本文關(guān)鍵詞：二甲雙胍對2型糖尿病患者腸道菌群及慢性炎癥狀態(tài)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的 慢性代謝性疾病（chronic metabolic diseases）是一組以肥胖、高血壓、糖尿病、血脂異常、冠心病、腦卒中等疾病為主的代謝性臨床癥候群。代謝性疾病已成為嚴(yán)重影響人類健康的一組疾病，在遺傳因素較為固定的背景下，環(huán)境因素顯得尤為重。隨著微生物技術(shù)的發(fā)展，分子微生物學(xué)較多的運用于腸道菌群的研究。在人體腸道內(nèi)，結(jié)腸的微生物分布最密集，不同物種，腸腔分布的細(xì)菌群落種類及數(shù)量不同，由于技術(shù)和倫理學(xué)限制，只能通過對人體或動物模型糞便中提取的菌群研究分析，但糞便菌群是否可以反映腸道內(nèi)主要菌群不得而知。許多研究將腸道微生物詮釋為環(huán)境因素影響宿主營養(yǎng)、代謝及免疫功能，對人體健康十分重要。目前,體內(nèi)腸道菌群失調(diào)和低活度慢性炎癥狀態(tài)發(fā)揮的重要作用在糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)展中逐漸被關(guān)注。二甲雙胍作為2型糖尿病患者的一線用藥，其治療效果隨英國（UKPDS）結(jié)果公布得到充分肯定。關(guān)于二甲雙胍對2型糖尿病患者腸道菌群的影響作用和機制鮮見報道。本研究旨在應(yīng)用ERIC (enterobacterial repetitive intergenic consensus，腸道細(xì)菌基因間重復(fù)序列)-PCR技術(shù)建立各組腸道細(xì)菌DNA指紋圖譜，初步探討服用二甲雙胍后是否可以糾正2型糖尿病患者腸道菌群失調(diào)、改變其慢性炎癥狀態(tài)及代謝紊亂，為其降糖外收益提供依據(jù)。 對象與方法 1.1對象 10例2013年2月至2013年6月于鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科住院的2型糖尿病患者，年齡38～45歲，，糖尿病病程0.3-6年。入選標(biāo)準(zhǔn)：符合1999年世界衛(wèi)生組織（WHO）的T2DM診斷標(biāo)準(zhǔn)。 1.2標(biāo)本收集 實驗組給予（二甲雙胍片0.85g tid）,規(guī)律應(yīng)用2周，收集用藥前、后患者新鮮糞便，密封于無菌厭氧袋；并抽取用藥前后外周血，于4000rpm離心10min，取上清，所有標(biāo)本于半小時內(nèi)置于-80°冰箱內(nèi)保存。同時觀察服藥前后血糖（空腹、三餐后）、血脂、炎性因子（血清中C反應(yīng)蛋白、白細(xì)胞介素6、脂多糖）變化。收集10例健康人新鮮糞便及外周血作為對照。 1.3實驗試劑及儀器 腸道菌群DNA基因組提取試劑盒；瓊脂糖、無菌PCR小管；DNA marker、Dream Taq Green PCR Master Mix、Green-DNA Dye核苷酸膠體染料、引物；Biometra PCR；電泳儀；紫外凝膠成像系統(tǒng)；ELISA試劑盒；血糖儀；單道移液器；DNA濃度測定儀；高速臺式離心機等。 1.4實驗步驟 1）腸道菌群總DNA提取將糞便標(biāo)本置于冰上解凍，用生理鹽水洗滌，4000rpm離心1分鐘取沉渣300g于滅菌EP管內(nèi)，使用腸道菌群基因組DNA試劑盒，并按說明書步驟提取DNA。吸取2ulDNA樣本用濃度議測定濃度。2）PCR擴增應(yīng)用ERIC-PCR指紋圖譜分析技術(shù)進行擴增，特異性引物序列ERIC1(5'-ATG AAG CTC CTG GGG AAT CCA一3’)，ERIC2(5'-AAG TAA GTG ACTGGG GTG ATG CG一3’)。PCR小管加入反應(yīng)體系25μl：Dream Taq Green PCRMaster Mix12.5μl，ERIC10.5μl，ERIC2μl，water5.5μl，DNA模板量6μl（約80ng）。3）電泳成像產(chǎn)物電泳后在凝膠成像分析系統(tǒng)內(nèi)觀測電泳條帶并拍照。4）指紋圖譜分析。5）炎性因子的檢驗將血清標(biāo)本置冰上解凍，應(yīng)用ELISA試劑盒測定血清炎癥因子水平。6）其他監(jiān)測空腹及三餐前、餐后2h末梢血糖，于本院檢驗科行生化指標(biāo)測定。 1.5統(tǒng)計方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)處理軟件分析，連續(xù)型變量用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±S）表示，兩樣本定量資料的比較應(yīng)用t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果 1.用藥后空腹血糖、餐后2h血糖、血總膽固醇（T-CHO）、血清C反應(yīng)蛋白（CRP）、脂多糖（LPS）、白細(xì)胞介素-6（LI-6）水平均較用藥前下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；血甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）水平較前下降，血高密度脂蛋白（HDL）水平較前升高，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)； 2. ERIC-PCR指紋分析圖譜顯示健康人腸道菌群的DNA條帶數(shù)目明顯多于T2DM患者，且較亮主條帶位置不同，個體DNA較亮主條帶呈散在分布，成多樣性分布；T2DM患者腸菌指紋圖譜條帶表現(xiàn)單一，且較量主條帶位置與正常人不同；服用二甲雙胍后T2DM患者腸道菌群的DNA條帶數(shù)目增多，且較亮條帶位置改變，與健康人相似。 結(jié)論 1.應(yīng)用二甲雙胍治療2周后，T2DM患者血清中C反應(yīng)蛋白、TNF-a、IL-6、LPS水平均較治療前明顯下降，表明二甲雙胍有助于降低炎癥因子水平、改善患者慢性炎癥狀態(tài)，有利于改善血糖、血脂水平，同時已有研究表明二甲雙胍的抗炎作用是獨立于降糖作用之外。 2.通過分析本研究所獲得的腸道菌群ERIC-PCR指紋圖譜，正常人腸道菌群種類多樣化，優(yōu)勢菌群數(shù)量較多，2型糖尿病患者腸道菌群結(jié)構(gòu)多樣性降低，且優(yōu)勢菌與健康人不同，體內(nèi)存在腸道菌群失調(diào)。應(yīng)用二甲雙胍治療后，2型糖尿病患者腸道菌群的群落構(gòu)成比明顯變化，種類增多，且優(yōu)勢菌群與健康人相似。本研究僅可初步觀察給予二甲雙胍后糖尿病患者腸道菌群的變化趨勢，尚不能明確腸道菌群的種類、數(shù)量的具體變化，需進一步研究。
【關(guān)鍵詞】：代謝性疾病 2型糖尿病 腸道菌群 優(yōu)勢菌群 炎性因子
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R587.1
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-13
• 中英文縮略詞對照表13-15
• 前言15-16
• 對象與方法16-20
• 結(jié)果20-21
• 討論21-24
• 結(jié)論24-25
• 參考文獻25-28
• 綜述部分 代謝性疾病與腸道菌群及炎癥因子之間的關(guān)系28-59
• 參考文獻49-59
• 個人簡歷及在學(xué)期間發(fā)表文章59-60
• 致謝60

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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  本文關(guān)鍵詞：二甲雙胍對2型糖尿病患者腸道菌群及慢性炎癥狀態(tài)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：272865