【摘要】：第一部分:絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松疾病中TNF-α通過JNK信號途徑上調(diào)Semaphorin3D蛋白表達(dá)誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化一、研究目的骨質(zhì)疏松嚴(yán)重威脅中老年人健康,是全球性的公共衛(wèi)生問題。女性絕經(jīng)后誘導(dǎo)形成的骨質(zhì)疏松癥是目前研究最多,同時也是發(fā)病率最高的骨質(zhì)疏松癥類型。絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松(Postmenopausal osteoporosis,PMOP)是一種與雌激素缺乏直接相關(guān),以全身性骨量減少及骨組織顯微結(jié)構(gòu)破壞為特征,導(dǎo)致骨脆性增加和易于骨折的代謝性骨病。然而迄今有關(guān)PMOP發(fā)病的確切機(jī)制尚未完全闡釋。雌激素減少導(dǎo)致破骨細(xì)胞的過度活躍是PMOP發(fā)生的重要機(jī)制之一。伴隨婦女更年期雌激素水平的下降,促進(jìn)了T細(xì)胞及成骨細(xì)胞等產(chǎn)生刺激破骨細(xì)胞分化和活化的細(xì)胞因子。體內(nèi)的雌激素主要是通過這些細(xì)胞因子等途徑間接調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞的形成。目前發(fā)現(xiàn),在這些因子中TNF-α作為PMOP發(fā)生的核心因素,其對破骨細(xì)胞分化的正向調(diào)控是PMOP中破骨細(xì)胞分化增加的重要原因。由于TNF-α對破骨細(xì)胞調(diào)控方式的多樣性和調(diào)控機(jī)制的復(fù)雜性,其確切的調(diào)控機(jī)制仍需進(jìn)一步探索。目前,越來越多的研究證實SemaphorinsⅢ(Sema3)家族蛋白在骨代謝紊亂以及骨質(zhì)疏松疾病中具有重要功能。基因敲除Sema3A的小鼠骨質(zhì)明顯的減少。1,25-二羥基維生素D3(1,25-(OH)2D3)能夠上調(diào)成骨細(xì)胞中Sema3B的表達(dá),從而間接促進(jìn)破骨細(xì)胞的分化引起骨吸收增加。然而,目前尚不清楚SemaⅢ家族蛋白是否也參與了PMOP中TNF-α對破骨細(xì)胞分化的調(diào)節(jié)作用。本研究擬通過體內(nèi)及體外實驗,結(jié)合分子生物學(xué)技術(shù),應(yīng)用基因沉默及過表達(dá)等干預(yù)手段,篩選PMOP中參與TNF-α誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化的SemaⅢ家族蛋白;明確SemaⅢ家族蛋白在TNF-α促進(jìn)破骨細(xì)胞分化中的作用;探索TNF-α通過SemaⅢ家族蛋白促進(jìn)破骨細(xì)胞分化的作用。本研究的完成對于探索絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的發(fā)生機(jī)制、尋找新的治療靶點提供重要的理論依據(jù)。二、研究方法1、培養(yǎng)正常小鼠來源的破骨細(xì)胞,通過抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色及實時熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)技術(shù)對破骨細(xì)胞形成的標(biāo)志性基因(TRAP、c-Fos和NFATc-1)表達(dá)檢測等方法,明確TNF-α對破骨細(xì)胞分化的影響。2、在TNF-α促進(jìn)RANKL誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化的過程中,通過qRT-PCR技術(shù)檢測SemaⅢ家族蛋白(Sema3A、Sema3B、Sema3C、Sema3D和Sema3E)表達(dá)量的變化,并進(jìn)一步檢測SemaⅢ家族蛋白受體(Plx-A1、Plx-A2、Plx-A3、Plx-A4、NPR1和NPR2)表達(dá)量的改變。3、構(gòu)建假手術(shù)組(Sham operation,Sham)小鼠、去卵巢組(Ovariectomized,OVX)小鼠、OVX+PBS小鼠及OVX+TNF-α中和性抗體(anti-TNF-α)小鼠模型,通過酶聯(lián)免疫吸附測定(Enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)實驗檢測各組模型小鼠血清中TNF-α水平的變化,并通過微計算機(jī)斷層掃描技術(shù)(micro computed tomography,micro-CT)技術(shù)確定模型構(gòu)建是否成功。4、通過TRAP染色觀察Sham組、OVX組、OVX+PBS組及OVX+anti-TNF-α組小鼠股骨干骺端的破骨細(xì)胞數(shù)量變化。5、分離各組模型小鼠股骨及脛骨骨髓源性巨噬細(xì)胞(Bone marrow macrophages cells,BMMs),體外誘導(dǎo)分化為成熟的破骨細(xì)胞,qRT-PCR及蛋白免疫印跡(Western blot)技術(shù)檢測破骨細(xì)胞中Sema3D表達(dá)量的變化。6、應(yīng)用Sema3D過表達(dá)及shRNA慢病毒載體感染破骨細(xì)胞前體細(xì)胞,通過TRAP染色及qRT-PCR檢測破骨細(xì)胞形成的標(biāo)志性基因(TRAP、c-Fos和NFATc-1)表達(dá)等方法,明確過表達(dá)/基因沉默Sema3D對細(xì)胞核因子κB受體活化因子(Receptor Activator for Nuclear Factor-κB Ligand,RANKL)誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞分化的影響,并進(jìn)一步觀察過表達(dá)/基因沉默Sema3D對TNF-α正向調(diào)控RANKL誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化的影響。7、通過CCK-8(Cell Counting Kit)活力測定實驗、脫氧尿嘧啶核苷(EdU)熒光染色實驗和CFSE熒光強(qiáng)度測定實驗,觀察過表達(dá)/基因沉默Sema3D對TNF-α誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞前體細(xì)胞增殖的影響。8、通過Western Blot技術(shù)檢測TNF-α對RANKL誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化的不同時間點中(5 min,15 min,30 min,60 min)p38、p65和JNK信號途徑的影響。9、應(yīng)用SB203580、BAY 11-7082、SP600125分別阻斷p38、NF-κB以及JNK信號途徑,通過qRT-PCR及Western blot技術(shù)檢測TNF-α對Sema3D表達(dá)的影響。10、通過TRAP染色以及TRAP標(biāo)志性基因的檢測(TRAP,c-Fos和NFATc1),觀察阻斷JNK信號途徑后過表達(dá)Sema3D對破骨細(xì)胞分化的影響。11、構(gòu)建了殼聚糖包被siRNA-Sema3D的納米顆粒,通過尾靜脈注射OVX小鼠。應(yīng)用micro-CT逐層掃描技術(shù)觀察Sham組,OVX組,OVX+siRNA-Sema3D組及OVX+siRNA-NC組小鼠的骨組織形態(tài)學(xué)改變。三、結(jié)果1、TNF-α能夠增加TRAP陽性染色的破骨細(xì)胞數(shù)量,并且夠促進(jìn)破骨細(xì)胞中TRAP,NFATc1和c-Fos基因的表達(dá),提示TNF-α能夠促進(jìn)RANKL誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞形成。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),TNF-α通過作用于破骨細(xì)胞分化的早期階段促進(jìn)破骨細(xì)胞的形成。2、在TNF-α正向調(diào)控破骨細(xì)胞形成過程中SemaⅢ家族蛋白中的sema3D表達(dá)量增加最明顯,并且TNF-α誘導(dǎo)的sema3D表達(dá)量的增加存在時間依賴性。此外,我們發(fā)現(xiàn)TNF-α在促進(jìn)破骨細(xì)胞分化的過程中SemaⅢ家族蛋白受體NPR1的表達(dá)量明顯減少,而Plx-A3的表達(dá)量輕微的減少。3、過表達(dá)Sema3D后能夠明顯的促進(jìn)RANKL誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化,而阻斷Sema3D后RANKL誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞分化明顯減少。此外,過表達(dá)Sema3D后能夠明顯的促進(jìn)TNF-α正向調(diào)控RANKL誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞分化,而阻斷Sema3D后能夠緩解TNF-α誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞分化,提示Sema3D在TNF-α誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化的過程中具有重要功能。4、TNF-α能夠明顯的促進(jìn)破骨細(xì)胞前體細(xì)胞的增殖,而基因沉默Sema3D后能夠明顯緩解TNF-α誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞前體細(xì)胞增殖,這些結(jié)果證明Sema3D介導(dǎo)了TNF-α對破骨細(xì)胞前體細(xì)胞增殖的調(diào)控。過表達(dá)或基因沉默Sema3D后并未影響細(xì)胞的凋亡。5、在TNF-α正向調(diào)控RANKL誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化的過程中p38、p65和JNK信號途徑被進(jìn)一步的激活。應(yīng)用SP600125阻斷JNK信號途徑后,能夠明顯的緩解TNF-α對Sema3D表達(dá)的促進(jìn)作用。阻斷JNK信號途徑能夠明顯的緩解TNF-α誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞分化,而阻斷JNK信號途徑后過表達(dá)Sema3D能夠促進(jìn)破骨細(xì)胞的形成。6、阻斷內(nèi)源性Sema3D后能夠明顯減少OVX誘導(dǎo)的小鼠骨質(zhì)疏松,并且降低了小鼠血清中骨吸收指標(biāo)CTX-1的水平。四、結(jié)論1、TNF-α是導(dǎo)致絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松中破骨細(xì)胞分化增加、骨吸收增強(qiáng)的重要因素。雌激素缺乏后導(dǎo)致TNF-α水平升高,過量的TNF-α能夠促進(jìn)RANKL誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞分化,并且這種誘導(dǎo)作用發(fā)生在破骨細(xì)胞分化的早期階段。2、在TNF-α促進(jìn)RANKL誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞分化過程中,Sema3D的表達(dá)量明顯增加。Sema3D的增加一方面通過促進(jìn)破骨細(xì)胞前體細(xì)胞的增殖增加破骨細(xì)胞的數(shù)量,另一方面通過促進(jìn)RANKL誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞分化影響破骨細(xì)胞的形成。3、TNF-α通過激活JNK途徑上調(diào)了Sema3D的表達(dá)。體內(nèi)抑制Sema3D能夠有效緩解OVX誘導(dǎo)的小鼠骨質(zhì)疏松。第二部分:絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松中TNF-α通過抑制Wnt/β-catenin信號途徑下調(diào)Semaphorin3B表達(dá)抑制成骨細(xì)胞分化一、研究目的骨質(zhì)疏松嚴(yán)重威脅中老年人健康,是全球性的公共衛(wèi)生問題。女性絕經(jīng)后誘導(dǎo)形成的骨質(zhì)疏松癥是目前研究最多,同時也是發(fā)病率最高的骨質(zhì)疏松癥類型。在我國60歲以上的女性中,骨質(zhì)疏松的患病率高達(dá)40%-50%,其中約30%-50%將經(jīng)歷骨質(zhì)疏松相關(guān)的骨折,這嚴(yán)重地影響老年人的身體健康及生活質(zhì)量,甚至縮短壽命。與絕經(jīng)相關(guān)的骨質(zhì)疏松癥是不可忽視的重要保健課題,探索其確切的發(fā)病機(jī)制對于PMOP的防治具有重要意義。骨骼是一種時刻發(fā)生著動態(tài)衍變的器官,而保持其生物結(jié)構(gòu)的整體性和穩(wěn)定性均需要依賴于骨重塑這樣一種動態(tài)調(diào)節(jié)過程。骨重構(gòu)是一個舊骨吸收與新骨形成的動態(tài)調(diào)節(jié)過程。研究證實,在絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松發(fā)病過程的早期,破骨活動加強(qiáng),成骨也隨之代償性加強(qiáng),但隨著病程的進(jìn)展,成骨活動受到抑制,從而導(dǎo)致成骨破骨的平衡被打破,引起骨量喪失。研究發(fā)現(xiàn),婦女更年期雌激素水平的下降,引起了一些炎癥因子水平的變化。在這些因子中TNF-α是PMOP發(fā)生的核心因素。成骨細(xì)胞是由MSCs分化而來,而TNF-α可以通過其受體TNFR1來抑制MSCs的成骨分化。TNF-α對MSCs成骨分化的抑制作用是PMOP中骨形成減少的重要原因。然而,TNF-α抑制MSCs向成骨細(xì)胞分化的確切機(jī)制尚未完全闡釋。SemaⅢ家族蛋白在骨穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)中具有重要作用。研究發(fā)現(xiàn),Sema3A能夠促進(jìn)成骨細(xì)胞的分化抑制破骨細(xì)胞的形成。Sema3E能夠抑制小鼠成骨細(xì)胞的遷移并抑制破骨細(xì)胞的形成。此外,成骨細(xì)胞特異性高表達(dá)Sema3B的轉(zhuǎn)基因小鼠,骨礦化明顯增強(qiáng)。盡管這些研究證實SemaⅢ家族蛋白與骨代謝密切相關(guān),然而目前尚不清楚SemaⅢ家族蛋白是否也參與了PMOP中TNF-α抑制MSCs向成骨細(xì)胞的分化。本研究擬通過體內(nèi)及體外實驗,結(jié)合分子生物學(xué)技術(shù),應(yīng)用基因沉默及過表達(dá)等干預(yù)手段,篩選PMOP中參與TNF-α抑制BMMSCs向成骨細(xì)胞分化的SemaⅢ家族蛋白;明確SemaⅢ家族蛋白在TNF-α抑制BMMSCs向成骨細(xì)胞分化中的功能;探索TNF-α通過SemaⅢ家族蛋白抑制BMMSCs向成骨細(xì)胞分化的分子機(jī)制。本研究的完成有助于闡釋PMOP的發(fā)病機(jī)制,尤其是TNF-α相關(guān)的骨形成減少的分子機(jī)制。二、研究方法1、培養(yǎng)正常小鼠骨髓來源的MSCs(BMMSCs)細(xì)胞,在TNF-α抑制BMSCs向成骨細(xì)胞分化的不同時間點(0天、3天、7天、14天),通過qRT-PCR技術(shù)檢測SemaⅢ家族蛋白(Sema3A、Sema3B、Sema3C、Sema3D和Sema3E)表達(dá)量的變化,并通過Western blot技術(shù)進(jìn)一步驗證Sema3B在此過程中表達(dá)量的變化。2、構(gòu)建Sham小鼠、OVX小鼠、OVX+PBS小鼠及OVX+anti-TNF-α小鼠模型,通過micro-CT技術(shù)確定模型構(gòu)建是否成功,通過Elisa實驗檢測各組模型小鼠血清中TNF-α水平的變化,并通過免疫組化技術(shù)觀察各組模型小鼠股骨干骺端TNF-α表達(dá)量的變化。3、構(gòu)建TNF-α中和抗體抑制OVX誘導(dǎo)骨質(zhì)疏松的小鼠模型,免疫組化技術(shù)觀察各組模型小鼠股骨干骺端Sema3B表達(dá)量的變化,qRT-PCR技術(shù)檢測SemaⅢ家族蛋白受體(Plx-A1、Plx-A2、Plx-A3、Plx-A4、NPR1和NPR2)表達(dá)量的變化。4、分離各組模型小鼠的BMMSCs,qRT-PCR技術(shù)檢測細(xì)胞中Sema3B表達(dá)量的變化。5、分離各組模型小鼠的BMMSCs,體外成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)不同的時間點(7天、14天),qRT-PCR技術(shù)、western blot技術(shù)檢測細(xì)胞中Sema3B表達(dá)量的變化,Elisa實驗檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-α含量的變化。6、應(yīng)用Sema3B過表達(dá)及shRNA慢病毒載體感染BMMSCs細(xì)胞,通過ALP染色、ALP活力測定、茜素紅染色以及成骨細(xì)胞標(biāo)志性基因(Runx2,Osterix和Osteocalcin)檢測等方法,明確過表達(dá)/基因沉默Sema3B對BMMSCs向成骨細(xì)胞分化的影響,并進(jìn)一步觀察過表達(dá)/基因沉默Sema3B對TNF-α抑制BMMSCs向成骨細(xì)胞分化的影響。7、通過CCK-8活力測定實驗、EdU熒光染色實驗和CFSE熒光強(qiáng)度測定實驗,觀察過表達(dá)/基因沉默Sema3B對TNF-α抑制的BMMSCs細(xì)胞增殖的影響。8、QRT-PCR技術(shù)檢測TNF-α對BMMSCs細(xì)胞中Wnt/β-catenin信號途徑的幾個關(guān)鍵蛋白分子DKK-1,GSK-3β和β-catenin表達(dá)的影響。9、分別應(yīng)用Licl(20 mM)和BIO(5μM)激活BMMSCs細(xì)胞中的Wnt/β-catenin信號途徑,并給與10 ng/ml的TNF-α處理24 h。Western blot實驗檢測BMMSCs細(xì)胞中Sema3B表達(dá)量的變化。三、結(jié)果1、TNF-α在抑制BMMSCs向成骨細(xì)胞分化的過程中sema3A,sema3C,sema3D和sema3E的表達(dá)量并沒有發(fā)生明顯的變化,而sema3B的表達(dá)量明顯的減少且具有時間依賴性。2、OVX組小梁骨密度(BMD)和靜態(tài)微觀結(jié)構(gòu)參數(shù)(Tb.Th、BV/TV和Tb.N)明顯小于Sham組,OVX+anti-TNF-α組小鼠骨量相對于OVX組小鼠明顯增加。OVX組小鼠相對于Sham組小鼠小梁骨變細(xì)、數(shù)量減少,TNF-α中和抗體能夠緩解OVX引起的小鼠股骨干骺端小梁骨結(jié)構(gòu)的變化。3、OVX組小鼠TNF-α水平明顯高于Sham組小鼠,而應(yīng)用TNF-α中和抗體能夠有效地降低OVX組小鼠的TNF-α水平;OVX組小鼠相對于Sham組小鼠股骨干骺端TNF-α的表達(dá)明顯增加,而應(yīng)用TNF-α中和抗體能夠明顯減少TNF-α表達(dá)。4、OVX組小鼠相對于Sham組小鼠股骨干骺端Sema3B的表達(dá)明顯減少,而OVX小鼠應(yīng)用TNF-α中和抗體后能夠明顯增加Sema3B的表達(dá);相對于Sham組小鼠,OVX組小鼠來源的BMMSCs(OVX-MSCs)中Sema3B的表達(dá)量明顯減少,而TNF-α中和抗體的應(yīng)用能夠明顯的增加OVX小鼠BMMSCs中Sema3B的表達(dá)。5、各組模型小鼠的BMMSCs,即(Sham-MSCs,OVX-MSCs,OVX+anti-TNF-α-MSCs),通過體外成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)7天和14天,結(jié)果顯示相對于Sham-MSCs組,OVX-MSCs組中Sema3B的表達(dá)量明顯減少,而OVX+anti-TNF-α-MSCs組相對于OVX-MSCs組Sema3B的表達(dá)明顯增加;OVX-MSCs組相對于Sham-MSCs組細(xì)胞培養(yǎng)液上清中TNF-α的含量明顯增加,而OVX+anti-TNF-α-MSCs組相對于OVX-MSCs組細(xì)胞培養(yǎng)液上清中TNF-α的含量明顯減少。6、各組模型小鼠的BMMSCs細(xì)胞中,SemaⅢ家族蛋白受體NRP1,Plx-A1和Plx-A4表達(dá)量明顯減少,而Plx-A3的表達(dá)量明顯的增加。7、過表達(dá)Sema3B后能夠明顯的促進(jìn)BMMSCs的成骨分化,而阻斷Sema3B后BMMSCs的成骨分化明顯減少;此外,過表達(dá)Sema3B后能夠明顯的緩解TNF-α抑制的BMMSCs向成骨細(xì)胞分化,而阻斷Sema3D后能夠促進(jìn)TNF-α抑制的BMMSCs向成骨細(xì)胞分化。8、TNF-α能夠明顯的抑制BMMSCs細(xì)胞的增殖,而過表達(dá)Sema3B后能夠明顯緩解TNF-α對BMMSCs細(xì)胞增殖的抑制作用。9、TNF-α抑制BMMSCs向成骨細(xì)胞分化的過程中,DKK-1,GSK-3β和β-catenin的蛋白表達(dá)量明顯降低,表明TNF-α能夠明顯的抑制BMMSCs細(xì)胞中Wnt/β-catenin信號途徑。10、Wnt/β-catenin信號途徑的激活能夠明顯的緩解TNF-α對BMMSCs細(xì)胞中Sema3B表達(dá)的抑制作用,提示TNF-α通過抑制Wnt/β-catenin信號途徑負(fù)向調(diào)控Sema3B的表達(dá)。四、結(jié)論1、TNF-α是導(dǎo)致絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松疾病中BMMSCs向成骨細(xì)胞分化抑制、骨形成減少的重要因素。在TNF-α抑制BMMSCs向成骨細(xì)胞分化過程中,Sema3B的表達(dá)量明顯減少。Sema3B表達(dá)量的降低一方面通過影響B(tài)MMSCs的增殖來減少成骨細(xì)胞形成的數(shù)量,另一方面通過抑制BMMSCs細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化影響骨形成。2、TNF-α抑制MSCs細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的過程中,DKK-1,GSK-3β和β-catenin的蛋白表達(dá)量明顯降低,提示TNF-α能夠明顯的抑制MSCs細(xì)胞中Wnt/β-catenin信號途徑。而Wnt/β-catenin信號途徑的激活能夠明顯的緩解TNF-α對MSCs細(xì)胞中Sema3B表達(dá)的抑制作用,提示TNF-α通過抑制Wnt/β-catenin信號途徑負(fù)向調(diào)控Sema3B的表達(dá)。
【圖文】：

F-α對 RANKL-誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞分化的影響。A-B:TRAP 染 RANKL 誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞形成，n=6;** P<0.01；C-E: QRT-P骨細(xì)胞標(biāo)志性基因(TRAP, NFATc1, c-Fos)表達(dá)的影響。n=3;*定 TNF-α是通過影響細(xì)胞分化的哪個階段，，從而促進(jìn) RANKL我們分別在 RANKL 誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化的不同時間點（0 天，）加入 10 ng/ml 的 TNF-α,通過 TRAP 染色觀察破骨細(xì)胞分化的NKL 誘導(dǎo)破骨細(xì)胞形成的早期階段（1-2 天）給予 TNF-α的處顯增加；然而在RANKL誘導(dǎo)破骨細(xì)胞形成的晚期階段（3-4天骨細(xì)胞的形成并沒有明顯的改變。提示 TNF-α是通過作用在破，促進(jìn)破骨細(xì)胞形成。

. TNF-α對 RANKL-誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞分化的影響。A-B:TRAP 染色觀促進(jìn) RANKL 誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞形成，n=6;** P<0.01；C-E: QRT-PCR 技對破骨細(xì)胞標(biāo)志性基因(TRAP, NFATc1, c-Fos)表達(dá)的影響。n=3;** P<了確定 TNF-α是通過影響細(xì)胞分化的哪個階段，從而促進(jìn) RANKL 誘導(dǎo)成，我們分別在 RANKL 誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化的不同時間點（0 天，1 天4 天）加入 10 ng/ml 的 TNF-α,通過 TRAP 染色觀察破骨細(xì)胞分化的改變 RANKL 誘導(dǎo)破骨細(xì)胞形成的早期階段（1-2 天）給予 TNF-α的處理，化明顯增加；然而在RANKL誘導(dǎo)破骨細(xì)胞形成的晚期階段（3-4天）給予，破骨細(xì)胞的形成并沒有明顯的改變。提示 TNF-α是通過作用在破骨細(xì)階段，促進(jìn)破骨細(xì)胞形成。
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R580

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本文編號：2681062