【摘要】：一、氟尿嘧啶誘導(dǎo)大鼠卵巢損傷模型的建立目的:建立氟尿嘧啶誘導(dǎo)的大鼠卵巢損傷模型。方法:選取具有正常動(dòng)情周期的8~10周齡雌性SD大鼠20只,隨機(jī)均分為4組:生理鹽水對(duì)照組、5-FU低、中、高劑量組:分別接受生理鹽水1ml·kg-1·d-1和5-FU 5 mg·kg-1·d-1、10 mg·kg-1·d-1、20 mg·kg-1·d-1腹腔注射,連續(xù)14天。每天進(jìn)行大鼠陰道涂片監(jiān)測(cè)動(dòng)情周期,并于給藥前、停藥時(shí)、停藥2周剪尾取血1ml檢測(cè)血清AMH、FSH和E2水平,同時(shí)記錄大鼠一般情況。于停藥時(shí)和停藥2周分批處死大鼠,取其雙側(cè)卵巢組織稱取濕重,進(jìn)行石蠟包埋,組織切片后進(jìn)行HE染色,光學(xué)顯微鏡下統(tǒng)計(jì)各級(jí)卵泡數(shù)目。結(jié)果:5-FU處理組大鼠體重均有不同程度下降,飲食量也明顯減少,低、中、高劑量組平均飲食量由正常18~20g/只分別降為15g/只、12g/只、9g/只。飲水量及小便量增加。用藥后生理鹽水組大鼠有正常動(dòng)情周期(4~5天),低劑量組雖有動(dòng)情周期,但由4~5天延長(zhǎng)至7~8天。中劑量組給藥第9天,高劑量組給藥第5天出現(xiàn)動(dòng)情周期紊亂:動(dòng)情間期延長(zhǎng),動(dòng)情期縮短,直至不出現(xiàn)動(dòng)情期。給藥前各組血清各激素水平均無(wú)差異(P0.05)。停藥時(shí),較生理鹽水組相比,低、中、高劑量組血清各項(xiàng)性激素均出現(xiàn)不同程度改變,FSH升高明顯(P0.05),E2降低明顯(P0.05),AMH降低明顯(P0.05),生長(zhǎng)卵泡和原始卵泡數(shù)目均較生理鹽水組明顯減少(P0.05),除低劑量組卵巢濕重減輕較明顯外(P0.05),中、高劑量組變化并不明顯(P0.05)。停藥2周,較生理鹽水組相比,除低劑量組FSH降至正常外,其余組各項(xiàng)性激素改變?nèi)悦黠@(P0.05),生長(zhǎng)卵泡和原始卵泡數(shù)目均較生理鹽水組明顯減少(P0.05),中、高劑量組卵巢濕重明顯減輕(P0.05)。停藥2周和停藥時(shí)相比,各組各項(xiàng)激素變化以及原始卵泡和生長(zhǎng)卵泡變化均不明顯,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),但高劑量組卵巢濕重明顯減輕(P0.05)。結(jié)論:5-FU能夠引起血清E2、FSH和AMH水平的改變,導(dǎo)致大鼠正常動(dòng)情周期紊亂甚至消失。故可以應(yīng)用5-FU 20mg/kg建立卵巢損傷的大鼠模型。二、Gn RHa對(duì)化療致卵巢損傷的保護(hù)作用目的:探討Gn RHa對(duì)5-FU誘導(dǎo)大鼠卵巢損傷的保護(hù)機(jī)制。方法:將具有正常動(dòng)情周期的雌性SD大鼠隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組(10只)、5-FU組(15只)、曲普瑞林+5-FU組(10只)、曲普瑞林+生理鹽水組(10只)四組(分別標(biāo)記為A、B、C、D)。A組:給予1ml·kg-1生理鹽水腹腔注射,間隔1天,一共14次。B組:5-FU按20mg·kg-1劑量腹腔注射,間隔1天給藥,一共14次。C組:分別于實(shí)驗(yàn)前14天及給予5-FU后14天,按0.1mg·kg-1劑量曲普瑞林,深部肌肉注射,5-FU的用法及用量同B組。D組:曲普瑞林用法及用量同C組,生理鹽水用法及用量同A組。實(shí)驗(yàn)前、給藥第14天、28天和停藥1周、2周時(shí)留取各組血標(biāo)本,用于測(cè)定血清中的AMH、FSH和E2水平,并在停藥1周和2周時(shí)動(dòng)情間期分批處死大鼠,取兩側(cè)卵巢,稱取濕重。一側(cè)卵巢組織用10%中性福爾馬林溶液固定,進(jìn)行石蠟包埋。連續(xù)5μm切片后HE染色,光鏡觀察并計(jì)數(shù)各期卵泡數(shù)目及免疫組化檢測(cè)Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)情況。另一側(cè)卵巢組織用于提取蛋白,進(jìn)行Western-Blot實(shí)驗(yàn)。試驗(yàn)期間每天進(jìn)行陰道脫落細(xì)胞涂片觀察大鼠動(dòng)情周期。結(jié)果:①大鼠動(dòng)情周期變化:A組均為正常動(dòng)情周期。B組給予5-FU后經(jīng)過(guò)1次完整動(dòng)情周期后出現(xiàn)動(dòng)情周期紊亂,繼續(xù)給藥后甚至不出現(xiàn)動(dòng)情期,僅有動(dòng)情間期。停藥1周時(shí)均未恢復(fù)正常動(dòng)情周期;停藥2周時(shí),21.6%恢復(fù)正常動(dòng)情周期(3/14)。C組和D組在應(yīng)用曲普瑞林后經(jīng)過(guò)1次完整動(dòng)情周期后不再出現(xiàn)動(dòng)情期。C組停藥第3天先出現(xiàn)動(dòng)情周期延長(zhǎng)至10天,隨后逐漸恢復(fù)正常動(dòng)情周期,D組停藥第4~5天恢復(fù)正常動(dòng)情周期。②血清激素水平變化:實(shí)驗(yàn)前各組血清AMH、E2和FSH濃度沒(méi)有明顯差異(P0.05)。給藥第14天,B組血清AMH和E2濃度較其余三組明顯下降(P0.05),血清FSH濃度雖有所升高,但差異不明顯(P0.05);C組AMH水平較A組下降明顯(P0.05)。給藥第28天,B組血清AMH、E2和FSH濃度均較其余三組差異顯著(P0.05);C組僅AMH水平較A組下降明顯(P0.05),E2和FSH下降并不明顯(P0.05)。停藥1周和2周時(shí),B組血清AMH和E2水平較給藥結(jié)束時(shí)均有所升高,血清FSH有所下降,但仍與其余三組有顯著差異(P0.05);C組較A、D組差異均不明顯(P0.05)。③大鼠卵巢濕重比較:停藥1周時(shí),B組卵巢濕重明顯比A組減輕(P0.05);停藥2周時(shí),B組卵巢濕重雖有增加,但仍然輕于其余組(P0.05),C組與D組相比無(wú)明顯差異(P0.05)。各組間前后比較均沒(méi)有明顯變化(P0.05)。④原始卵泡和生長(zhǎng)卵泡計(jì)數(shù):停藥1周時(shí):B組原始卵泡比A組明顯減少(P0.05),B、C、D三組生長(zhǎng)卵泡均比A組明顯減少(P0.05),C和D組的原始卵泡比A組原始卵泡明顯增加(P0.05)。停藥2周時(shí):B組原始卵泡數(shù)目雖較停藥1周時(shí)有所增加,但和其余三組相比差異明顯(P0.05);C和D組則有所減少,接近A組(P0.05);除A組外,各組生長(zhǎng)卵泡數(shù)目均比停藥1周時(shí)有所增加,但B組明顯低于A組(P0.05),C組和D組接近A組(P0.05)。原始卵泡和生長(zhǎng)卵泡的各組間前后比較均沒(méi)有明顯變化(P0.05)。⑤卵巢組織中Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)情況:B組Bax蛋白表達(dá)上調(diào),Bcl-2蛋白表達(dá)下調(diào),致使Bcl-2/Bax比例降低;而C組則剛好相反,Bcl-2蛋白表達(dá)上調(diào),Bax蛋白表達(dá)下調(diào),Bcl-2/Bax比例升高。結(jié)論:①卵巢功能損傷初期,血清AMH的變化比E2和FSH的變化更靈敏,可以作為判斷卵巢功能損傷的指標(biāo)之一。②Gn RHa可能通過(guò)儲(chǔ)備原始卵泡,減少發(fā)育中卵泡對(duì)化療藥物的敏感性,起到保護(hù)卵巢功能的作用。③Gn RHa可能通過(guò)上調(diào)Bcl-2表達(dá)和下調(diào)Bax表達(dá),調(diào)節(jié)Bcl-2/Bax比例,在卵巢組織中發(fā)揮抗凋亡的作用。
【學(xué)位授予單位】：河南科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R730.53;R711.75
【圖文】：

第 3 章 結(jié)果n-Blot 法 蛋白表達(dá)明顯高于其余三組，Bcl-2 蛋白表達(dá)明顯低于其estern-Blot 結(jié)果采用 Image J 軟件進(jìn)行灰度分析，B 組其他三組(P<0.05)，而 Bax 蛋白表達(dá)明顯高于其他三組-2/Bax 明顯下降(P<0.05)。大鼠卵巢組織中 Bcl-2 及 Bacl-2/Bax 比較，見圖 3-14 及表 3-21 和附圖 3-15。

圖 3-1 大鼠體重變化趨勢(shì)圖Fig. 3-1 The trend of rats’ weight changes in different groups

圖 3-1 大鼠體重變化趨勢(shì)圖Fig. 3-1 The trend of rats’ weight changes in different groups

【參考文獻(xiàn)】

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2 瑪依努爾·尼牙孜;楊瑞;朱開春;滕雪峰;;年輕不孕女性血清AMH水平預(yù)測(cè)卵巢反應(yīng)性分析[J];中國(guó)優(yōu)生優(yōu)育;2012年04期

本文編號(hào)：2747305