【摘要】：第一部分DOCK5-/-小鼠長期代謝紊亂體內(nèi)研究目的:觀察DOCK5-/-小鼠在高脂和老年因素的誘導下的表型,為深入研究DOCK5如何影響糖脂代謝奠定基礎(chǔ)。方法:野生型小鼠和DOCK5敲除小鼠為研究對象,隨機分為4組:野生型小鼠普食喂養(yǎng)組(SD-WT組,n=15)野生型小鼠高脂喂養(yǎng)組(HFD-WT組,n=15),DOCK5敲除小鼠普食喂養(yǎng)組(SD-DOCK5-/-組,n=15),DOCK5敲除小鼠高脂喂養(yǎng)組(HFD-DOCK5-/-組n=15)。觀察各組小鼠每月體重,3,6,9,12,16月份的攝食、呼吸商、運動耐量及肛溫的變化,測定3月與16月其血糖和血脂等生化指標,3,6,9,12,16月份行葡萄糖耐量試驗,胰島素耐量試驗。評價機體總體糖脂代謝情況及胰島素敏感性的變化。結(jié)果:野生型小鼠和DOCK5敲除鼠在年齡和飲食誘導的情況下表型有如下變化:DOCK5敲除型普食組小鼠與野生型普食組小鼠相比各個月份各個指標沒有顯著性變化(P0.05)5DOCK5敲除型高脂組小鼠各個指標呈現(xiàn)出年齡及高脂飲食誘導后出現(xiàn)的相應變化。與野生型高脂組小鼠相比,DOCK5敲除型高脂組小鼠3-12月體重顯著增高(P0.05);3,6,9,12月份的攝食增加,而呼吸商顯著下降滬0.05);各月份空腹血糖及餐后血糖均明顯增高。3月血壓測量中發(fā)現(xiàn)與野生型普食(SD-WT)組小鼠相比較,敲除普食(SD-DOCK5-/-)組小鼠的血壓無統(tǒng)計學差異,第6個月的高脂誘導組小鼠(HFD-WT組和HFD-DOCK5-/-組)的收縮壓出現(xiàn)統(tǒng)計學意義的增加,但舒張壓仍然沒有統(tǒng)計學差異,9,12,16個月的收縮舒張壓均有統(tǒng)計學差異。16月份基礎(chǔ)態(tài)血糖,血脂水平顯著升高(P0.01或P0.05)。3,6,9,12,16月份GTT和ITT結(jié)果顯示DOCK5敲除高脂組小鼠在負荷狀態(tài)下血糖水平均顯著高于野生型高脂組小鼠(P0.01或P0.05)。結(jié)論:在長期及飲食誘導下,各年齡段DOCK5敲除與野生型普食組代謝指標未出現(xiàn)統(tǒng)計學差異,但各年齡段DOCK5敲除與野生型高脂組相比野生型代謝紊亂表型更明顯。第二部分DOCK5-/-在高脂誘導下誘導肝臟胰島素胰島素信號通路變化目的:探討DOCK5小鼠在高脂誘導的肝臟胰島素信號通路變化。方法:取上一部分3個月的各組小鼠肝臟,檢測胰島素抵抗相關(guān)(IR,AKT,GSK3β,raptor,m-TOR)的蛋白的表達。結(jié)果:在3個月高脂誘導的敲除鼠的肝臟中IR,AKT,GSK3β的磷酸化水平降低,同時raptor的表達與m-TOR的磷酸化水平升高。糖異生基因的相關(guān)蛋白(PEPCK)表達明顯上升。結(jié)論:在營養(yǎng)誘導下,DOCK5對胰島素信號通路起調(diào)節(jié)作用。第三部分DOCK5調(diào)控肝臟糖代謝的分子機制研究目的:在體內(nèi)體外觀察raptor抑制對DOCK5抑制的肝臟胰島素信號通路途徑及相關(guān)糖代謝關(guān)鍵信號分子的影響,探討DOCK5參與胰島素抵抗及葡萄糖代謝紊亂的分子機制。方法利用Ad-shDOCK5和Ad-Cre-CMV腺病毒分別轉(zhuǎn)染raptorloxp/loxp小鼠。在各組小鼠肝臟組織檢測IR,Akt,GSK3β,PEPCK,raptor和m-TOR的表達或活性變化。進行細胞免疫共沉淀試驗明確DOCK5與raptor的相互作用。測量各組小鼠的糖代謝指標空腹血糖,餐后兩小時血糖,ITT,GTT,鉗夾)。結(jié)果:與Ad-GFP組小鼠相比,Ad-shDOCK5轉(zhuǎn)染組小鼠的空腹血糖及餐后兩小時血糖高;ITT,GTT提示Ad-shDOCK5轉(zhuǎn)染組小鼠在負荷下的血糖均較空載組高。在鉗夾穩(wěn)態(tài)期,與Ad-GFP組小鼠相比,Ad-shDOCK5轉(zhuǎn)染組的葡萄糖輸注率(GIR)及葡萄糖清除率(GRd)均顯著降低(P0.01),而肝糖生成(HIGP)顯著升高及肝糖抑制率降低(P0.05)。其次,與Ad-shDOCK5轉(zhuǎn)染組小鼠比較,Ad-shDOCK5+Ad-Cre-CMV轉(zhuǎn)染組小鼠的空腹血糖及餐后兩小時血糖降低明顯;ITT,GTT提示Ad-shDOCK5+Ad-Cre-CMV轉(zhuǎn)染組小鼠在負荷下的血糖均較Ad-shDOCK5轉(zhuǎn)染組小鼠低。在鉗夾穩(wěn)態(tài)期,與Ad-shDOCK5轉(zhuǎn)染組小鼠相比,Ad-shDOCK5+Ad-Cre-CMV轉(zhuǎn)染組的葡萄糖輸注率(GIR)及葡萄糖清除率(GRd)均顯著增高(P0.01),而肝糖生成(HGP)顯著降低及肝糖抑制率明顯升高(P0.01)。與Ad-GFP組小鼠相比,鉗夾基礎(chǔ)狀態(tài)和鉗夾穩(wěn)態(tài)下,Ad-shDOCK5轉(zhuǎn)染組小鼠的各生化指標均明顯升高(P0.01),與Ad-shDOCK5小鼠相比,鉗夾基礎(chǔ)狀態(tài)和鉗夾穩(wěn)態(tài)下,Ad-shDOCK5+Ad-Cre-CMV轉(zhuǎn)染組小鼠的各生化指標均明顯降低薩0.01)。各組小鼠在鉗夾穩(wěn)態(tài)時,胰島素水平明顯升高,TC、TG、FFA均比基礎(chǔ)態(tài)明顯降低;在鉗夾穩(wěn)態(tài)時,Ad-GFP轉(zhuǎn)染組TC、TG水平與Ad-shDOCK5轉(zhuǎn)染組小鼠高組相比顯著降低(P0.05或PO.01)。Ad-shDOCK5+Ad-Cre-CMV轉(zhuǎn)染組TC、TG水平與Ad-shDOCK5轉(zhuǎn)染組小鼠高組相比顯著降低(P0.05或P0.01)。Ad-shDOCK5轉(zhuǎn)染組小鼠肝臟各個指標呈現(xiàn)出胰島素抵抗加重的相應變化薩0.01)。與Ad-GFP轉(zhuǎn)染組小鼠相比,Ad-shDOCK5轉(zhuǎn)染組小鼠肝臟IR,Akt和GSK3β的磷酸化水平顯著下降(P0.05 or P0.01),而m-TOR的磷酸化水平,PEPCK,raptor 表達增高(P0.05 or P0.01);與 Ad-shDOCK5 轉(zhuǎn)染組小鼠相比,Ad-shDOCK5+Ad-Cre-CMV轉(zhuǎn)染組小鼠肝臟IR,Akt和GSK3β的磷酸化水平顯著上升(P0.01),而m-TOR的磷酸化水平PEPCK,raptor表達增高((P0.05orP0.01)。細胞免疫共沉淀試驗提示DOCK5與raptor有直接相互作用。結(jié)論:DOCK5通過raptor/m-TOR途徑發(fā)揮對胰島素信號轉(zhuǎn)導和葡萄糖代謝的調(diào)控,raptor是DOCK5與葡萄糖代謝途徑發(fā)生交互作用的關(guān)鍵因子。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R587.1
【圖文】：

圖 1.1組小鼠體重變化Fig1.1WeightchangesofmiceamongfourgroupsD-WT組比較 vs.HFD-WTgroup,*P<0.05,**P<0.01;與 SD-WT組比較 group,#P<0.05,##P<0.01組別小鼠攝食比較中每 10只小鼠隨機選取 6只小鼠進行攝食實驗。在 3,6,9,12,16兩組小鼠-野生型（SD-WT）與敲除型（SD-DOCK5-/-）的攝食量無。從第 3月開始，高脂誘導的兩組小鼠-野生型（HFD-WT）和OCK5-/-）的攝食量出現(xiàn)統(tǒng)計學意義的變化（P＜0.05和 P＜0.01，HFD-DOCk5-/-）小鼠的攝食量較野生型（HFD-WT）小鼠顯著增加（，該情況在造模第 6個月差異最為顯著（P＜0.01，圖 1.2B）。12至

重慶醫(yī)科大學博士研究生學位論文圖 1.2（A：3月 B：6月 C：9月 D：12月 E：16月）各組小鼠攝食的比較 (n=6)Fig1.2（A：3mouthB：6mouthC：9mouthD：12mouthE：16mouth）Comparisonofmicefoodintakeamongfourgroups(n=6)注：HFD-WT組比較 vs.HFD-WTgroup,*P<0.05,**P<0.01;2.3血壓，肛溫及運動耐量每組中隨機抽取 6只小鼠進行血壓，肛溫及運動耐量測定。在 3,6,9,12,16月份中。3月血壓測量中發(fā)現(xiàn)與野生型普食（SD-WT）組小鼠相比較，敲除普食（SD-DOCK5-/-）組小鼠的血壓無統(tǒng)計學差異，從第 6個月開始的高脂誘導組的兩組小鼠（HFD-WT和HFD-DOCK5-/-）的收縮壓出現(xiàn)統(tǒng)計學意義的變化（P＜0.05和P＜0.01，圖 1.3C,D），但舒張壓仍然沒有統(tǒng)計學差異，直到 9,12,16個月的收縮舒張壓均有統(tǒng)計學差異（P＜0.05和 P＜0.01，圖 1.3E-J）。

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Antidiabetic effect of a novel non-thiazolidinedione PPAR γ/α agonist on ob/ob mice[J];Acta Pharmacologica Sinica;2006年10期

本文編號：2718556