發(fā)布時間：2020-05-10 18:17

【摘要】：先天性甲狀腺功能低下癥(Congenital hypothyroidism,CH)是新生兒時期常見的一種內(nèi)分泌疾病,若治療不及時則會導(dǎo)致身體智力發(fā)育低下。促甲狀腺激素受體(TSHR)在甲狀腺發(fā)育和甲狀腺激素分泌中發(fā)揮關(guān)鍵作用。研究發(fā)現(xiàn),TSHR基因突變是導(dǎo)致CH發(fā)生的主要原因之一。本研究的第一部分是以來自西北地區(qū)的227例CH患者和200例健康人群為研究對象,采用高通量測序的方法對CH患者進(jìn)行檢測,篩查TSHR基因突變位點(diǎn)并利用生物信息學(xué)方法對突變位點(diǎn)進(jìn)行致病性評估;第二部分是將篩選到的致病突變位點(diǎn)進(jìn)行體外生物學(xué)功能研究,分析TSHR基因在CH產(chǎn)生過程中的分子致病機(jī)制。主要結(jié)果如下:(1)西北地區(qū)CH患者TSHR基因突變圖譜分析:本研究發(fā)現(xiàn)227例CH患者中有16例患者存在TSHR疑似致病突變,占總患者人數(shù)的7%(16/227),比國內(nèi)已有報道數(shù)據(jù)高(山東1/89和廣西10/384),這些突變在健康對照人群中均沒有檢測到,為罕見突變,包括15個錯義突變和1個無義突變,其中有12個突變位于10號外顯子上,符合該外顯子突變率較高的特點(diǎn)。在16個突變中,前人已報道或公共數(shù)據(jù)庫中收錄的已知突變有8個(p.N432S、p.R450H、p.F525S、p.A533T、p.I155L、p.A204V、p.E727D、p.H32Y),其中p.F525S突變在本研究的5例CH患者中都曾出現(xiàn),檢出頻率為2.2%(5/227),是本次篩查的一個熱點(diǎn)突變。16個突變中,除了p.F525S,其他15個突變在所有患者中都只出現(xiàn)一次,而p.R450H作為其他地區(qū)(日本和臺灣)熱點(diǎn)突變在本次篩查中只出現(xiàn)一次。同時,本研究中首次發(fā)現(xiàn)的新發(fā)突變有8個(p.V433I、p.M527K、p.R528S、p.A579V、p.K618*、p.C176R、p.K338E、p.N372T)。在3例患者中篩查到了復(fù)合型雜合子突變(p.R528S/p.R450H、p.C176R/p.K618*、p.M527K/p.A553T),并對患者父母進(jìn)行家系驗證發(fā)現(xiàn)這3例患者父母均各自攜帶有一個突變。利用五款軟件(SIFT、PolyPhen-2、MutationTaster、FATHMM和M-CAP)對蛋白功能預(yù)測后發(fā)現(xiàn)有4個突變(p.R450H、p.N432S、p.C176R、p.K618*)的預(yù)測結(jié)果為有害(Damgaing),2個突變(p.E727D、p.K338E)的預(yù)測結(jié)果為良性(Tolerate)。此外,根據(jù)ACMG(美國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)與基因組學(xué)學(xué)會)遺傳變異位點(diǎn)致病等級劃分標(biāo)準(zhǔn)和指導(dǎo)原則,有8個突變劃分為致病或可能致病的(p.R528S、p.C176R、p.K618*、p.F525S、p.A553T、p.N432S、R450H、p.A204V),p.E727D劃分為良性突變,其余7個突變(p.V433I、p.M527K、p.A579V、p.K338E、p.N372T、p.H32Y、p.I155L)由于致病證據(jù)不足劃分為意義不明(VUS)。(2)TSHR突變分子致病機(jī)制研究:我們選取4個有家系驗證的突變位點(diǎn)(p.R528S、p.C176R、p.K618*、p.R450H)進(jìn)行生物學(xué)功能實驗,通過實時定量PCR和Western blot實驗結(jié)果顯示4個突變體的mRNA和蛋白質(zhì)均有表達(dá),與野生型TSHR蛋白表達(dá)不具有顯著性差異。利用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面TSHR蛋白時沒有檢測到p.C176R(c.526TC)和p.K618*(c.1852AT)這兩個突變體的蛋白,但是檢測到了p.R450H(c.1349GA)和p.R528S(c.1582CA)這兩個突變體蛋白。
【圖文】：

TSHR蛋白結(jié)構(gòu)

圖 3 TSHR 基因在甲狀腺激素合成過程中參與的信號通路Figure 3 Signaling pathways of TSHR gene involved in thyroid hormone synthesis
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R581.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 劉鴻麗;李風(fēng)俠;;2008—2012年陜西省新生兒疾病篩查中心篩查結(jié)果分析[J];中國新生兒科雜志;2014年02期

2 張文慧;徐龍芳;陳西貴;楊緒慶;于曉霞;王芳;劉世國;閻勝利;;山東地區(qū)甲狀腺異位的先天性甲狀腺功能減退癥患兒TSHR基因突變研究[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2013年22期

3 徐艷華;秦玉峰;趙正言;;中國新生兒先天性甲狀腺功能低下癥與苯丙酮尿癥篩查22年回顧[J];中華兒科雜志;2009年01期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 張文慧;先天性甲狀腺功能減退癥患兒TSHR基因突變篩查及DUOX2基因突變致病機(jī)理研究[D];青島大學(xué);2014年

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本文編號：2657699