【摘要】：慢性疾病糖尿病(DM)是一組以慢性血液葡糖水平增高為特征的代謝疾病癥候群,其主要發(fā)病機(jī)制與胰島素分泌和/或作用缺陷所引發(fā)的血糖升高有關(guān),在其發(fā)病前期,因靶器官敏感程度導(dǎo)致其胰島素含量相對(duì)不足;在其發(fā)病后期,因胰島細(xì)胞受損而導(dǎo)致胰島素含量絕對(duì)不足。治療這種疾病的關(guān)鍵在于促進(jìn)胰島素分泌和抑制胰島細(xì)胞凋亡;因此,許多DM的治療藥物均以治療胰島β細(xì)胞,使其恢復(fù)正常的生物學(xué)功能為主。AWRK6(SWVGKHGKKFGLKKHKKH)是本實(shí)驗(yàn)室分離于東北林蛙表皮、并改良而成的一種新型的生物活性肽,既能夠促進(jìn)Min6細(xì)胞對(duì)胰島素的分泌又能夠抑制相應(yīng)細(xì)胞的凋亡,這些特性均已經(jīng)在本實(shí)驗(yàn)室的前期相關(guān)研究中得到相應(yīng)驗(yàn)證,本研究對(duì)相應(yīng)功能的機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步探討。為探究AWRK6促胰島素分泌分子機(jī)制,本實(shí)驗(yàn)用帶有熒光標(biāo)簽的AWRK6處理Min6細(xì)胞,并觀察其作用位置;運(yùn)用Elisa方法檢測(cè)AWRK6處理GLP-1R基因沉默型Min6細(xì)胞的胰島素分泌量,以分析其作用受體;分別用Epac2抑制劑和PKA抑制劑處理Min6細(xì)胞后,再用AWRK6處理并檢測(cè)其胰島素分泌量,探究AWRK6促胰島素分泌的可能信號(hào)通路。為探究AWRK6抑制細(xì)胞凋亡的功能及其分子機(jī)制,本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)Min6細(xì)胞存活率進(jìn)行了檢測(cè);利用Western Blotting檢測(cè)了磷酸型和裂解型Caspase-9和Caspase-3的含量;利用Elisa檢測(cè)Caspase-12、Caspase-9和Caspase-3的活性;而后,利用Western Blotting檢測(cè)Akt的磷酸化程度,并利用Akt抑制劑,檢測(cè)AWRK6處理的Min6細(xì)胞存活率和Caspase-9的活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,帶有熒光標(biāo)簽的AWRK6與Min6細(xì)胞作用后,綠色熒光位于細(xì)胞膜表面;AWRK6能顯著促進(jìn)Min6細(xì)胞分泌胰島素(P0.01),但會(huì)被Ex-9顯著抑制(P0.01);GLP-1R被沉默后,AWRK6不能促進(jìn)Min6細(xì)胞的胰島素分泌;Epac抑制劑和PKA抑制劑處理后,AWRK6的促胰島素功能被顯著抑制,差異顯著性分別為P0.01和P0.05。AWRK6能顯著抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘發(fā)的Min6細(xì)胞凋亡(P0.01);能顯著增加Caspase-9和Caspase-3的磷酸化水平(P0.01)并顯著降低其裂解型含量(P0.01);AWRK6能夠顯著降低Caspase-12、Caspase-9和Caspase-3的活性(P0.01)。此外,AWRK6能夠顯著促進(jìn)Akt的磷酸化水平(P0.01);在Akt抑制劑處理后,AWRK6的抑制細(xì)胞凋亡的功能被顯著抑制(P0.01),抑制Caspase活性的功能也顯著降低(P0.01)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,可以得到以下實(shí)驗(yàn)結(jié)論:1.AWRK6可能作為一種GLP-1受體激動(dòng)劑來發(fā)揮其促胰島素分泌的功能,其相關(guān)分子機(jī)制可能是通過GLP-1R/cAMP/Epac信號(hào)通路來發(fā)揮作用。2.AWRK6可以通過抑制Caspase家族的活性來緩解由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘發(fā)的細(xì)胞凋亡。其相關(guān)分子機(jī)制是通過Akt使Caspase-9被磷酸化,從而抑制其生物學(xué)活性,進(jìn)而抑制細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位授予單位】：遼寧大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R587.1
【圖文】：

圖 1-1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激下游信號(hào)通路（摘自 CST Guide，有島雜交瘤細(xì)胞 Min6外實(shí)驗(yàn)發(fā)展較為迅速，其原因之一是對(duì)各種細(xì)胞應(yīng)體內(nèi)環(huán)境，能夠大幅度增加研究的效率。相關(guān)來進(jìn)行，通過用藥物處理，探究 ERS 與糖尿病反映出胰島細(xì)胞的基本功能的細(xì)胞系包括 RIN IT 細(xì)胞系[27]、βHC 細(xì)胞系[28]、MIN 細(xì)胞系[29]和是 Min6 胰島細(xì)胞系。胞基本能夠反應(yīng)出胰島細(xì)胞的相應(yīng)生物學(xué)功能：素,而且內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)的大部分基因能在 Min為促進(jìn)胰島素分泌的信號(hào)之一，其信號(hào)的產(chǎn)生主究選取的研究對(duì)象為 Min6 細(xì)胞，其特點(diǎn)為生長驗(yàn)操作較為方便，鑒于以上條件，我們選擇 M

AWRK6促胰島素分泌水平

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2718764