【摘要】：目的:1、研究高尿酸對C57BL/6小鼠體內氧化物酶體增殖物激活受體(PPAR-γ)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(Pck1)、雷帕霉素靶蛋白(m TOR)表達的影響及PPAR-γ、Pck1、m TOR在C57BL/6小鼠胰島β細胞凋亡中的作用。2、葡萄糖轉運蛋白2(GLUT2)和葡萄糖轉運蛋白4(GLUT4)在高尿酸誘發(fā)胰島素抵抗中的作用。方法:1、C57BL/6小鼠敲除尿酸氧化酶(knockout urate oxidase,KO)構建自發(fā)高尿酸血癥小鼠(SCD-KO)及對照野生型小鼠(SCD-WT)兩組,實驗結束后取小鼠血清用ELISA試劑盒檢測空腹胰島素(FINS)、尿酸(UA)、空腹血糖(FBG);留取胰島組織用TUNEL試劑盒檢測各組細胞凋亡率,HE染色觀察胰島的形態(tài)及結構;部分胰島組織勻漿,提取RNA,使用RT-PCR檢測各組PPAR-γ、Pck1、m TOR基因的相對表達量;提取胰島組織蛋白用Western blot檢測各組蛋白的相對表達量。2、高脂飲食喂養(yǎng)自發(fā)高尿酸小鼠(HFD-KO)及年齡、體重相近的對照野生型小鼠(HFD-WT),待高脂喂養(yǎng)自發(fā)高尿酸小鼠成功造模后,隨機選取一半小鼠,給予別嘌醇(100mg/kg)灌胃降尿酸(ULT)處理1周,多次重復胰島素耐量試驗(ITT),葡萄糖耐量試驗(GTT),實驗結束后取各組小鼠的血清使用ELISA試劑盒檢測FBG、UA、FINS、甘油三酯(TG)、游離脂肪酸(FFA);肝臟組織和肌肉組織勻漿提取蛋白進行Western blot檢測GLUT2、GLUT4蛋白的相對表達量。結果:1、KO小鼠的UA水平在實驗過程中維持穩(wěn)定(483.9±24.3)μmol/L且顯著高于WT小鼠(143.8±23.2)μmol/L;SCD-KO組小鼠與SCD-WT組小鼠的空腹血糖、空腹胰島素、胰島素敏感性均無差異;與SCD-WT組比較,SCD-KO組小鼠葡萄糖耐量減低,SCD-KO組小鼠胰島細胞凋亡率明顯升高(P0.05);HE染色顯示SCD-KO組小鼠胰島細胞的損害程度更嚴重(P0.05);SCD-KO組PPAR-γ、Pck1、m TOR三基因m RNA及蛋白的相對表達量均升高(均P0.05)。2、高脂飲食喂養(yǎng)的各組小鼠空腹血糖無明顯差異,HFD-KO組小鼠FINS水平比HFD-WT組小鼠高((0.636±0.07)ng/ml vs.(0.456±0.03)ng/ml)(P0.01),HFD-KO組胰島素敏感性明顯下降,葡萄糖代謝明顯紊亂;雖然高脂飲食可升高尿酸,但HFD-KO組小鼠的尿酸仍顯著高于HFD-WT組小鼠((216.61±27.5)μmol/L vs.(549.68±48.7)μmol/L)(P0.05);與HFD-WT組比較,HFD-KO組小鼠腓腸肌中Slc2a4/GLUT4表達降低,HFD-WT組小鼠肝臟中Slc2a2/GLTU2表達增加(均P0.05);別嘌呤醇灌胃處理使尿酸水平下降200μmol/L左右,HFD-KO組小鼠葡萄糖代謝改善,胰島素敏感性提高,HFD-KO組小鼠腓腸肌中Slc2a4/GLUT4表達升高,肝臟中Slc2a2/GLTU2表達減少。結論:1、尿酸可能通過PPAR-γ-Pck1-mTOR信號通路參與胰島細胞凋亡的過程。2、尿酸可能通過降低腓腸肌中Slc2a4/GLUT4表達,升高肝臟中Slc2a2/GLUT2表達誘導胰島素抵抗。
【圖文】：

SCD-WT 組 SCD-KO 組圖 2 各組小鼠胰腺組織 HE 染色結果Fig 2 Pancreas HE stain in SCD-WT group and SCD-KO group4.3 各組小鼠胰島細胞 TUNEL 凋亡檢測結果

圖 5 各組小鼠胰島組織 PPAR-γ, Pck1, mTOR 蛋白Fig 5 PPAR-γ, Pck1, mTOR protein expression in注： 與 SCD-WT 組比較，，*P＜0.05，**P＜0.01
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R589.7

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本文編號：2651831