【摘要】：研究目的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一種慢性風(fēng)濕免疫疾病,主要表現(xiàn)為反復(fù)的滑膜炎,導(dǎo)致多關(guān)節(jié)腫痛、變形、活動受限,往往演變成殘疾,是致殘率最高的關(guān)節(jié)疾病,嚴重影響了生活質(zhì)量,是一種終身性疾病。目前RA的具體病因尚不明確。本課題根據(jù)濕性重濁粘滯,久濕形成毒,濕毒郁久化熱致瘀,阻滯經(jīng)脈筋肉,結(jié)合西方病因?qū)W說“體液論”,提出“濕毒入絡(luò)”可能導(dǎo)致RA的病因?qū)W理論。濕毒入絡(luò),體液的流動或遷移可能刺激水通道蛋白(AQPs)的異常表達;RA的活動期炎性滲出,滑膜充血水腫,也可能伴隨水的異常代謝。已有報道,AQPs在RA的發(fā)展過程中發(fā)揮著一定的作用,可介導(dǎo)其病理變化過程中的細胞遷移。另外,臨床上尚無根治RA的辦法,大多只停留在對癥治療,缺乏對因治療。本課題針對RA的病因病機“濕毒入絡(luò)”,擬方三黃一龍湯(SYD)聯(lián)合甲氨蝶呤(MTX)治療RA濕熱痹阻證,從臨床和動物實驗兩方面對RA發(fā)病機制和三黃一龍湯或聯(lián)合MTX的作用機理進行了研究。研究方法本課題的第一部分以RA濕熱痹阻證患者的外周血和滑膜液作為研究對象,從細胞因子、AQPs及JAK-STAT通路的信號因子等的表達及調(diào)控方面進行了初步研究,主要采用ELISA法檢測相關(guān)指標。第二部分復(fù)制出RA濕毒入絡(luò)動物模型,以大鼠的外周血、骨關(guān)節(jié)、肺、脾、腎臟等作為研究對象,從炎性因子、AQPs、Na~+,K~+-ATP酶、JAK-STAT通路的信號因子及關(guān)節(jié)病理組織學(xué)的變化及調(diào)控進行了深入研究,采用了ELISA法、RT-PCR法及病理組織學(xué)等檢測方法。研究結(jié)果一、RA濕熱痹阻證患者炎性因子、AQPs及JAK-STAT通路信號因子的變化及三黃一龍湯聯(lián)合MTX的調(diào)控作用及機制1、RA濕熱痹阻證患者炎性因子的變化及三黃一龍湯聯(lián)合MTX的影響(1)RA濕熱痹阻證患者活動期關(guān)節(jié)腫脹指數(shù)、壓痛指數(shù)以及ESR、CRP、DAS28明顯升高;采用SYD聯(lián)合MTX治療,其關(guān)節(jié)腫脹指數(shù)、壓痛指數(shù)及ESR、CRP、DAS28能較快較好地改善。(2)RA濕熱痹阻證患者外周血TNF-α、IFN-γ較健康對照組顯著升高,滑膜液TNF-α、IFN-γ較外周血明顯升高。(3)采用SYD聯(lián)合MTX治療后TNF-α、IFN-γ顯著下降。2、RA濕熱痹阻證患者AQPs的變化及三黃一龍湯聯(lián)合MTX的影響(1)RA濕熱痹阻證患者外周血和滑膜液中AQP1、AQP2和AQP3的表達水平較健康者明顯降低。(2)外周血中AQP1、AQP2、AQP3表達略高于滑膜液,以AQP1表達最多,AQP3次之,AQP2表達最少。(3)SYD聯(lián)合MTX可以使RA濕熱痹阻證患者低表達的AQP1、AQP2和AQP3上調(diào)。3、RA濕熱痹阻證患者JAK-STAT通路信號因子的變化及三黃一龍湯聯(lián)合MTX的影響(1)RA濕熱痹阻證患者STAT1、STAT3、PIAS1、PIAS3、SOCS-1、SOCS-3的表達水平較健康者都降低,其中STAT1表達高于STAT3,PIAS1表達高于PIAS3,SOCS-1與SOCS-3表達相當。(2)RA外周血中STAT1、PIAS1、PIAS3、SOCS-1的表達高于滑膜液,而外周血中STAT3、SOCS-3與滑膜液中基本相當。(3)經(jīng)SYD聯(lián)合MTX治療,RA濕熱痹阻證患者外周血STAT1、STAT3、PIAS1、PIAS3、SOCS-1都下調(diào),SOCS-3無明顯變化。二、RA濕毒入絡(luò)模型大鼠炎性因子、AQPs、Na~+,K~+-ATPase、JAK-STAT通路信號因子及關(guān)節(jié)病理組織學(xué)的變化及三黃一龍湯聯(lián)合MTX的調(diào)控作用及機制1、RA濕毒入絡(luò)模型大鼠炎性因子的變化及三黃一龍湯或聯(lián)合MTX的影響(1)RA濕毒入絡(luò)模型大鼠顯示血小板數(shù)、中性粒細胞比率和單核細胞比率較正常組明顯升高,淋巴細胞比率較正常組明顯降低。SYD及SYD聯(lián)合MTX能較好地降低中性粒細胞和單核細胞比率,上調(diào)淋巴細胞比率。(2)RA濕毒入絡(luò)模型大鼠外周血中IL-6和TNF-α表達水平較正常組都明顯降低;骨關(guān)節(jié)中IL-6和TNF-α表達較正常組都明顯升高。SYD及SYD聯(lián)合MTX都能使外周血低下的IL-6和TNF-α上調(diào),使骨關(guān)節(jié)中升高的IL-6和TNF-α下調(diào)。(3)RA濕毒入絡(luò)模型大鼠外周血中VEGF表達較正常組無差異,而其骨關(guān)節(jié)中VEGF表達較正常組明顯增多。SYD及SYD聯(lián)合MTX均能使骨關(guān)節(jié)中增多的VEGF減少。(4)RA濕毒入絡(luò)模型大鼠肺組織中TGF-β1mRNA的含量較正常組無差異;而其炎性關(guān)節(jié)周圍軟組織中TGF-β1mRNA的含量較正常組明顯減少。SYD聯(lián)合MTX可促進炎性關(guān)節(jié)周圍軟組織中TGF-β1mRNA的表達。2、RA濕毒入絡(luò)模型大鼠AQPs、Na~+,K~+-ATP酶的變化及三黃一龍湯或聯(lián)合MTX的影響(1)RA濕毒入絡(luò)模型大鼠外周血和骨關(guān)節(jié)中AQP1、AQP2、AQP3表達較正常組均明顯降低。(2)RA濕毒入絡(luò)模型大鼠外周血中以AQP2表達最高,其次是AQP3;骨關(guān)節(jié)中以AQP3表達水平最高,其次是AQP2。(3)RA濕毒入絡(luò)模型大鼠肺組織中AQP1mRNA的含量較正常組明顯減少,其腎組織AQP1mRNA的含量較正常組無差異。(4)RA濕毒入絡(luò)模型大鼠脾臟組織Na~+,K~+-ATP酶的活性較正常組明顯減退。(5)SYD及SYD聯(lián)合MTX都能較好地促進RA濕毒入絡(luò)模型大鼠外周血和骨關(guān)節(jié)中AQP1、AQP2、AQP3的表達,SYD聯(lián)合MTX還能顯著地增強肺組織AQP1mRNA的表達。(6)SYD及SYD聯(lián)合MTX能顯著地提高RA濕毒入絡(luò)模型大鼠脾臟組織Na~+,K~+-ATP酶的活性。3、RA濕毒入絡(luò)模型大鼠JAK-STAT通路信號因子的變化及三黃一龍湯或聯(lián)合MTX的影響(1)RA濕毒入絡(luò)模型大鼠外周血中JAK1、JAK2、JAK3表達較正常組明顯降低;骨關(guān)節(jié)中JAK1、JAK3表達較正常組明顯升高;JAK2表達較正常組明顯降低。(2)RA濕毒入絡(luò)模型大鼠肺組織中JAK3mRNA的含量較正常組無差異;腎組織中JAK3mRNA的含量較正常組明顯增多。(3)RA濕毒入絡(luò)模型大鼠外周血和骨關(guān)節(jié)中STAT1表達較正常組無差異。(4)RA濕毒入絡(luò)模型大鼠外周血中STAT3表達較正常組明顯降低;骨關(guān)節(jié)中STAT3表達較正常組無差異。(5)SYD及SYD聯(lián)合MTX可使RA濕毒入絡(luò)模型大鼠外周血中JAK1、JAK2、JAK3及骨關(guān)節(jié)中JAK2的表達上調(diào)。(6)SYD聯(lián)合MTX可使RA濕毒入絡(luò)模型大鼠骨關(guān)節(jié)中升高的JAK1、JAK3表達下調(diào)。(7)SYD及SYD聯(lián)合MTX能上調(diào)外周血STAT3的表達。(8)SYD及SYD聯(lián)合MTX能抑制腎組織中JAK3mRNA的表達。4、RA濕毒入絡(luò)模型大鼠關(guān)節(jié)病理組織學(xué)的變化及三黃一龍湯聯(lián)合MTX的影響(1)RA濕毒入絡(luò)證模型大鼠關(guān)節(jié)組織病理學(xué)表現(xiàn)為巨噬細胞浸潤伴纖維組織增生。(2)SYD聯(lián)合MTX能抑制RA濕毒入絡(luò)模型大鼠關(guān)節(jié)纖維組織的增生和淋巴細胞的浸潤。結(jié)論:本研究證實了濕毒入絡(luò)是RA的基本病機。濕毒入絡(luò)誘導(dǎo)RA發(fā)病與AQPs、Na~+,K~+-ATP酶、JAK等密切相關(guān),表現(xiàn)出外周血、骨關(guān)節(jié)及肺脾腎臟等組織器官中AQP的亞型AQP1、AQP2、AQP3及AQP1mRNA表達減少,Na~+,K~+-ATP酶活性減退,骨關(guān)節(jié)促炎性細胞因子IL-6、TNF-α和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)產(chǎn)生增多,軟組織TGF-β1mRNA減少,信號因子JAK1、JAK3及JAK3mRNA異常表達,關(guān)節(jié)巨噬細胞浸潤伴纖維組織增生。印證了肺主通調(diào)水道、脾主運化功能參與了RA濕毒入絡(luò)的發(fā)生發(fā)展過程。證明了三黃一龍湯及三黃一龍湯聯(lián)合MTX能較好地降低RA的關(guān)節(jié)腫脹、壓痛指數(shù),降低ESR、CRP、DAS28等炎癥指標,抑制外周血和骨關(guān)節(jié)炎性細胞因子IL-6、TNF-α、IFN-γ和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)產(chǎn)生,促進TGF-β1mRNA分泌,增強外周血和骨關(guān)節(jié)AQP1、AQP2、AQP3及肺臟AQP1mRNA的表達,提高脾臟Na~+,K~+-ATP酶的活性,調(diào)控信號因子JAK1、JAK2、JAK3及STAT3等的表達�？勺饔糜诙嘟M織器官,多靶點進行調(diào)節(jié),增強組織細胞的代謝,緩解關(guān)節(jié)滑膜炎癥,抑制滑膜組織血管新生。這為臨床推廣應(yīng)用提供了理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R593.22

【參考文獻】

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本文編號：2719720