【摘要】：第一部分MMPs在頸椎類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維組織中的表達(dá)情況目的:為觀察金屬基質(zhì)蛋白酶家族(MMPs)在頸椎類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)腫的成纖維組織(rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocyte,RA-FLS)中的表達(dá)情況。方法:從頸椎RA的患者中的滑膜組織中提取并體外培養(yǎng)RA-FLS,運(yùn)用免疫組織化學(xué)(IHC),蘇木精-伊紅染色(HE)染色,蛋白質(zhì)印記檢測(WB),免疫熒光檢測(IF)方法來進(jìn)行測定MMPs在頸椎RA成纖維組織中的表達(dá)情況。結(jié)果:我們在脊柱外科的手術(shù)中,獲取Trauma-FLS及頸椎RA-FLS,應(yīng)用IHC,WB方法檢測了MMPs在FLS中的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)MMPs在RA組明顯高于Trauma組的患者。另外,我們還從滑膜組織中提取并培養(yǎng)了原代FLS后進(jìn)行IHC,IF檢測,結(jié)果同樣顯示MMPs在RA-FLS中表達(dá)高于Trauma-FLS。并提示了MMPs通過NF-κB通路參與頸椎RA滑膜的增殖,MMPs在頸椎RA-FLS的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均有表達(dá)。小結(jié):這些結(jié)果表明MMPs在頸椎RA-FLS的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均有表達(dá)。第二部分羥基積雪草苷抑制佐劑性頸椎RA大鼠的骨破壞的實(shí)驗(yàn)xO究目的:為觀察羥基積雪草酸(madecassoside,MC)對(duì)MMPS誘導(dǎo)的頸椎類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)中的滑膜成纖維細(xì)胞的遷徙及侵襲能力的影響。方法:將大鼠隨機(jī)分成三組,分別為正�？瞻讓�(duì)照組,頸椎RA疾病模型組,羥基積雪草苷(MC)治療組。并提純MC溶液,通過觀察大鼠的x線情況,一般情況及炎性腫脹評(píng)分來測定MC溶液對(duì)頸椎RA-FLS的作用,并利用Hoechst染色及雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)來確定MC通過調(diào)控MMPs來抑制大鼠頸椎RA的骨破壞情況。結(jié)果:MC可以緩解頸椎RA大鼠的癥狀,頸后部注射MC的治療組大鼠關(guān)節(jié)腫脹程度明顯減輕,寰樞關(guān)節(jié)直徑和關(guān)節(jié)炎炎性評(píng)分則顯著下降。并且,治療的大鼠病理變化得到明顯改善,軟骨的損傷,滑膜增生得到緩解,炎性細(xì)胞浸潤減少。小結(jié):這些結(jié)果表明MC溶液可以抑制MMPs誘導(dǎo)的頸椎RA-FLS,起到抑制其骨破壞的作用。第三部分羥基積雪草苷通過NF-κB通路調(diào)控MMP-13的表達(dá)抑制佐劑性頸椎RA大鼠的骨破壞的實(shí)驗(yàn)xO究目的:利用大鼠造模模型以研究MC通過NF-κB通路的調(diào)控,來通過抑制MMP-13的表達(dá)以達(dá)到抑制佐劑性大鼠的骨破壞的研究。方法:利用雙熒光素酶報(bào)告基因分析MC對(duì)轉(zhuǎn)錄因子NF-κB通路啟動(dòng)子結(jié)合活性的影響,證實(shí)通過NF-κB通路的下調(diào)以抑制MMP-13的表達(dá)。同時(shí)通過酶連檢測法(ELISA)檢測MC通過調(diào)控MMP-13對(duì)頸椎大鼠RA的炎性因子的分泌影響。通過染色質(zhì)免疫共沉(Chromatin immunoprecipitation assay,Ch IP)進(jìn)一步證實(shí)MC對(duì)NF-κB通路與MMP-13的作用。結(jié)果:RA-FLS細(xì)胞經(jīng)過MC治療處理后,與對(duì)照組比,CD~(4+)、CD~(8+)T淋巴細(xì)胞數(shù)量均有顯著的大量增加,發(fā)揮了免疫凋節(jié)的作用,同時(shí)ChIP檢測MC對(duì)NF-κB與MMP-13啟動(dòng)子結(jié)合活性的影響,促進(jìn)RA-FLS細(xì)胞的調(diào)亡。在大鼠RA頸椎寰樞關(guān)節(jié)中,NF-κB被激活,呈信號(hào)表達(dá),而經(jīng)過MC溶液處理后,NF-κB的表達(dá)呈明顯下調(diào)。跟NF-κB通路蛋白一樣,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,經(jīng)過MC處理后24h和48h后,IL-2、IL-α和IFN-γ的分泌表達(dá)都有明顯的增加,提示MC溶液分子能促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的增殖。小結(jié):MC通過下調(diào)NF-κB通路以達(dá)到抑制MMP-13的表達(dá),同時(shí)MC通過上述免疫調(diào)節(jié)及交叉調(diào)控以達(dá)到抑制頸椎RA-FLS的骨破壞作用。結(jié)論:MMPs在頸椎RA-FLS的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均有表達(dá),MC通過下調(diào)NF-κB通路以達(dá)到抑制MMP-13的表達(dá)抑制頸椎RA-FLS的骨破壞作用。
【圖文】：

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎易累計(jì)手足Fig.1ThehandofRA

枕頸融合術(shù)Fig.2postoperationofatlanto-axialsubluxation
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R593.22

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本文編號(hào)：2703573