發(fā)布時(shí)間：2020-05-20 21:50

【摘要】：目的:探討磷酸果糖激酶1(Phosphofructokinase 1,PFK1)在原發(fā)性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎(gouty arthritis,GA))患者外周血中的表達(dá)變化及其臨床意義。方法:(1)收集115例原發(fā)性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎(gouty arthritis,GA)患者,[其中急性期痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎(acute gout,AG)患者44例、間歇期痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎(intercritical gout,IG)患者41例、慢性期痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎(chronic gout,CG)患者30例]和48例健康體檢者(healthy control,HC)的外周血、臨床資料及常規(guī)檢查資料;(2)采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)檢測(cè)4組患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)中PFKM、PFKL、PFKP mRNA表達(dá)水平;(3)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、蛋白印跡(western blot)檢測(cè)4組PBMCs中PFKM、PFKL、PFKP蛋白表達(dá)水平;(4)采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),正態(tài)計(jì)量資料統(tǒng)計(jì)描述采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s),非正態(tài)計(jì)量資料統(tǒng)計(jì)描述采用中位數(shù)(四分位間距)M(Q),多組間比較采用秩轉(zhuǎn)換非參數(shù)檢驗(yàn)、秩次比較采用單因素方差分析,組間差異采用秩和檢驗(yàn),組間兩兩比較采用最小顯著差數(shù)法(LSD法),變量間相關(guān)分析采用Spearman相關(guān)分析,以p0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:(1)AG組ESR顯著高于IG和CG組(p0.05),且CG組ESR顯著高于IG組(p0.05);AG組hsCRP、GLOB濃度均顯著高于HC、IG和CG組(p0.05),且CG組GLOB濃度顯著高于IG組(p0.05);AG、CG組WBC、GR均顯著高于HC和IG組(p0.05);AG組EOs顯著低于HC、IG組(p0.05),且CG組EOs顯著低于HC組(p0.05);AG、IG、CG組MCH顯著低于HC組(p0.05);AG、CG組MCHC顯著低于HC和IG組(p0.05);AG、IG組AST、ALT、GGT血漿濃度均高于HC組(p0.05),且CG組GGT血漿濃度也顯著高于HC組(p0.05);IG組HDL-C血漿濃度顯著低于AG和HC組(p0.05);AG、IG組VLDL-C血漿濃度顯著高于HC組(p0.05);AG、CG組Crea濃度顯著高于HC組(p0.05),且CG組還顯著高于IG組(p0.05);AG、IG、CG組UA濃度顯著高于HC組(p0.05);AG組GLU濃度顯著高于HC組(p0.05)。(2)GA患者PBMCs中PFKM、PFKP mRNA表達(dá)水平與健康對(duì)照未見(jiàn)顯著性差異(P0.05)。GA患者PBMCs中PFKL基因mRNA表達(dá)水平與健康對(duì)照未見(jiàn)顯著性差異(P0.05),將GA患者按疾病階段進(jìn)一步分組兩兩比較,發(fā)現(xiàn)AG組PFKL mRNA表達(dá)水平顯著低于HC組和CG組(分別P0.05,P0.01),而AG組與IG組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);IG組PFKL mRNA表達(dá)水平顯著低于CG組(P0.05),而IG組與HC、AG組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);CG組PFKL mRNA表達(dá)水平顯著高于AG、IG組(均P0.05),而CG組與HC組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(3)GA患者PBMCs中PFKM蛋白表達(dá)水平顯著低于健康對(duì)照(P0.05),將GA患者按疾病階段進(jìn)一步分組兩兩比較,AG組、IG組PFKM蛋白表達(dá)水平均顯著低于HC組(P0.05),而CG組與HC組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。GA患者PBMCs中PFKL、PFKP蛋白表達(dá)水平與健康對(duì)照比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(4)PFKL mRNA與實(shí)驗(yàn)室相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn):AG組PFKL mRNA表達(dá)量與PLT呈負(fù)相關(guān)(r=-0.341,P=0.045);CG組中PFKL mRNA表達(dá)量與hsCRP呈正相關(guān)r=0.648,P=0.043)。結(jié)論:(1)痛風(fēng)不同病變階段的炎癥反應(yīng)不同,痛風(fēng)患者易出現(xiàn)肝、腎功能損害及紅細(xì)胞血紅蛋白代謝、糖代謝異常,證明在痛風(fēng)間歇期和慢性期降尿酸維持達(dá)標(biāo)的重要性。(2)證實(shí)PFK1三種亞型的基因和蛋白在原發(fā)性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者及健康人的單個(gè)核細(xì)胞中均有表達(dá),且未見(jiàn)在原發(fā)性痛風(fēng)患者出現(xiàn)明顯缺陷,這可能是與Ⅶ型糖原貯積病所致繼發(fā)性痛風(fēng)的重要區(qū)別。(3)在痛風(fēng)病變過(guò)程中磷酸果糖激酶肌肉型、磷酸果糖激酶肝臟型的基因轉(zhuǎn)錄水平與蛋白表達(dá)量不一致,血小板和C反應(yīng)蛋白在痛風(fēng)病變過(guò)程中與磷酸果糖激酶肝臟型mRNA表達(dá)是否存在不同的調(diào)節(jié)?尚需進(jìn)一步研究證實(shí)。
【圖文】：

總RNA電泳圖

PFKM基因引物標(biāo)準(zhǔn)曲線
【學(xué)位授予單位】：川北醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R589.7

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本文編號(hào)：2673245