發(fā)布時間：2020-06-11 09:51

【摘要】：第一章腸道菌群在Roux-en-Y胃旁路術(shù)改善糖脂代謝中作用的實驗研究背景:減重代謝手術(shù)是目前肥胖合并2型糖尿病(T2D)最有效的治療手段之一,但機(jī)制仍不清楚。減重代謝手術(shù)誘導(dǎo)的腸道菌群變化可能與術(shù)后的代謝改善有關(guān)。目的:篩選可能在Roux-en-Y胃旁路術(shù)(RYGB)改善糖脂代謝中發(fā)揮積極作用的腸道菌群。方法:高脂飲食聯(lián)合鏈脲佐菌素誘導(dǎo)T2D大鼠模型,分為RYGB組和假手術(shù)組(SHAM)。分別采集術(shù)前和術(shù)后第8周大鼠糞便樣本,采用16S核糖體RNA(rRNA)基因測序分析腸道菌群。此外,對T2D患者的腸道菌群特征進(jìn)行病例對照研究,結(jié)腸鏡下采集盲腸黏膜黏液樣本,通過16SrRNA基因測序分析腸道菌群。結(jié)果:RYGB術(shù)后T2D大鼠的體重減輕,葡萄糖耐受性和胰島素敏感性均顯著改善。術(shù)后RYGB組的擬桿菌門(Bacteroidete)、變形菌門(Proteobacteri)、梭桿菌門(Fusobacteria)和放線菌門(Actinobacteria)富集,而SHAM組的厚壁菌門(Firmicutes)和庶微菌門(Verrucomicrobia)富集。結(jié)合T2D患者腸道菌群特征,鑒定出腸道菌群中的紅蝽桿菌科(Coriobacteriaceae)可能在術(shù)后葡萄糖代謝改善中發(fā)揮積極作用。結(jié)論:RYGB可顯著改善T2D大鼠葡萄糖代謝,改變腸道菌群。紅蝽桿菌科(Coriobacteriaceae)菌群在RYGB改善糖脂代謝中可能發(fā)揮積極作用。第二章近端空腸在Roux-en-Y胃旁路術(shù)改善糖脂代謝中作用的實驗研究背景:研究表明表觀遺傳改變在肥胖和糖尿病發(fā)生發(fā)展中起到重要的作用,RYGB對DNA甲基化具有重塑作用。前腸理論認(rèn)為RYGB術(shù)后曠置的近端腸道在T2D的改善中發(fā)揮重要作用。目的:通過DNA甲基化及轉(zhuǎn)錄組分析,研究近端空腸在RYGB治療T2D大鼠中的可能作用。方法:建立第一批T2D大鼠手術(shù)模型,分為RYGB組和SHAM組。術(shù)后第8周采集大鼠近端空腸,分別采用甲基化DNA免疫共沉淀測序(MeDIP-seq)和轉(zhuǎn)錄組測序(RNA-seq)進(jìn)行DNA甲基化和轉(zhuǎn)錄組分析。建立第二批T2D大鼠手術(shù)模型,并用新的樣本分別采用MassARRAY平臺DNA甲基化分析技術(shù)和實時熒光定量PCR(qPCR)對高通量測序分析結(jié)果進(jìn)行驗證。結(jié)果:RNA-seq結(jié)果顯示兩組間差異表達(dá)的基因顯著富集于脂肪酸代謝和脂質(zhì)轉(zhuǎn)運相關(guān)的GO生物學(xué)過程。MeDIP-seq結(jié)果顯示DNA啟動子區(qū)存在顯著差異甲基化的已知基因有1973個(P0.05且差異倍數(shù)2)。RYGB術(shù)后近端空腸中Mogat3的啟動子區(qū)甲基化顯著升高且基因轉(zhuǎn)錄水平顯著降低。新的樣本中甲基化定量分析和qPCR驗證結(jié)果與高通量測序分析結(jié)果一致。結(jié)論:RYGB術(shù)后大鼠近端空腸中Mogat3基因啟動子區(qū)甲基化增高,可能抑制基因轉(zhuǎn)錄表達(dá),并在術(shù)后脂肪和葡萄糖代謝改善中發(fā)揮作用。
【圖文】：

邐Ｂ邐．＇煖逡逑圖１－１大鼠飼料。（Ａ）普通飼料；（Ｂ）高脂飼料。逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－１．邋Ｒａｔ邋ｄｉｅｔｓ．邋（Ａ）邋Ｎｏｒｍａｌ邋ｃｈｏｗ邋ｄｉｅｔ邋ａｎｄ邋（Ｂ）邋ｈｉｇｈ邋ｆａｔ邋ｄｉｅｔ．逡逑１．２．２．２．２建立２型糖尿病大鼠模型逡逑高脂飲食組（ＨＦＤ）大鼠飼養(yǎng)１２周誘導(dǎo)肥胖及胰島素抵抗，測量體重（具逡逑體方法見監(jiān)測指標(biāo)及測量方法），然后聯(lián)合腹腔注射小劑量鏈脲佐菌素（ＳＴＺ）逡逑誘導(dǎo)２型糖尿病模型：根據(jù)大鼠體重計算ＳＴＺ用量（按３０ｍｇ／Ｋｇ體重），配制逡逑成１％邋ＳＴＺ溶液（具體配置方法詳見實驗試劑和材料）后腹腔注射。注射ＳＴＺ邋７２逡逑小時后，采集尾靜脈血用血糖儀測量隨機(jī)血糖，兩次血糖水平均２１６．７邋ｍｍｏｌ／Ｌ，逡逑被認(rèn)為處于糖尿病狀態(tài)，即建模成功，可用于進(jìn)一步實驗研究［３８］。將Ｔ２Ｄ大鼠逡逑模型按隨機(jī)數(shù)字分組法分為兩組：Ｒｏｕｘ－ｅｎ－Ｙ胃旁路術(shù)組（ＲＹＧＢ）和假手術(shù)組逡逑（ＳＨＡＭ），，分別行ＲＹＧＢ術(shù)和假手術(shù)治療（圖１－２）。逡逑Ａ邋：逡逑Ｔｓｔｚ邐ｙ逡逑假手術(shù)零逡逑７邋？邐八：消毒８：開腹（：：斷胃０：閉合胃＿逡逑？５ｔ２ｄ＊ｅ邐ｅ邋：邐ｇ邋

被認(rèn)為處于糖尿病狀態(tài)，即建模成功，可用于進(jìn)一步實驗研究［３８］。將Ｔ２Ｄ大鼠逡逑模型按隨機(jī)數(shù)字分組法分為兩組：Ｒｏｕｘ－ｅｎ－Ｙ胃旁路術(shù)組（ＲＹＧＢ）和假手術(shù)組逡逑（ＳＨＡＭ），分別行ＲＹＧＢ術(shù)和假手術(shù)治療（圖１－２）。逡逑Ａ邋：逡逑Ｔｓｔｚ邐ｙ逡逑假手術(shù)零逡逑７邋？邐八：消毒８：開腹（：：斷胃０：閉合胃＿逡逑？５ｔ２ｄ＊ｅ邐ｅ邋：邐ｇ邋：逡逑圖１－２邋２型糖尿病及ＲＹＧＢ大鼠模型的建立逡逑８逡逑
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R587.2;R589.2

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本文編號：2707729