【摘要】：目的:觀察經(jīng)導(dǎo)管胃左動脈栓塞術(shù)對肥胖伴2型糖尿病(T2DM)比格犬模型的體重、瘦素(leptin)、饑餓激素(ghrelin)蛋白表達水平及相關(guān)生化指標(biāo)的影響。確定胃左動脈栓塞對Beagle犬模型內(nèi)分泌因素的影響。方法:本研究以隨機對照設(shè)計原則,比格犬為研究對象的觀察對比實驗。1)2型糖尿病模型建立:健康成年雄性比格犬9只,隨機分兩組分別是處理組和對照組,處理組采用特殊的高脂高糖飲食喂養(yǎng)4周,腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)檸檬酸鈉溶液25 mg/kg,后繼續(xù)給予高熱量飲食喂養(yǎng)至10周,對照組給予普通進食,2型糖尿病模型造模成功后,實驗組采用完全隨機方法分栓塞組和非栓塞組,各亞組實驗所需Beagle犬3只:A組:2型糖尿病栓塞組,行經(jīng)導(dǎo)管胃左動脈聚乙烯醇藥物顆粒(PVA)栓塞組;B組:2型糖尿病未栓塞組,經(jīng)導(dǎo)管胃左動脈生理鹽水12ml灌注;C組:對照組經(jīng)導(dǎo)管胃左動脈生理鹽水12ml灌注。手術(shù)后10周后處死動物,提取血清用Elisa方法檢測瘦素、饑餓激素、胰島素濃度表達水平,同時每周測量動物體重,測量血糖及相關(guān)生化指標(biāo),并進行統(tǒng)計分析。2)單純性肥胖模型建立:健康成年雄性比格犬9只,隨機分兩組分別是實驗組和對照組,實驗組給予專用的高能量飼料,對照組給予普通常規(guī)飼料,肥胖模型造模成功后,實驗組以是否栓塞為據(jù)分栓塞組和非栓塞組,各亞組實驗所需Beagle犬3只:A組:肥胖栓塞組,聚乙烯醇顆粒(PVA)經(jīng)導(dǎo)管胃左動脈栓塞組;B組:肥胖未栓塞組,經(jīng)導(dǎo)管胃左動脈生理鹽水12ml灌注;C組:對照組,經(jīng)導(dǎo)管胃左動脈生理鹽水12ml灌注。手術(shù)后10周處死實驗動物,提取胃組織蛋白質(zhì),用western blot方法檢測瘦素,饑餓激素蛋白表達水平,同時術(shù)后每兩周測量動物體重,飲食量及相關(guān)生化指標(biāo),最后進行統(tǒng)計分析。結(jié)果:1)Elisa方法檢測結(jié)果顯示,肥胖伴T2DM栓塞組(5.35±0.094)與未栓塞組(11.24±0.16)比Ghrelin表達量降低,具有顯著性差異(P0.05),栓塞組與正常對照組(7.705±0.09)比ghrelin表達量降低,具有顯著性差異(P0.05),術(shù)后Ghrelin的濃度降低。2)肥胖伴T2DM栓塞組(7.43±0.11)比未栓塞組Leptin表達量(15.40±0.07)具有顯著性差異(P0.05),栓塞組與正常對照組(9.38±0.11)Leptin具有顯著性差異(P0.05)。肥胖伴T2DM栓塞組(19.55±0.2274)比未栓塞組表達量(17.72±0.1298)血清胰島素濃度有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),實驗組栓塞組與正常對照組(20.89±0.1144)有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),術(shù)后胰島素濃度升高。肥胖伴T2DM栓塞組(12.57±0.25)比未栓塞組表胰島素抵抗表達量(7.260±0.13)有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),實驗組栓塞組與正常對照組(5.015±0.17)有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),術(shù)后胰島素抵抗改善。2)Western-blotting結(jié)果顯示:單純性肥胖栓塞組(0.7846±0.4184)比未栓塞組Ghrelin表達量(2.31±0.26)具有顯著性差異(P0.05),處理組栓塞組與正常對照組(1.07±0.30)具有顯著性差異(P0.05),術(shù)后Ghrelin的蛋白表達明顯降低。單純性肥胖栓塞組(0.66±0.14)比未栓塞組Leptin蛋白表達量(2.15±0.24)有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),與正常對照組(1.20±0.07)有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),術(shù)后Leptin的蛋白表達水平明顯降低。結(jié)論:胃左動脈栓塞術(shù)可以有效地抑制組織Leptin,Ghrelin蛋白表達水平,并引起體重的降低;經(jīng)導(dǎo)管胃左動脈栓塞術(shù)對肥胖、肥胖伴2型糖尿病Leptin,Ghrelin濃度有明顯的降低作用;經(jīng)導(dǎo)管胃左動脈栓塞術(shù)對肥胖伴2型糖尿病比格犬的血糖的降低、改善胰島素抵抗及胰島素水平升高起一定的積極作用。
【圖文】：

造影:A 組-2 型糖尿病栓塞實驗組:經(jīng)導(dǎo)管聚乙烯塞完成金標(biāo)準:胃底部染色區(qū)域可見 PVA 在血管組:經(jīng)導(dǎo)管 0.9%生理鹽水 6ml 胃左動脈灌注。管，0.9%生理鹽水 6ml 胃左動脈灌注。實驗動管，各肌肉縫合，，逐漸縫合皮膚。術(shù)中預(yù)防術(shù)后予 40 萬單位青霉素靜脈滴注，術(shù)后給予 2000m觀察生命特征及術(shù)區(qū)恢復(fù)情況，術(shù)后 10 天拆線選擇性造影 圖 2 胃左動脈 LGA Fig 2 LGA

圖 4 ghrelin elisa 標(biāo)準曲線配置方法Fig. 4 ghrelin elisa stander curve清 leptin 濃度檢測* wash buffer 加入 450ml ddH2O 配置成 1*wash buffer。加入 80ul 標(biāo)準品（圖 5），樣品,混勻。空加入 20ul assay buffer,混勻。 20ul canine leptin,混勻，再加入 20ul QC1 和 20ul QC2,混勻。-500 prm 轉(zhuǎn)速室溫搖勻 2 個小時。加入 300ul wash buffer 先 3 次，每次 3 分鐘。 100ul 標(biāo)記抗體，室溫放置 1 小時。加入 300ul wash buffer 先 3 次，每次 3 分鐘。 100ul 酶標(biāo)記物，室溫放置 30 分鐘。 600ul wash bufffer 洗 6 次每次 5 分鐘。 100ul 終止液。光光度計測量 OD 370nm 時的分光光度值。
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R587.1

【參考文獻】

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本文編號：2709972