【摘要】：背景:糖尿病伴發(fā)的牙周炎現(xiàn)已被公認(rèn)為糖尿病“第六大”主要并發(fā)癥,是導(dǎo)致糖尿病患者丟失牙齒的主要原因。西醫(yī)治療本病主要是在控制好血糖基礎(chǔ)之上,通過(guò)去除局部刺激因素,進(jìn)而控制感染。如齦上潔治術(shù)、齦下刮治術(shù)、根面平整術(shù)等局部治療技術(shù),雖然技術(shù)手段能清除附著于牙體上的菌斑、結(jié)石等局部刺激因素,但對(duì)器械難以到達(dá)的部位以及侵入牙周組織內(nèi)的致病菌卻療效欠佳。局部或全身應(yīng)用殺菌劑或抗生素等藥物來(lái)治療可產(chǎn)生一定的耐藥性、以及誘導(dǎo)二次感染的副作用,故臨床療效不佳。在去除局部刺激因素前提下,經(jīng)過(guò)前人的探討與研究發(fā)現(xiàn)運(yùn)用中醫(yī)藥治療本病療效較佳。目的:觀察適宜濃度的補(bǔ)脾益腎方藥,是否能降低糖尿病牙周炎人牙周膜成纖維細(xì)胞(human periodontal ligament cells,HPDLC)微環(huán)境中炎性細(xì)胞因子,基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)以及核因子κB受體活化因子配體(Receptor or Activator of NF-KB Ligand,RANKL)系統(tǒng)的表達(dá),以探尋補(bǔ)脾益腎法干預(yù)糖尿病牙周炎的初步作用機(jī)制。方法:1.體外分離牙周組織,通過(guò)原代和傳代培養(yǎng)得到更多的HPDLC,采用免疫組化染色方法(strept avidin-biotin complex,SABC)進(jìn)行鑒定,然后隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組用不同濃度的補(bǔ)中益氣丸和六味地黃丸處理,對(duì)照組不做任何處理。采用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒(cell counting kit-8,CCK-8)檢測(cè)各組HPDLC增殖的情況。2.用HPDLC構(gòu)建HPDLC高糖培養(yǎng)體系,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(六味地黃丸組、補(bǔ)中益氣丸組、六味地黃丸+補(bǔ)中益氣丸組)和對(duì)照組(空白組、毒力因子組、高糖組、高糖+毒力因子組)。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)試劑盒檢測(cè)微環(huán)境中炎性細(xì)胞因子白介素-1β(Interleukin 1β,IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)的表達(dá)以及基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)的濃度。用蛋白印跡(Western blotting,WB)檢測(cè)微環(huán)境中RANKL蛋白和骨保護(hù)素(osteoprotegerin,OPG)蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1.不同濃度的六味地黃丸和補(bǔ)中益氣丸對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞的增殖無(wú)明顯影響,最適濃度均為0.01mg/ml;2.六味地黃丸,補(bǔ)中益氣丸均能降低糖尿病牙周炎微環(huán)境中炎性細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α的表達(dá);均能下調(diào)MMP-2的表達(dá);合用無(wú)明顯增效作用;3.六味地黃丸,補(bǔ)中益氣丸,六味地黃丸+補(bǔ)中益氣丸均能降低微環(huán)境中RANKL蛋白的表達(dá);均不能增加OPG蛋白的表達(dá);單用六味地黃丸對(duì)RANKL系統(tǒng)有抑制作用;單用補(bǔ)中益氣丸對(duì)RANKL系統(tǒng)無(wú)抑制作用;合用對(duì)RANKL系統(tǒng)的抑制作用增強(qiáng)。結(jié)論:1.0.01mg/ml的六味地黃丸與0.01mg/ml的補(bǔ)中益氣丸,對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞增殖較為穩(wěn)定。2.補(bǔ)脾益腎法能降低糖尿病牙周炎微環(huán)境中炎性細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α的表達(dá);能下調(diào)MMP-2的表達(dá);能抑制RANKL系統(tǒng)的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R781.4;R587.2

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本文編號(hào)：2675678