【摘要】：糖尿病及其并發(fā)癥嚴重影響著人們的健康,氧化應激被認為是糖尿病及其并發(fā)癥發(fā)病機理的共同途徑。超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)是機體中最重要的抗氧化酶,可期在糖尿病治療中發(fā)揮著重要的作用。但由于SOD是大分子蛋白質(zhì),細胞膜通透性差,只能清除胞外的自由基,這限制了SOD在臨床上的使用。TAT-SOD是TAT蛋白轉(zhuǎn)導結(jié)構(gòu)域與SOD的融合蛋白,可望改善以上問題,所以本文在實驗分析TAT-SOD理化特性的基礎上,對比研究了TAT-SOD與天然SOD的輔助降血糖效果。本實驗通過測定TAT-SOD對不同溫度、pH以及對胃蛋白酶的穩(wěn)定性,來研究TAT-SOD的理化性質(zhì)。然后對比分析相同劑量的天然牛血SOD和TAT-SOD、不同劑量的TAT-SOD以及TAT-SOD的灌胃和灌嘴不同給藥方式,分別對Ⅰ型和Ⅱ型糖尿病模型大鼠的體重、血糖、口服糖耐量(OGTT)、組織(包括心、肝、腎、胰腺、脾、骨骼肌)SOD、血漿胰島素(INS)、胰高血糖素(GLUCA)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、丙二醛(MDA)、糖化白蛋白(GA)和血脂水平的影響。研究結(jié)果表明,SOD和TAT-SOD對Ⅰ型和Ⅱ型糖尿病模型大鼠均有著顯著的輔助降血糖效果,TAT-S OD(中)劑量組最好。對Ⅰ型糖尿病治療結(jié)果發(fā)現(xiàn),TAT-SOD控制體重和血糖效果明顯好于SOD(P0.05);而在OGTT試驗中,二者效果相當;TAT-SOD組與SOD組的肝臟SOD酶活水平相當,但腎臟SOD酶活水平前者明顯高于后者;血漿生化水平,SOD和TAT-SOD都可以提高INS和AMPK水平,降低MDA水平TAT-SOD好于SOD。對Ⅱ型糖尿病治療結(jié)果發(fā)現(xiàn),在體重控制上TAT-SOD與SOD相當;但是血糖控制、OGTT上TAT-SOD好于SOD(P0.05),且TAT-SOD顯著降低了GA水平(P0.05);SOD和TAT-SOD都可以降低MDA和GLUCA,改善INS方面TAT-SOD好于SOD;在血脂控制水平方面,TAT-SOD不但顯著提高高密度脂蛋白水平(P0.05),而且降低總膽固醇和甘油三酯水平含量(P0.05)。灌胃效果與灌嘴相當,說明在不同給藥方式下,TAT-SOD都可以起到輔助降低血糖療效。這些結(jié)果說明SOD和TAT-SOD都具有明顯輔助降血糖效果,且TAT-SOD的總體效果好于SOD。這些效果可能是基于TAT-SOD與SOD對消化道的抗氧化作用,TAT蛋白轉(zhuǎn)導結(jié)構(gòu)域進一步提高了SOD的這種抗氧化作用。
【學位授予單位】：福州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R587.1
【圖文】：

ＳＯＤ、不同劑量的ＴＡＴ－ＳＯＤ以及ＴＡＴ－ＳＯＤ的灌胃和灌嘴不同給藥方式，即分別逡逑探宄不同給藥藥物、給藥劑量及給藥方式對Ｉ型和ＩＩ型糖尿病模型大鼠的治療效逡逑果，實驗主要研宄內(nèi)容如圖１－３所示。逡逑９逡逑

收率為７２．９２％。逡逑為進一步驗證其純度，分別取ＴＡＴ－ＳＯＤ發(fā)酵液及乙醇沉淀樣品進行ＳＤＳ－逡逑ＰＡＧＥ分析，結(jié)果如圖３－】所示。經(jīng)過４５％乙醇沉淀后，可以去除發(fā)酵液中部分逡逑高分子量雜蛋白，得到較純的蛋白質(zhì)，分子量為２５ｋＤａ邋（圖３－１箭頭處），蛋白逡逑分子量大小符合預期結(jié)果。逡逑邐表３－１邋ＴＡＴ－ＳＯＤ融合蛋白純化表邐逡逑樣品邐總體積邋酶活力邐總酶活力蛋白含量蛋白比活蛋白純化邋回收率逡逑邐（ｍＬ）邐（Ｕ／ｍＬ）邐（Ｕ）邐（ｍｇ／ｍＬ）邐（Ｕ／ｍｇ）邐倍數(shù)邐（％）逡逑發(fā)酵液邐４０邐１３３５４邐５３４１６０邐１．７６邐７５８７．５邐１邐１００逡逑乙醇沉淀邐４邐９７３７５邐３８９５００邐４．９邐１９８７２．４５邐２．６邐７２．９２逡逑９７．２塷逡逑６６－４－＾Ｂ逡逑４４．３．逡逑２０．卜＿囊逡逑ｕｖＢＷ逡逑１邐２邐３逡逑圖３－１邋ＴＡＴ－ＳＯＤ融合蛋白乙醇沉淀ＳＤＳ－ＰＡＧＥ

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本文編號：2738748