【摘要】：目的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種具有高度異質(zhì)性的多系統(tǒng)自身免疫性疾病。本研究探究RA滑膜組織差異表達的蛋白,瓜氨酸化蛋白及瓜氨酸修飾位點,對上調(diào)的蛋白和瓜氨酸短肽進行生物學(xué)功能分析,尋找與RA具有高相關(guān)性的短肽,并研究瓜氨酸修飾短肽與血清ACPA的結(jié)合活性及用于RA的診斷價值。方法采用Thermo Q Exactive HF質(zhì)譜技術(shù)鑒定RA血清抗體結(jié)合反應(yīng)滑膜組織的抗原,瓜氨酸化蛋白及其修飾位點;采用在線軟件STRING、Cytoscape軟件、在線軟件SYFPEITHI進行生物信息分析;利用ELISA檢測原理,以合成COL6A3、KRT10的2條瓜氨酸修飾短肽(COL6A3_C:QDVVNAV-(Cit)-QLTLLGG;KRT10-C:RLAADDF-(Cit)-LKYENEV)為靶抗原,分別用HRP標(biāo)記抗人IgA、IgG和IgM抗體為二抗,檢測血清ACPA與兩種抗瓜氨酸短肽抗體的結(jié)合活性,并對兩種短肽用于RA診斷進行效果評價。結(jié)果(1)質(zhì)譜共鑒定出594種蛋白,其中RA抗CCP抗體(+)組有125種蛋白表達上調(diào),RA(-)抗CCP抗體組有87種蛋白表達上調(diào),共鑒定57種瓜氨酸修飾蛋白及97個修飾位點;(2)RA抗CCP抗體(+)組上調(diào)蛋白主要參與白細(xì)胞活化、調(diào)節(jié)胞吐作用、補體激活、調(diào)節(jié)凝血過程和急性炎癥反應(yīng);RA抗CCP抗體(-)組上調(diào)蛋白主要參與組織發(fā)育、上皮細(xì)胞角化、蛋白質(zhì)折疊和物質(zhì)分解代謝過程。COL6A3的短肽序列QDVVNAVRQLTLLGG與MHC-Ⅱ類分子的結(jié)合力較高;(3)抗COL6A3_C短肽抗體的ELISA檢測值(以抗人IgM為二抗)用于RA診斷的靈敏度為65.52%,特異度為78.95%,陽性預(yù)測值82.61%,陰性預(yù)測值60%,ROC曲線下面積為0.724,但該類抗體在用于診斷抗CCP抗體(-)RA患者的ROC曲線下面積可達0.956�？筀RT10_C短肽抗體的ELISA檢測值(以抗人IgG為二抗)用于RA診斷的靈敏度為58.62%,特異度為52.17%,陽性預(yù)測值60.71%,陰性預(yù)測值52.17%,ROC曲線下面積為0.686,僅用于診斷抗CCP抗體(+)RA患者的ROC曲線下面積為0.895。結(jié)論(1)從RA滑膜組織中鑒定出瓜氨酸修飾抗原,為RA存在瓜氨酸修飾提供了直接證據(jù)。(2)RA抗CCP抗體(+)組上調(diào)蛋白主要參與免疫反應(yīng)過程,RA抗CCP抗體(-)組上調(diào)蛋白主要參與細(xì)胞生長發(fā)育。COL6A3與RA的相關(guān)性較高,可能是RA自身抗體的靶抗原。(3)抗COL6A3_C短肽抗體僅用于抗CCP抗體(-)RA患者的診斷價值較高,抗KRT10_C短肽抗體僅用于抗CCP抗體(+)RA患者的診斷效果較好,將兩種抗短肽抗體加入RA實驗室診斷體系,可提高RA的診斷率。
【圖文】：

type I cytoskeletal 15（KRT15）、actin， gamma-enteric smooth mussoform 1 precursor （ ACTG2 ） 、 protein AATF （ AATF ）hromodomain-helicase-DNA-binding protein 5 （ CHD5 ）、 Meckelin isoformTMEM67）、centrosome-associated protein 350（CEP350）、type II inositol 3-bisphosphate 4-phosphatase（INPP4B）、G-protein coupled receptor family C gro member A precursor（GPRC6A）、intraflagellar transport protein 81 homosoform 1（IFT81）、fibromodulin precursor（FMOD）；僅在 RA 抗 CCP 抗體（特異性表達 69 種蛋白，F(xiàn)OT 值最高的前十種為 keratin， type I cuticular HKRT31）、keratin， type I cuticular Ha6（KRT36）、keratin， type I cytoskele9（KRT19）、keratin， type II cytoskeletal 73（KRT73）、histone H2B type 1HIST1H2BK）、histone H2A type 3（HIST3H2A）、putative trypsin-6 isoformPRSS2）、keratin，， type II cuticular Hb3（KRT83）、peroxiredoxin-4 precurPRDX4）、mucin-like protein 1 precursor（MUCL1）。

江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文（T-complex protein 1 subunit beta isoform 2，CCT2）、玻連蛋白前體（vitronectinprecursor， VTN），Node degree 為 15 的是纖維蛋白原β鏈同種型 1 前原蛋白（fibrinogen beta chain isoform 1 preproprotein， FGB）、載脂蛋白 E 前體（apolipoprotein E precursor，APOE）、凝血酶原蛋白前體（ prothrombinpreproprotein，F(xiàn)2）。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R593.22

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