【摘要】：背景:類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種慢性、系統(tǒng)性、炎癥性自身免疫性疾病,其病理改變是機(jī)體免疫功能紊亂導(dǎo)致的滑膜增生、血管翳形成、骨及軟骨組織的破壞。有研究表明,Treg/Th17細(xì)胞的平衡失調(diào)對RA的發(fā)生、發(fā)展起著至關(guān)重要的作用,而Foxp3、ROR-γt分別是調(diào)控Treg與Th17分化和發(fā)育的正向轉(zhuǎn)錄因子。間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchyma Stem Cells,MSCs)已被證實(shí)是一種具有高度增殖能力和多向分化潛能的細(xì)胞,可通過調(diào)節(jié)炎癥細(xì)胞及因子的表達(dá),達(dá)到治療RA的目的。近幾年研究發(fā)現(xiàn),間充質(zhì)干細(xì)胞來源的微泡(Mesenchymal Stem Cells derived Microvesicles,MSC-MVs)同樣具有免疫調(diào)節(jié)作用,同時(shí)可避免細(xì)胞治療引起的血管栓塞、異位成骨等風(fēng)險(xiǎn),因此逐漸成為新型的研究熱點(diǎn)。目的:探討Treg與Thl7細(xì)胞相應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子Foxp3、ROR-γt在RA脾臟中的表達(dá)水平;探討hUCMSC-MVs治療RA的療效及可能的作用機(jī)制。方法:選用雌性Wistar大鼠,隨機(jī)分為6組,每組6只,其中1組設(shè)為正常對照組;其余5組通過多點(diǎn)皮下注射弗氏完全佐劑+II型膠原對其進(jìn)行初次免疫,2周后腹腔再次注射,形成CIA大鼠模型。再次免疫后,次日分別進(jìn)行尾靜脈注射干預(yù),即CIA模型組(等量生理鹽水),hUCMSCs組(2×10~6/kg/只),hUCMSC-MVs低濃度組(30 ug/100μl/只)及高濃度組(90 ug/100μl/只),MTX組(MTX0.9 mg/kg/w腹腔注射)。初次免疫42天時(shí)留取大鼠脾臟組織,采用RT-PCR法檢測技術(shù)測定各組脾臟中Foxp3、ROR-γt mRNA的表達(dá)水平及Foxp3/ROR-γt表達(dá)量比值的變化。結(jié)果:1、CIA模型組大鼠脾臟組織中Foxp3及ROR-γt的表達(dá)RT-PCR分析結(jié)果顯示,CIA模型組大鼠脾臟組織中Foxp3 mRNA表達(dá)水平下降,ROR-γt mRNA表達(dá)水平升高,Foxp3/ROR-γt表達(dá)量比值降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值分別為78.295、168.131、129.782,P值均0.001)。提示CIA大鼠脾臟中存在Foxp3/ROR-γt的失衡表達(dá),表現(xiàn)為Foxp3低表達(dá),ROR-γt高表達(dá)。2、hUCMSC-MVs干預(yù)組大鼠脾臟組織中Foxp3、ROR-γt的表達(dá)及Foxp3/ROR-γt表達(dá)量比值變化,較其它干預(yù)組作用的優(yōu)劣RT-PCR分析結(jié)果顯示,各干預(yù)組均可上調(diào)CIA大鼠脾臟組織中Foxp3 mRNA表達(dá)水平,下調(diào)ROR-γt mRNA表達(dá)水平,Foxp3/ROR-γt表達(dá)量比值升高;hUCMSC-MVs高濃度組較hUCMSCs及MTX組,Foxp3 mRNA表達(dá)水平升高,ROR-γt mRNA的表達(dá)水平下降,上調(diào)Foxp3/ROR-γt表達(dá)量比值的作用明顯;hUCMSC-MVs高濃度干預(yù)組較hUCMSC-MVs低濃度組作用明顯,各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值分別為78.295、168.131、129.782,P0.001)。結(jié)論:1、CIA大鼠體內(nèi)存在Foxp3/ROR-γt的失衡表達(dá);2、hUCMSC-MVs對CIA大鼠Treg/Th17失衡的調(diào)節(jié)機(jī)制同hUCMSCs相似,通過上調(diào)Foxp3 mRNA的表達(dá)水平,下調(diào)ROR-γt mRNA的表達(dá)水平,調(diào)控Foxp3/ROR-γt的失衡表達(dá),進(jìn)而可能糾正Treg/Th17失衡;3、hUCMSC-MVs的干預(yù)能力與其濃度有關(guān),高濃度干預(yù)組對CIA大鼠轉(zhuǎn)錄因子Foxp3、ROR-rt異常表達(dá)的調(diào)節(jié)作用優(yōu)于低濃度組,且不弱于hUCMSCs及MTX組。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R593.22
【圖文】：

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文2 結(jié) 果2 hUCMSC-MVs 對 CIA 大鼠脾臟組織 Foxp3、ROR-γt mRNA 表達(dá)的影響2.1 Real Time-PCR 檢測各實(shí)驗(yàn)組大鼠脾臟組織 Foxp3、ROR-γt mRNA 的表達(dá)RT-PCR 結(jié)果顯示：各實(shí)驗(yàn)組中脾臟組織 Foxp3、ROR-γt mRNA 均得到表達(dá)，F(xiàn)oxp3、ROR-γt mRNA 的擴(kuò)增曲線和溶解曲線（如圖 1、圖 2）所示：

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文2 結(jié) 果2 hUCMSC-MVs 對 CIA 大鼠脾臟組織 Foxp3、ROR-γt mRNA 表達(dá)的影響2.1 Real Time-PCR 檢測各實(shí)驗(yàn)組大鼠脾臟組織 Foxp3、ROR-γt mRNA 的表達(dá)RT-PCR 結(jié)果顯示：各實(shí)驗(yàn)組中脾臟組織 Foxp3、ROR-γt mRNA 均得到表達(dá)，F(xiàn)oxp3、ROR-γt mRNA 的擴(kuò)增曲線和溶解曲線（如圖 1、圖 2）所示：

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本文編號：2736639