【摘要】：目的:研究hUCMSC-MVs對(duì)RA-FLSs的自噬水平是否具有調(diào)節(jié)作用,探究hUCMSC-MVs作用于RA的機(jī)制。方法:購(gòu)買hUCMSCs細(xì)胞系(SM-MSC)和RA-FLSs細(xì)胞系(MH7A),培養(yǎng)傳代后用于實(shí)驗(yàn)。梯度離心法提取hUCMSC-MVs,透射電鏡鑒定形態(tài)及Western Blot法鑒定其表面抗原表型。實(shí)驗(yàn)分為RA-FLSs組(空白對(duì)照組)、自噬抑制劑干預(yù)RA-FLSs組(3-MA干預(yù)組)、hUCMSC-MVs干預(yù)RA-FLSs組(hUCMSC-MVs干預(yù)組)。實(shí)驗(yàn)主要方法包括CCK8法測(cè)細(xì)胞增殖,流式細(xì)胞術(shù)測(cè)細(xì)胞凋亡,劃痕實(shí)驗(yàn)法測(cè)細(xì)胞遷移,RT-qPCR法檢測(cè)自噬相關(guān)基因BECN1、MAP1LC3B mRNA表達(dá),Western Blot法檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白Beclin1、LC3Ⅱ表達(dá)及LC3Ⅱ/Ⅰ比值。結(jié)果:1.hUCMSC-MVs對(duì)RA-FLSs增殖、凋亡及遷移能力的影響(1)細(xì)胞增殖:與空白對(duì)照組相比,10μg/mL MVs干預(yù)組、50μg/mL MVs干預(yù)組、100μg/mL MVs干預(yù)組細(xì)胞存活率均極顯著增加(P0.001);與空白對(duì)照組相比,3-MA干預(yù)組、150μg/mL MVs干預(yù)組、200μg/mL MVs干預(yù)組存活率均極顯著降低(P0.001);150μg/mL MVs干預(yù)組與200μg/mL MVs干預(yù)組相比無(wú)顯著差異(P0.05);150μg/mL MVs干預(yù)組存活率與3-MA干預(yù)組相比差異不顯著(P0.05)。(2)細(xì)胞凋亡:與空白對(duì)照組相比,3-MA干預(yù)組和hUCMSC-MVs干預(yù)組細(xì)胞凋亡率極顯著增加(P0.01);hUCMSC-MVs組與3-MA組相比差異不顯著(P0.05)。(3)細(xì)胞遷移能力:干預(yù)12h和24h后,與空白對(duì)照組相比,3-MA干預(yù)組、hUCMSC-MVs干預(yù)組細(xì)胞遷移率極顯著降低(P0.01);hUCMSC-MVs干預(yù)組與3-MA干預(yù)組遷移率相比差異不顯著(P0.05);干預(yù)48h后,與空白對(duì)照組相比,3-MA干預(yù)組和hUCMSC-MVs干預(yù)組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。2.hUCMSC-MVs對(duì)RA-FLSs BECN1、MAP1LC3 mRNA表達(dá)的影響(1)BECN1 mRNA表達(dá):與空白對(duì)照組相比,3-MA干預(yù)組、hUCMSC-MVs干預(yù)組BECN1 mRNA表達(dá)顯著降低(P0.01,P0.05);與3-MA干預(yù)組相比,hUCMSC-MVs干預(yù)組BECN1 mRNA表達(dá)顯著升高(P0.05)。(2)MAP1LC3B mRNA表達(dá):與空白對(duì)照組相比,3-MA干預(yù)組和hUCMSC-MVs干預(yù)組MAP1LC3B mRNA表達(dá)顯著降低(P0.01,P0.01);與3-MA干預(yù)組相比,hUCMSC-MVs干預(yù)組MAP1LC3B mRNA顯著升高(P0.05)。3.hUCMSC-MVs干預(yù)對(duì)RA-FLSs Beclin1、LC3Ⅱ蛋白及LC3Ⅱ/Ⅰ比值的影響(1)Beclin1蛋白表達(dá):與空白對(duì)照組相比,3-MA干預(yù)組和hUCMSC-MVs干預(yù)組Beclin1蛋白表達(dá)顯著降低(P0.05);hUCMSC-MVs干預(yù)組與3-MA干預(yù)組相比差異不顯著(P0.05)。(2)LC3Ⅱ蛋白表達(dá):與空白對(duì)照組相比,3-MA干預(yù)組和hUCMSC-MVs干預(yù)組LC3Ⅱ蛋白表達(dá)顯著降低(P0.01,P0.05);hUCMSC-MVs干預(yù)組與3-MA干預(yù)組相比LC3Ⅱ蛋白表達(dá)差異不顯著(P0.05).。(3)LC3Ⅱ/Ⅰ比值:與空白對(duì)照組相比,3-MA干預(yù)組和hUCMSC-MVs干預(yù)組LC3Ⅱ/Ⅰ比值顯著降低(P0.001);hUCMSC-MVs干預(yù)組與3-MA干預(yù)組相比差異不顯著(P0.05)。結(jié)論:1.hUCMSC-MVs干預(yù)可抑制RA-FLSs增殖和遷移,促進(jìn)其凋亡;2.RA-FLSs存在自噬異常激活,hUCMSC-MVs通過抑制RA-FLSs自噬對(duì)RA發(fā)揮作用,為hUCMSC-MVs用于RA臨床治療提供理論基礎(chǔ)和依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R593.22
【圖文】：

1. Microscopic observation of RA-FLSs cell morpho圖 1 鏡下觀察 RA-FLSs 細(xì)胞形態(tài)細(xì)胞表面抗原表型鑒定鑒定 RA-FLSs 表面 CD90 陽(yáng)性率＞95%，CDSs 表面表達(dá) CD90（+）、CD45（-）、CD1

cytometry for detection of surface antigenic phen圖 2 流式檢測(cè) RA-FLSs 表面抗原表型MVs 鑒定MVs 形態(tài)學(xué)鑒定觀察到 hUCMSC-MVs 直徑介于 40-300n構(gòu)，符合國(guó)際公認(rèn)的鑒定 MVs 的標(biāo)準(zhǔn)。

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本文編號(hào)：2722054