相比，高脂組p-JNK/JNK和p-p38MAPK/p38MAPK比值顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；與高脂組相比，津力達(dá)及二甲雙胍干預(yù)組p-JNK/JNK和p-p38MAPK/p38MAPK比值顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。提示津力達(dá)可抑制JNK和p38MAPK信號(hào)通路。 （7）油紅O染色及透射電鏡觀察：油紅O染色：高脂組大鼠肝細(xì)胞出現(xiàn)明顯脂質(zhì)沉積及脂肪變性，津力達(dá)各劑量組及二甲雙胍組均可不同程度地減輕肝臟脂質(zhì)沉積及脂肪變性。電鏡觀察：高脂組大鼠肝細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)可見大量脂滴，線粒體嵴斷裂或消失，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張；津力達(dá)各劑量組及二甲雙胍組肝細(xì)胞內(nèi)脂滴數(shù)量、體積明顯減少，線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞器超微結(jié)構(gòu)損傷明顯減輕。 結(jié)論： 1津力達(dá)可改善大鼠糖耐量異常，減輕胰島素抵抗，糾正高血糖癥、高胰島素血癥、高脂血癥等代謝紊亂，且津力達(dá)降脂效果優(yōu)于二甲雙胍。 2津力達(dá)可改善大鼠肝功能，減少肝臟脂質(zhì)沉積，減輕肝臟脂肪變性程度。 3津力達(dá)可改善大鼠肝臟氧化應(yīng)激，減少ROS生成，降低LPO含量，恢復(fù)抗氧化酶如SOD、GSH-Px、CAT活性，增加GSH含量。 4津力達(dá)可抑制肝臟JNK、p38MAPK應(yīng)激信號(hào)通路，恢復(fù)肝臟胰島素信號(hào)傳導(dǎo)，表明津力達(dá)可能通過減輕氧化應(yīng)激，從而改善胰島素抵抗。
【關(guān)鍵詞】：胰島素抵抗 津力達(dá) 氧化應(yīng)激 肝臟
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R587
【目錄】：

• 摘要4-9
• ABSTRACT9-16
• 英文縮寫16-18
• 前言18
• 材料與方法18-32
• 結(jié)果32-36
• 附圖36-53
• 附表53-58
• 討論58-62
• 結(jié)論62-63
• 參考文獻(xiàn)63-67
• 綜述 氧化應(yīng)激在肥胖及胰島素抵抗中的作用67-75
• 參考文獻(xiàn)71-75
• 致謝75-76
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷76-77

【引證文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 吳欣莉;南非傳統(tǒng)藥物Sutherlandia frutescens對(duì)小鼠糖脂代謝的影響及機(jī)制的研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2015年

2 馬玉紅;黃芪甲苷對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病血管病變的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：津力達(dá)對(duì)高脂喂養(yǎng)大鼠胰島素抵抗及肝臟氧化應(yīng)激的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：275756