【摘要】：研究目的類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一種慢性風(fēng)濕免疫疾病,主要表現(xiàn)為反復(fù)的滑膜炎,導(dǎo)致多關(guān)節(jié)腫痛、變形、活動(dòng)受限,往往演變成殘疾,是致殘率最高的關(guān)節(jié)疾病,嚴(yán)重影響了生活質(zhì)量,是一種終身性疾病。目前RA的具體病因尚不明確。本課題根據(jù)濕性重濁粘滯,久濕形成毒,濕毒郁久化熱致瘀,阻滯經(jīng)脈筋肉,結(jié)合西方病因?qū)W說(shuō)“體液論”,提出“濕毒入絡(luò)”可能導(dǎo)致RA的病因?qū)W理論。濕毒入絡(luò),體液的流動(dòng)或遷移可能刺激水通道蛋白(AQPs)的異常表達(dá);RA的活動(dòng)期炎性滲出,滑膜充血水腫,也可能伴隨水的異常代謝。已有報(bào)道,AQPs在RA的發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著一定的作用,可介導(dǎo)其病理變化過(guò)程中的細(xì)胞遷移。另外,臨床上尚無(wú)根治RA的辦法,大多只停留在對(duì)癥治療,缺乏對(duì)因治療。本課題針對(duì)RA的病因病機(jī)“濕毒入絡(luò)”,擬方三黃一龍湯(SYD)聯(lián)合甲氨蝶呤(MTX)治療RA濕熱痹阻證,從臨床和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)兩方面對(duì)RA發(fā)病機(jī)制和三黃一龍湯或聯(lián)合MTX的作用機(jī)理進(jìn)行了研究。研究方法本課題的第一部分以RA濕熱痹阻證患者的外周血和滑膜液作為研究對(duì)象,從細(xì)胞因子、AQPs及JAK-STAT通路的信號(hào)因子等的表達(dá)及調(diào)控方面進(jìn)行了初步研究,主要采用ELISA法檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)。第二部分復(fù)制出RA濕毒入絡(luò)動(dòng)物模型,以大鼠的外周血、骨關(guān)節(jié)、肺、脾、腎臟等作為研究對(duì)象,從炎性因子、AQPs、Na~+,K~+-ATP酶、JAK-STAT通路的信號(hào)因子及關(guān)節(jié)病理組織學(xué)的變化及調(diào)控進(jìn)行了深入研究,采用了ELISA法、RT-PCR法及病理組織學(xué)等檢測(cè)方法。研究結(jié)果一、RA濕熱痹阻證患者炎性因子、AQPs及JAK-STAT通路信號(hào)因子的變化及三黃一龍湯聯(lián)合MTX的調(diào)控作用及機(jī)制1、RA濕熱痹阻證患者炎性因子的變化及三黃一龍湯聯(lián)合MTX的影響(1)RA濕熱痹阻證患者活動(dòng)期關(guān)節(jié)腫脹指數(shù)、壓痛指數(shù)以及ESR、CRP、DAS28明顯升高;采用SYD聯(lián)合MTX治療,其關(guān)節(jié)腫脹指數(shù)、壓痛指數(shù)及ESR、CRP、DAS28能較快較好地改善。(2)RA濕熱痹阻證患者外周血TNF-α、IFN-γ較健康對(duì)照組顯著升高,滑膜液TNF-α、IFN-γ較外周血明顯升高。(3)采用SYD聯(lián)合MTX治療后TNF-α、IFN-γ顯著下降。2、RA濕熱痹阻證患者AQPs的變化及三黃一龍湯聯(lián)合MTX的影響(1)RA濕熱痹阻證患者外周血和滑膜液中AQP1、AQP2和AQP3的表達(dá)水平較健康者明顯降低。(2)外周血中AQP1、AQP2、AQP3表達(dá)略高于滑膜液,以AQP1表達(dá)最多,AQP3次之,AQP2表達(dá)最少。(3)SYD聯(lián)合MTX可以使RA濕熱痹阻證患者低表達(dá)的AQP1、AQP2和AQP3上調(diào)。3、RA濕熱痹阻證患者JAK-STAT通路信號(hào)因子的變化及三黃一龍湯聯(lián)合MTX的影響(1)RA濕熱痹阻證患者STAT1、STAT3、PIAS1、PIAS3、SOCS-1、SOCS-3的表達(dá)水平較健康者都降低,其中STAT1表達(dá)高于STAT3,PIAS1表達(dá)高于PIAS3,SOCS-1與SOCS-3表達(dá)相當(dāng)。(2)RA外周血中STAT1、PIAS1、PIAS3、SOCS-1的表達(dá)高于滑膜液,而外周血中STAT3、SOCS-3與滑膜液中基本相當(dāng)。(3)經(jīng)SYD聯(lián)合MTX治療,RA濕熱痹阻證患者外周血STAT1、STAT3、PIAS1、PIAS3、SOCS-1都下調(diào),SOCS-3無(wú)明顯變化。二、RA濕毒入絡(luò)模型大鼠炎性因子、AQPs、Na~+,K~+-ATPase、JAK-STAT通路信號(hào)因子及關(guān)節(jié)病理組織學(xué)的變化及三黃一龍湯聯(lián)合MTX的調(diào)控作用及機(jī)制1、RA濕毒入絡(luò)模型大鼠炎性因子的變化及三黃一龍湯或聯(lián)合MTX的影響(1)RA濕毒入絡(luò)模型大鼠顯示血小板數(shù)、中性粒細(xì)胞比率和單核細(xì)胞比率較正常組明顯升高,淋巴細(xì)胞比率較正常組明顯降低。SYD及SYD聯(lián)合MTX能較好地降低中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞比率,上調(diào)淋巴細(xì)胞比率。(2)RA濕毒入絡(luò)模型大鼠外周血中IL-6和TNF-α表達(dá)水平較正常組都明顯降低;骨關(guān)節(jié)中IL-6和TNF-α表達(dá)較正常組都明顯升高。SYD及SYD聯(lián)合MTX都能使外周血低下的IL-6和TNF-α上調(diào),使骨關(guān)節(jié)中升高的IL-6和TNF-α下調(diào)。(3)RA濕毒入絡(luò)模型大鼠外周血中VEGF表達(dá)較正常組無(wú)差異,而其骨關(guān)節(jié)中VEGF表達(dá)較正常組明顯增多。SYD及SYD聯(lián)合MTX均能使骨關(guān)節(jié)中增多的VEGF減少。(4)RA濕毒入絡(luò)模型大鼠肺組織中TGF-β1mRNA的含量較正常組無(wú)差異;而其炎性關(guān)節(jié)周?chē)浗M織中TGF-β1mRNA的含量較正常組明顯減少。SYD聯(lián)合MTX可促進(jìn)炎性關(guān)節(jié)周?chē)浗M織中TGF-β1mRNA的表達(dá)。2、RA濕毒入絡(luò)模型大鼠AQPs、Na~+,K~+-ATP酶的變化及三黃一龍湯或聯(lián)合MTX的影響(1)RA濕毒入絡(luò)模型大鼠外周血和骨關(guān)節(jié)中AQP1、AQP2、AQP3表達(dá)較正常組均明顯降低。(2)RA濕毒入絡(luò)模型大鼠外周血中以AQP2表達(dá)最高,其次是AQP3;骨關(guān)節(jié)中以AQP3表達(dá)水平最高,其次是AQP2。(3)RA濕毒入絡(luò)模型大鼠肺組織中AQP1mRNA的含量較正常組明顯減少,其腎組織AQP1mRNA的含量較正常組無(wú)差異。(4)RA濕毒入絡(luò)模型大鼠脾臟組織Na~+,K~+-ATP酶的活性較正常組明顯減退。(5)SYD及SYD聯(lián)合MTX都能較好地促進(jìn)RA濕毒入絡(luò)模型大鼠外周血和骨關(guān)節(jié)中AQP1、AQP2、AQP3的表達(dá),SYD聯(lián)合MTX還能顯著地增強(qiáng)肺組織AQP1mRNA的表達(dá)。(6)SYD及SYD聯(lián)合MTX能顯著地提高RA濕毒入絡(luò)模型大鼠脾臟組織Na~+,K~+-ATP酶的活性。3、RA濕毒入絡(luò)模型大鼠JAK-STAT通路信號(hào)因子的變化及三黃一龍湯或聯(lián)合MTX的影響(1)RA濕毒入絡(luò)模型大鼠外周血中JAK1、JAK2、JAK3表達(dá)較正常組明顯降低;骨關(guān)節(jié)中JAK1、JAK3表達(dá)較正常組明顯升高;JAK2表達(dá)較正常組明顯降低。(2)RA濕毒入絡(luò)模型大鼠肺組織中JAK3mRNA的含量較正常組無(wú)差異;腎組織中JAK3mRNA的含量較正常組明顯增多。(3)RA濕毒入絡(luò)模型大鼠外周血和骨關(guān)節(jié)中STAT1表達(dá)較正常組無(wú)差異。(4)RA濕毒入絡(luò)模型大鼠外周血中STAT3表達(dá)較正常組明顯降低;骨關(guān)節(jié)中STAT3表達(dá)較正常組無(wú)差異。(5)SYD及SYD聯(lián)合MTX可使RA濕毒入絡(luò)模型大鼠外周血中JAK1、JAK2、JAK3及骨關(guān)節(jié)中JAK2的表達(dá)上調(diào)。(6)SYD聯(lián)合MTX可使RA濕毒入絡(luò)模型大鼠骨關(guān)節(jié)中升高的JAK1、JAK3表達(dá)下調(diào)。(7)SYD及SYD聯(lián)合MTX能上調(diào)外周血STAT3的表達(dá)。(8)SYD及SYD聯(lián)合MTX能抑制腎組織中JAK3mRNA的表達(dá)。4、RA濕毒入絡(luò)模型大鼠關(guān)節(jié)病理組織學(xué)的變化及三黃一龍湯聯(lián)合MTX的影響(1)RA濕毒入絡(luò)證模型大鼠關(guān)節(jié)組織病理學(xué)表現(xiàn)為巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)伴纖維組織增生。(2)SYD聯(lián)合MTX能抑制RA濕毒入絡(luò)模型大鼠關(guān)節(jié)纖維組織的增生和淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)。結(jié)論:本研究證實(shí)了濕毒入絡(luò)是RA的基本病機(jī)。濕毒入絡(luò)誘導(dǎo)RA發(fā)病與AQPs、Na~+,K~+-ATP酶、JAK等密切相關(guān),表現(xiàn)出外周血、骨關(guān)節(jié)及肺脾腎臟等組織器官中AQP的亞型AQP1、AQP2、AQP3及AQP1mRNA表達(dá)減少,Na~+,K~+-ATP酶活性減退,骨關(guān)節(jié)促炎性細(xì)胞因子IL-6、TNF-α和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)產(chǎn)生增多,軟組織TGF-β1mRNA減少,信號(hào)因子JAK1、JAK3及JAK3mRNA異常表達(dá),關(guān)節(jié)巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)伴纖維組織增生。印證了肺主通調(diào)水道、脾主運(yùn)化功能參與了RA濕毒入絡(luò)的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。證明了三黃一龍湯及三黃一龍湯聯(lián)合MTX能較好地降低RA的關(guān)節(jié)腫脹、壓痛指數(shù),降低ESR、CRP、DAS28等炎癥指標(biāo),抑制外周血和骨關(guān)節(jié)炎性細(xì)胞因子IL-6、TNF-α、IFN-γ和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)產(chǎn)生,促進(jìn)TGF-β1mRNA分泌,增強(qiáng)外周血和骨關(guān)節(jié)AQP1、AQP2、AQP3及肺臟AQP1mRNA的表達(dá),提高脾臟Na~+,K~+-ATP酶的活性,調(diào)控信號(hào)因子JAK1、JAK2、JAK3及STAT3等的表達(dá)�？勺饔糜诙嘟M織器官,多靶點(diǎn)進(jìn)行調(diào)節(jié),增強(qiáng)組織細(xì)胞的代謝,緩解關(guān)節(jié)滑膜炎癥,抑制滑膜組織血管新生。這為臨床推廣應(yīng)用提供了理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R593.22

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2719720