【摘要】：目的:通過觀察支氣管哮喘豚鼠模型中性粒細(xì)胞中KLF2、S1PR1的表達(dá)情況,探討KLF2與S1PR1對(duì)支氣管哮喘豚鼠中性粒細(xì)胞的遷移的影響,從而為支氣管哮喘的防治提供新的思路。方法:隨機(jī)將30只豚鼠分為正常對(duì)照組、哮喘組、哮喘治療組,每組各10只;模型組及治療組通過用10%OVA及FCA致敏,1%OVA霧化激發(fā)誘導(dǎo)成支氣管哮喘模型,治療組在霧化激發(fā)前腹腔注射地塞米松治療,對(duì)照組用生理鹽水替代OVA與模型組同步實(shí)驗(yàn)。通過觀察各組豚鼠霧化激發(fā)后的癥狀變化及肺組織的病理學(xué)改變,并比較各組血及肺泡灌洗液中炎癥細(xì)胞總數(shù)及分類計(jì)數(shù),應(yīng)用肺功能檢測(cè)各組豚鼠的氣道阻力變化。分離各組豚鼠血中性粒細(xì)胞,采用Transwell小室檢測(cè)各組血中性粒細(xì)胞遷移情況,Realtime PCR、Western-blot分別檢測(cè)各組豚鼠血中性粒細(xì)胞中KLF2、S1PR1 m RNA和蛋白的表達(dá),ELISA檢測(cè)各組肺泡灌洗液及血清中S1P的蛋白表達(dá)情況,免疫熒光檢測(cè)KLF2在各組豚鼠血中性粒細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)及定位。結(jié)果:1.支氣管哮喘動(dòng)物模型的成功構(gòu)建(1)各組豚鼠霧化激發(fā)后體征變化的觀察:在OVA霧化激發(fā)期間發(fā)現(xiàn)哮喘組豚鼠出現(xiàn)明顯的呼吸頻率增快、前爪抓鼻、點(diǎn)頭呼吸、打噴嚏、咳嗽及腹肌抽搐等典型的哮喘樣癥狀,治療組豚鼠也出現(xiàn)上述癥狀但程度較哮喘組明顯減輕,正常對(duì)照組無異常反應(yīng)。(2)氣道阻力的測(cè)定:哮喘組豚鼠的氣道阻力隨著乙酰甲膽堿濃度的升高而增加,與正常對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);哮喘治療組與哮喘組比較在各濃度刺激下的氣道阻力水平下降(P0.01)。(3)肺組織的病理學(xué)觀察結(jié)果:正常對(duì)照組顯示支氣管、肺泡及肺組織結(jié)構(gòu)完整,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)少;哮喘組豚鼠顯示支氣管重塑,管腔變狹窄,肺泡及肺組織結(jié)構(gòu)破壞,管腔內(nèi)可見較多粘液栓及粘膜皺褶增生、平滑肌細(xì)胞明顯增厚及大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等典型的病理學(xué)改變,其中以中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)最明顯;治療組基底膜、平滑肌層仍有增厚,但支氣管粘膜水腫及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯好轉(zhuǎn)。(4)各組豚鼠BALF液中細(xì)胞總數(shù)及分類計(jì)數(shù):哮喘組豚鼠細(xì)胞總數(shù)(124.69±7.40、45.07±2.99)及NEU%(22.05±1.57、5.04±1.07)顯著高于正常組(P0.01),治療組較哮喘組細(xì)胞總數(shù)(88.29±7.77、124.69±7.40)及NEU%(15.11±1.33、22.05±1.57)下降(P0.01)。(5)各組豚鼠血白細(xì)胞分類計(jì)數(shù):哮喘組豚鼠血NEU%顯著高于正常組(67.04±5.56、30.74±6.02,P0.01),治療組較哮喘組NEU%下降(46.90±5.25、67.04±5.56,P0.01)。2.各組豚鼠血中性粒細(xì)胞KLF2表達(dá)及定位、KLF2m RNA和蛋白表達(dá)情況免疫熒光、Real-time PCR及Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,各組豚鼠血中性粒細(xì)胞中KLF2平均光密度、KLF2 m RNA及蛋白表達(dá)量:哮喘組哮喘治療組正常組(P均0.01)。3.各組豚鼠血清及肺泡灌洗液中S1P表達(dá)情況ELISA檢測(cè)結(jié)果表明,各組豚鼠血清及肺泡灌洗液中S1P表達(dá):哮喘組哮喘治療組正常組(P均0.01)。4.各組豚鼠血中性粒細(xì)胞S1PR1 m RNA和蛋白表達(dá)變化Real-time PCR及Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,各組豚鼠血中性粒細(xì)胞S1PR1 m RNA及蛋白表達(dá)量:哮喘組哮喘治療組正常組(P均0.01)。5.遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組豚鼠中性粒細(xì)胞的遷移情況根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選取0.1u M濃度時(shí)的S1P進(jìn)行Transwell實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示,各組豚鼠血中性粒細(xì)胞遷移率:哮喘組哮喘治療組正常組(P均0.01)。6.KLF2與S1PR1m RNA及蛋白做Pearson相關(guān)分析,結(jié)果提示二者之間呈負(fù)相關(guān)。7.KLF2、S1PR1蛋白與各組哮喘豚鼠模型中性粒細(xì)胞遷移率做Pearson相關(guān)分析,結(jié)果提示KLF2與中性粒細(xì)胞遷移率呈負(fù)相關(guān),S1PR1與中性粒細(xì)胞遷移率呈正相關(guān)。結(jié)論:1.支氣管哮喘豚鼠中性粒細(xì)胞KLF2表達(dá)減少,S1PR1表達(dá)上調(diào),經(jīng)地塞米松治療后KLF2表達(dá)較哮喘組上升,S1PR1表達(dá)較哮喘組下降。2.支氣管哮喘豚鼠中性粒細(xì)胞中KLF2與S1PR1呈負(fù)相關(guān)性。3.支氣管哮喘豚鼠中性粒細(xì)胞中KLF2可能通過減弱中性粒細(xì)胞的遷移而發(fā)揮抗炎作用。4.在支氣管哮喘豚鼠模型中,趨化因子S1P與其受體S1PR1結(jié)合可能通過促進(jìn)中性粒細(xì)胞的遷移,從而促進(jìn)哮喘的炎癥反應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R562.25

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本文編號(hào)：2749560