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環(huán)指蛋白10對(duì)高糖誘導(dǎo)下血管平滑肌細(xì)胞功能的影響

發(fā)布時(shí)間:2020-06-08 22:33
【摘要】:目的:探討RNF10對(duì)高糖誘導(dǎo)下血管平滑肌細(xì)胞功能的作用機(jī)制。方法:模擬代謝綜合征血管再狹窄的模型,體外采用高糖(4.5g/L)培養(yǎng)基誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞(Vascular smooth muscle cells,VSMCs)過度增殖及細(xì)胞外基質(zhì)沉積的病理狀態(tài)。根據(jù)不同培養(yǎng)基及腺病毒轉(zhuǎn)染情況,共分為4組:空白對(duì)照組(Control group);高糖組(High Glucose,HG group);高糖+病毒空載體組(HG+Ad-GFP group);高糖+過表達(dá)RNF10組(HG+Ad-RNF10 group)。熒光顯微鏡下定性分析VSMCs腺病毒轉(zhuǎn)染效果;CCK-8和EdU檢測VSMCs的增殖率;流式細(xì)胞儀檢測VSMCs的周期分布;Western blot定量分析VSMCs的RNF10、CyclinD1和CDK4的蛋白表達(dá);qPCR定量分析VSMCs的MMP-2和TIMP-2 mRNA的表達(dá)。結(jié)果:(1)RNF10顯著抑制高糖誘導(dǎo)下VSMCs的增殖率(P0.05);(2)RNF10顯著抑制高糖誘導(dǎo)下VSMCs的周期從G_0-G_1期到S期的轉(zhuǎn)化(P0.05);(3)RNF10顯著抑制高糖誘導(dǎo)下VSMCs的周期蛋白CyclinD1和CDK4的表達(dá)(P0.05);(4)RNF10顯著促進(jìn)MMP-2和TIMP-2的轉(zhuǎn)錄水平(均P0.05),且促進(jìn)TIMP-2 mRNA更為明顯,最終導(dǎo)致顯著降低MMP-2/TIMP-2(P0.05)。結(jié)論:RNF10可明顯改善高糖誘導(dǎo)下VSMCs的功能,其機(jī)制可能與抑制VSMCs增殖反應(yīng)和細(xì)胞外基質(zhì)沉積有關(guān)。
【圖文】:

轉(zhuǎn)染效率,病毒


圖 1:病毒轉(zhuǎn)染效率檢測Figure 1: Measurements of adenovirus transfection efficiency;A:Fluorescence microscopy oftransfection efficiency ofAd-GFP and Ad-RNF10 in VSMCs;B:Quantification of RNF10protein expressions of VSMCs by western blot;# P<0.05 vs. HG+Ad-GFP.2.2 RNF10 顯著抑制高糖誘導(dǎo)下 VSMCs 的過度增殖采用 CCK8 試劑盒評(píng)估 RNF10 對(duì)高糖誘導(dǎo)下 VSMCs 增殖率的影響。結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組相比,高糖組和高糖+病毒空載體組的細(xì)胞增殖率顯著上升(P<0.05),進(jìn)一步提示高糖可明顯促進(jìn) VSMCs 的增殖反應(yīng);與高糖+病毒空載體組相比,,高糖+過表達(dá) RNF10 組的細(xì)胞增殖率顯著下降(P<0.05),進(jìn)一步提示 RNF10 明顯抑制高糖誘導(dǎo)下 VSMCs 的過度增殖。除此之外,也采用 EdU 試劑盒雙重驗(yàn)證 RNF10 對(duì)高糖誘導(dǎo)下 VSMCs 增殖率的影響。結(jié)果顯示, 與空白對(duì)照組相比,高糖組和高糖+病毒空載體組的細(xì)胞增殖率顯著上升(P<0.05),提示高糖

增殖率,周期分布,流式細(xì)胞術(shù),細(xì)胞周期


圖 2:檢測 RNF10 對(duì)高糖誘導(dǎo)下 VSMCs 增殖率的影響Figure 2: assessments of RNF10 on the proliferation of VSMCs exposed to high glucose;A:CCK8 assays; B:fluorescence microscopy of EdU assay; Red staining demonstrated cellundergoing proliferation; nuclei were stained by DAPI (blue); C: Quantification of EdUpositive index shown as a percentage (positive cell number); * P<0.05 vs. Control group;# P<0.05 vs. HG+Ad-GFP group.2.3 RNF10 顯著阻滯高糖誘導(dǎo)下 VSMCs 的周期從 G0-G1 期向 S 期的轉(zhuǎn)化采用流式細(xì)胞術(shù)檢測 RNF10 對(duì)高糖誘導(dǎo)下 VSMCs 的周期分布的影響。結(jié)果顯示, 與空白對(duì)照組相比,高糖組和高糖+病毒空載體組中處于 G0-G1期的 VSMC數(shù)量顯著下降,同時(shí)處于 S 期的 VSMCs 數(shù)量顯著上升(均 P<0.001),進(jìn)一步提示高糖可顯著誘導(dǎo) VSMCs 的細(xì)胞周期由 G0-G1期向 S 期過渡,進(jìn)而促進(jìn) VSMC
【學(xué)位授予單位】:重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2019
【分類號(hào)】:R589

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本文編號(hào):2703746

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