發(fā)布時(shí)間：2020-06-13 12:51

【摘要】：目的:探索研究腸道菌群對(duì)黏膜通透性影響和糖吸收機(jī)制,為糖尿病控血糖研究提供理論和實(shí)踐依據(jù)。方法:選用清潔級(jí)SD(Sprague Dawley,SD)大鼠,50只,本實(shí)驗(yàn)共分為三組:糖尿病組(A組);糖尿病大鼠腸道菌群失衡組(B組);健康對(duì)照組/正常組(C組),平均體重90±5g,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后,高脂高糖飼養(yǎng)四周。禁食12小時(shí)后,測(cè)定空腹血糖9.0mmol/L的大鼠棄之不用。其余合格的大鼠以40mg/kg劑量腹腔注射鏈尿佐菌素(streptozocin,STZ)。3天后禁食12小時(shí),測(cè)定空腹血糖≥16.7mmol/L認(rèn)為糖尿病模型造模成功。從糖尿病組隨機(jī)抽取一半數(shù)量的大鼠,每日以1mg/mL劑量的頭孢曲松鈉灌胃,每日灌胃一次,持續(xù)灌胃一周。一周后采集糞便樣本,進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-變性梯度凝膠電泳(Polymerase Chain Reaction-Denaturing Gradient Gel Electrophoresis,PCR-DGGE)后,通過(guò)電泳圖觀(guān)察到該組菌群條帶數(shù)明顯少于正常組,為糖尿病大鼠腸道菌群失衡模型造模成功。造模成功后,每只大鼠灌胃乳果糖及甘露醇,劑量為120mg乳果糖、80mg甘露醇各1mL~([1])。大鼠灌胃后,每只放在單獨(dú)的分層鼠籠中,禁食禁水,收集24小時(shí)尿液,利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)測(cè)定尿液中乳果糖甘露醇排出量。每日觀(guān)察大鼠表觀(guān)體征,記錄體重及精神狀態(tài)等。每三日測(cè)一次血糖,每周取糞便觀(guān)察腸道菌群改變情況。處死后取大鼠小腸組織進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀(guān)察,制備小腸組織勻漿用以測(cè)定小腸上皮細(xì)胞Na~+-K~+-ATP酶。結(jié)果:1.糖尿病大鼠成模率本次實(shí)驗(yàn)共選取50只SD大鼠注射40mg/kg劑量的STZ建立糖尿病模型,其中30只成模,成模率60%。2.腸道菌群失衡對(duì)糖尿病大鼠表觀(guān)體征的影響糖尿病菌群失衡組與糖尿病組大鼠相比較出現(xiàn)腹瀉癥狀,糞便稀軟、顏色呈黃色;糖尿病組與正常對(duì)照組大鼠比較出現(xiàn)行動(dòng)遲緩、精神萎靡、皮毛不光滑、脫毛現(xiàn)象嚴(yán)重、體態(tài)消瘦。3.腸道菌群失衡對(duì)糖尿病大鼠體重的影響實(shí)驗(yàn)顯示,正常組大鼠體重為437.8±12.69g,糖尿病組大鼠體重為233.5±6.33g,糖尿病菌群失衡組大鼠體重為236.2±5.20g,糖尿病菌群失衡組與正常組相比,體重明顯降低,差異極顯著(p0.01),糖尿病組與糖尿病菌群失衡組相比無(wú)明顯差異,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),糖尿病組大鼠與正常組相比,體重明顯降低,差異極顯著(p0.01)。4.腸道菌群失衡對(duì)糖尿病大鼠血糖變化的影響正常組SD大鼠空腹血糖為5.263±0.18mmol/L,糖尿病組SD大鼠空腹血糖為23.23±1.08mmol/L,菌群失衡糖尿病組SD大鼠空腹血糖為22.98±0.69mmol/L,糖尿病菌群失衡組大鼠與正常對(duì)照組相比,糖尿病菌群失衡組大鼠空腹血糖明顯高于正常對(duì)照組(p0.01),糖尿病組與糖尿病菌群失衡組大鼠相比血糖變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),糖尿病組大鼠與正常對(duì)照組相比,糖尿病組大鼠空腹血糖明顯高于正常對(duì)照組(p0.01)。5.腸道菌群失衡對(duì)糖尿病大鼠黏膜透性變化的影響實(shí)驗(yàn)顯示,正常組大鼠尿液中乳果糖/甘露醇比值為0.3160±0.12,糖尿病組大鼠尿液中乳果糖/甘露醇比值為0.7249±0.10,糖尿病菌群失衡組大鼠尿液中乳果糖/甘露醇比值為1.541±0.33,糖尿病菌群失衡組與糖尿病組相比,糖尿病菌群失衡組乳果糖/甘露醇比值高于糖尿病組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),糖尿病菌群失衡組與正常組相比,糖尿病菌群失衡組乳果糖/甘露醇比值升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),糖尿病組與正常組相比,糖尿病組乳果糖/甘露醇比值升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。6.腸道菌群失衡糖尿病大鼠的菌群分析實(shí)驗(yàn)顯示,正常對(duì)照組條帶數(shù)為30.00±1.47條,糖尿病組條帶數(shù)為22.00±0.58條,糖尿病菌群失衡組條帶數(shù)為9.667±0.33條,糖尿病菌群失衡組與糖尿病組相比,條帶數(shù)減少,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),糖尿病菌群失衡組與正常對(duì)照組相比,條帶數(shù)減少,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),糖尿病組與正常對(duì)照組相比,條帶數(shù)減少,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。7.腸道菌群失衡對(duì)糖尿病大鼠小腸組織形態(tài)的影響每組隨機(jī)抽取3只大鼠對(duì)其十二指腸、空腸、回腸進(jìn)行小腸組織形態(tài)學(xué)的觀(guān)察后發(fā)現(xiàn),糖尿病菌群失衡組十二指腸肌肉層較正常組薄,空腸絨毛腫脹、十二指腸及回腸絨毛斷裂脫落現(xiàn)象明顯,回腸黏膜下層有淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。糖尿病組絨毛排列不規(guī)則,斷裂現(xiàn)象嚴(yán)重,回腸段尤為突出,空腸及回腸肌肉層有明顯孔洞,正常對(duì)照組無(wú)明顯改變。8.腸道菌群失衡對(duì)糖尿病大鼠小腸上皮細(xì)胞Na~+-K~+-ATP酶變化的影響實(shí)驗(yàn)顯示,正常組大鼠小腸上皮細(xì)胞Na~+-K~+-ATP酶含量為2.812±0.25ng/mL,糖尿病組大鼠小腸上皮細(xì)胞Na~+-K~+-ATP酶含量為1.877±0.13ng/mL,糖尿病菌群失衡組大鼠小腸上皮細(xì)胞Na~+-K~+-ATP酶含量為1.500±0.07ng/mL,糖尿病菌群失衡組與糖尿病組相比,大鼠小腸上皮細(xì)胞Na~+-K~+-ATP酶含量降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),糖尿病菌群失衡組與正常組相比大鼠小腸上皮細(xì)胞Na~+-K~+-ATP酶含量也明顯降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,差異極顯著(p0.01),糖尿病組與正常組相比大鼠小腸上皮細(xì)胞Na~+-K~+-ATP酶含量明顯降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,差異極顯著(p0.01)。結(jié)論:1.40mg/kg劑量的鏈尿佐菌素(STZ)成功建立了2型糖尿病大鼠模型。2.低劑量頭孢曲松鈉對(duì)糖尿病大鼠每日一次,連續(xù)灌胃一周可造成糖尿病大鼠腸道菌群失衡。3.糖尿病菌群失衡大鼠小腸上皮細(xì)胞Na~+-K~+-ATP酶活性顯著降低。4.糖尿病菌群失衡大鼠腸屏障通透性升高。
【圖文】：

結(jié) 果1.糖尿病大鼠成模率本次實(shí)驗(yàn)共選取 50 只 SD 大鼠，，注射 40mg/kg 劑量的 STZ 建立糖尿病模型，其中 30 只成模，成模率 60%。2.腸道菌群失衡對(duì)糖尿病大鼠表觀(guān)體征的影響糖尿病菌群失衡組與糖尿病組大鼠相比較出現(xiàn)腹瀉癥狀，糞便稀軟、顏色呈黃色；糖尿病組與正常對(duì)照組大鼠比較出現(xiàn)行動(dòng)遲緩、精神萎靡、皮毛不光滑、脫毛現(xiàn)象嚴(yán)重、體態(tài)消瘦。各組實(shí)驗(yàn)大鼠表觀(guān)圖如下：

組大鼠與正常組相比，體重明顯降低，差異極顯著（p<0.01）。4.腸道菌群失衡對(duì)糖尿病大鼠血糖變化的影響圖 3 各組大鼠血糖變化折線(xiàn)圖3.腸道菌群失衡對(duì)糖尿病大鼠體重的影響
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R587.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2711208