【摘要】：研究背景痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎(gouty arthritis,GA)是一種常見(jiàn)病,常常是因?yàn)猷堰蚀x紊亂或者有尿酸排泄不良引起的以血尿酸增多為特征的一種急性非感染性炎性反應(yīng)。發(fā)病人群以中老年男性患者居多,年齡越大,患病率也就越高,男性患者數(shù)量多于女性。痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎以急性起病為特征,初次發(fā)作多數(shù)人在第一跖趾關(guān)節(jié)出現(xiàn)炎性癥狀,一天之內(nèi)紅腫熱痛功能障礙等炎癥反應(yīng)可達(dá)到高峰,但一般在發(fā)作1-2周后自行緩解,痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎如果長(zhǎng)期反反復(fù)復(fù)發(fā)作,有可能導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形、腎功能衰竭、腎結(jié)石等相關(guān)疾病,使患者生活質(zhì)量大幅下降。最近幾十年,痛風(fēng)性疾病在我過(guò)的發(fā)病率越來(lái)越高,并且患者的年齡也有年輕化的趨勢(shì)。IL-33(interleukin-33),是近些年發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞因子,屬于IL-1細(xì)胞因子超家族,因?yàn)榻Y(jié)構(gòu)酷似IL-18而被發(fā)現(xiàn)。IL-33的受體為ST2(ILIRL1),IL-33與ST2結(jié)合之后,相互作用,可招募下游的信號(hào)分子,例如MyD88,然后激活NF-kB、MAPK信號(hào)通路,從而激活胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2和p38絲裂原活化蛋白激酶,使得2型細(xì)胞因子,如IL-4、IL-5和IL-13的分泌增加,從而誘發(fā)Th2型免疫應(yīng)答。前期的研究發(fā)現(xiàn),在痛風(fēng)患者的外周血和關(guān)節(jié)中,IL-33表達(dá)水平明顯增加,并且在痛風(fēng)模型小鼠的相關(guān)實(shí)驗(yàn)中也證實(shí)了IL-33有助于緩解MSU導(dǎo)致的痛風(fēng)發(fā)作,但是具體的緩解機(jī)制尚不清楚。隨后我們通過(guò)進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn),IL-33參與了痛風(fēng)患者的脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié),并起到了保護(hù)腎功能的作用。有文獻(xiàn)報(bào)道,替代性活化巨噬細(xì)胞(alternatively activated macrophage,AAMs or M2)與脂質(zhì)代謝有密切關(guān)系,并且還參與痛風(fēng)自發(fā)緩解。我們推測(cè)IL-33可能通過(guò)誘導(dǎo)AAM分化參與痛風(fēng)的緩解。研究目的明確IL-33是否通過(guò)誘導(dǎo)AAM參與痛風(fēng)緩解。研究方法1.通過(guò)體外用小鼠骨髓細(xì)胞誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分化而得到小鼠巨噬細(xì)胞后,分別用予以IL-4、IL-13和IL-33細(xì)胞因子單獨(dú)處理或和IL4+IL-33或IL-13+IL-33聯(lián)合處理48小時(shí)后,流式細(xì)胞術(shù)觀察AAM細(xì)胞的數(shù)量。2.利用C57BL/6小鼠為模型,分別腹腔內(nèi)注射IL-33或者PBS,連續(xù)注射兩天,第三天處死小鼠,流式檢測(cè)小鼠腹腔灌洗液細(xì)胞,觀察AAM細(xì)胞的變化;ELISA檢測(cè)方法,測(cè)定模型鼠腹腔灌洗液中的細(xì)胞因子IL-4、IL-5以及IL-13水平的改變。3.以C57BL/6小鼠為模型,背部制作氣囊模型。在氣囊模型制成前提前三天起給實(shí)驗(yàn)組小鼠腹腔內(nèi)注射IL-33,2ug/只,對(duì)照組腹腔注射等體積PBS,氣囊模型建成時(shí)再注射一次IL-33或PBS,隨后向小鼠氣囊內(nèi)注射MSU,3mg/只,建立小鼠急性痛風(fēng)模型。在注射MSU后16小時(shí)處死小鼠,收集小鼠氣囊及腹腔灌洗液,流式檢測(cè)灌洗液中AAM、中性粒細(xì)胞,觀察實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.IL-33在體外與IL-4和IL-13起協(xié)同作用,間接促進(jìn)巨噬細(xì)胞向AAM的分化。2.小鼠腹腔注射IL-33細(xì)胞因子可誘導(dǎo)腹腔灌洗液中F4/80和CD206雙陽(yáng)性的AAM細(xì)胞數(shù)量增加。3.痛風(fēng)氣囊模型小鼠腹腔注射IL-33細(xì)胞因子可以誘導(dǎo)氣囊和腹腔灌洗液中F4/80和CD206雙陽(yáng)性AAM細(xì)胞增加,同時(shí)抑制MSU誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。結(jié)論外源性IL-33可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分化為AAM細(xì)胞,可能通過(guò)誘導(dǎo)AAM數(shù)量細(xì)胞增加而緩解痛風(fēng)性炎癥反應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：廈門(mén)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R589.7
【圖文】：

第三章實(shí)驗(yàn)結(jié)果逡逑尿酸鹽的制備及內(nèi)毒素檢測(cè)逡逑尿酸鹽的制備逡逑定量的尿酸后加入ｄｄＨ２０，制成懸濁液，然后加入ＮａＯＨ，微波，幫助尿酸溶解并與氫氧化鈉發(fā)生反應(yīng)，隨后將反應(yīng)后的溶液濾器過(guò)濾除菌后，加入無(wú)菌的ＮａＣＩ溶液，調(diào)整尿酸鹽溶液的ＰＨ以析出，此時(shí)溶液中出現(xiàn)白色絮狀的尿酸鹽。之后通過(guò)離心的方的尿酸鹽沉淀在離心管底部，棄去上清液后，用無(wú)水乙醇洗滌超凈臺(tái)內(nèi)風(fēng)Ｔ、粉碎成粉末狀后分裝保存于－２０°Ｃ冰箱內(nèi)。取少偏振光顯微鏡下可以觀察到針狀的結(jié)晶，如圖３．１．１所示。逡逑

逑ＰＢＳ組ＡＡＭ細(xì)胞百分比。此外，結(jié)合ＡＡＭ細(xì)胞百分比以及腹腔灌洗液細(xì)胞逡逑計(jì)數(shù)的總數(shù)，可以計(jì)算出兩組數(shù)據(jù)中ＡＡＭ的細(xì)胞總數(shù)。結(jié)果如圖３．３．２．２所示，逡逑ＩＬ－３３組的ＡＡＭ細(xì)胞數(shù)顯著高于ＰＢＳ組，Ｐ＜０．０１具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。逡逑Ａ邋ＰＢＳ邐ＩＬ－３３逡逑１邐ｉ逡逑；２．４８邐a麇澹卞危玻叮稿危矗叮插澹赍義希翦澹礤澹椋擼擼矗蓿澹垮澹掊義希麇文獺㈠危徨危橐唬誨五危危掊義希蹂澹矗罰甦玨濉常保卞危輳玻卞錦lＶ邋：暴９．７逡逑．．．．．．４邋二，ｄ邐ｊ逡逑＿邐——＾邋Ｆ４／８０逡逑圖３．２．１．１流式細(xì)胞術(shù)分析小鼠腹腔細(xì)胞ＣＤ２０６和Ｆ４／８０雙陽(yáng)性細(xì)胞代表ＡＡＭ逡逑細(xì)胞逡逑Ｆｉｇ３．２．１．１：Ｔｏ邋ｃｏｎｆｒｍ邋ｔｈｅ邋ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ＩＬ－３３邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ邋ｏｆ邋ＡＡＭ

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

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本文編號(hào)：2735795