發(fā)布時(shí)間：2020-06-20 06:58

【摘要】：研究目的:2型糖尿病(Type 2 diabetes,T2D)的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜多樣,目前大多數(shù)對(duì)于2型糖尿病的研究都集中在基于肥胖水平的發(fā)病機(jī)制的研究。然而,許多個(gè)體在非肥胖體重指數(shù)(Body mass index,BMI)水平上發(fā)展為T(mén)2D。目前尚不清楚在這些肥胖模型中發(fā)現(xiàn)的病因機(jī)制是否全部適用于非肥胖的T2D患者。近來(lái)的研究表明腸道菌群、腸道免疫和炎癥反應(yīng)在T2D等多種疾病的發(fā)病過(guò)程中可能起到重要作用,我們?cè)噲D通過(guò)研究闡明濾泡輔助性T細(xì)胞(Follicular helper T cell,Tfh;又名CD4~+CXCR5~+T細(xì)胞)在腸道免疫中的作用找到潛在的治療靶點(diǎn)為將來(lái)T2D的治療及腸道免疫和腸道炎癥的調(diào)節(jié)提供新思路。研究方法:首先我們對(duì)24名非肥胖T2D患者、14名BMI匹配的健康對(duì)照和11名活動(dòng)性克羅恩病(Crohn's disease,CD)患者的糞便樣本中的免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)組成進(jìn)行比對(duì)分析。這些受試者中共有4名健康對(duì)照和10名非肥胖T2D患者愿意捐贈(zèng)腸粘膜活檢樣本。這10名非肥胖T2D患者中有4名提供了2份,3名提供了3份,3名提供了4份腸粘膜活檢樣本。我們對(duì)愿意提供樣本的全部受試者的腸粘膜樣本的B細(xì)胞進(jìn)行Ig亞型組成和Tfh細(xì)胞細(xì)胞因子分泌分析。然后我們選用6份非肥胖T2D患者樣本進(jìn)行了去除CD4~+CXCR5~+T細(xì)胞和中和IFN-γ的實(shí)驗(yàn)。最后我們使用4份健康對(duì)照組粘膜樣本和7份非肥胖T2D粘膜樣本用于大腸桿菌刺激實(shí)驗(yàn),并用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)量其IFN-γ表達(dá)。其中統(tǒng)計(jì)方法按照?qǐng)D例所示,相應(yīng)地應(yīng)用t檢驗(yàn)、配對(duì)t檢驗(yàn)或Mann-Whitney U檢驗(yàn),Wilcoxon符號(hào)秩檢驗(yàn)。多組樣本的比較依正態(tài)性和方差齊性選擇采用方差分析或Kruskal-Wallis H檢驗(yàn),若多組間的比較總體上具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,則進(jìn)一步采用多重比較的方法進(jìn)行事后檢驗(yàn)(post-hoc test)。使用Graphpad Prism 5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,P0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究結(jié)果:1.非肥胖T2D患者的糞便IgG水平高于BMI匹配的健康對(duì)照,但低于活動(dòng)性克羅恩病患者。2.非肥胖T2D患者腸道粘膜中CD4~+CXCR5~+T細(xì)胞表達(dá)IFN-γ的細(xì)胞的百分比顯著升高,而表達(dá)IL-4和IL-17的細(xì)胞的百分比顯著降低。3.當(dāng)去除CD4~+CXCR5~+T細(xì)胞后及加入多克隆兔抗人IFN-γ中和抗體后IgG產(chǎn)生明顯降低。4.非肥胖T2D患者與健康對(duì)照組腸道粘膜CD4~+CXCR5~+T細(xì)胞在大腸桿菌刺激后IFN-γ分泌均增加,但非肥胖T2D患者IFN-γ分泌更顯著。結(jié)論:1.非肥胖T2D患者腸道呈現(xiàn)低級(jí)炎癥反應(yīng),其介于健康對(duì)照組和活動(dòng)性克羅恩病患者之間。2.非肥胖T2D患者腸道粘膜中CD4~+CXCR5~+T細(xì)胞高表達(dá)IFN-γ而低表達(dá)IL-4和IL-17。3.CD4~+CXCR5~+T細(xì)胞和IFN-γ可能在非肥胖T2D患者腸道IgG炎癥中發(fā)揮重要作用。4.非肥胖T2D患者的腸道CD4~+CXCR5~+T細(xì)胞較BMI匹配的健康對(duì)照組對(duì)腸道細(xì)菌的炎癥反應(yīng)更強(qiáng)。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R587.1
【圖文】：

H檢驗(yàn)的事后檢驗(yàn)（又稱(chēng)Dunn’s test）），每行會(huì)檢驗(yàn)零假設(shè)：樣本1和樣本2分布相同。調(diào)整后的檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05，作為表格中最后一列P值（多重檢驗(yàn)后調(diào)整的P值）的判定標(biāo)準(zhǔn)。圖1. 健康對(duì)照、非肥胖T2D和CD受試者的糞便樣本中的Ig亞類(lèi)組成。通過(guò)渦旋使樣本溶解并離心沉淀，ELISA測(cè)量IgG和IgA濃度。

+T細(xì)胞表達(dá)IFN-γ的百分比顯著高于健康對(duì)照組，而表達(dá)IL-4的百分比顯著降低（圖2A）。但健康對(duì)照組和非肥胖T2D患者腸粘膜總的CD4+CXCR5+細(xì)胞數(shù)相當(dāng)（圖2B）。在全部粘膜CD4+T細(xì)胞中，非肥胖T2D患者腸粘膜CD4+CXCR5+T細(xì)胞表達(dá)IFN-γ的百分比顯著高于對(duì)照組，而表達(dá)IL-4的百分比顯著降低（圖2C）。在全部腸粘膜樣本中，非肥胖T2D患者CD4+CXCR5+T細(xì)胞表達(dá)IFN-γ的百分比較健康對(duì)照組顯著升高，而表達(dá)IL-4和IL-17的百分比顯著降低（圖2D）。圖2A.樣本腸粘膜CD4+CXCR5+T細(xì)胞中表達(dá)IFN-γ、IL-4和IL-17的百分比，并使用熒光同型陰性對(duì)照。使用Mann-Whitney U檢驗(yàn)。

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