發(fā)布時(shí)間：2020-04-02 08:41

【摘要】：結(jié)節(jié)病是一種以非干酪樣肉芽腫為主要特征,與Th1/Treg(Regulatory T cell)細(xì)胞免疫紊亂緊密相關(guān)的全身性多器官肉芽腫疾病,90%以上的結(jié)節(jié)病患者會(huì)累及肺部,因此也被稱為肺結(jié)節(jié)病。肺結(jié)節(jié)病目前尚無(wú)針對(duì)發(fā)病機(jī)制的有效治療手段。第一部分:白介素33改善肺結(jié)節(jié)病中Treg細(xì)胞紊亂的研究肺結(jié)節(jié)病患者支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)和外周血中Treg細(xì)胞水平異常且功能缺陷。我們對(duì)肺結(jié)節(jié)病小鼠模型施用白介素33(Interleukin33,IL33)或抗白介素23(Interleukin23,IL23)抗體進(jìn)行干預(yù),通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)(FACS)分析或?qū)崟r(shí)定量PCR(qPCR)檢測(cè)Th1/T helper 17 cell(Th17)/Tregs的平衡情況,以及Treg細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)能力的變化,以此研究IL33或抗IL23抗體對(duì)肺結(jié)節(jié)病免疫紊亂的調(diào)節(jié)和對(duì)Treg細(xì)胞群穩(wěn)態(tài)的影響。同時(shí)通過(guò)蛋白質(zhì)印跡(Western Blot)檢測(cè)PI3K/Akt和TGF-β/Smad2/Smad3信號(hào)通路中關(guān)鍵蛋白的表達(dá),尋找此過(guò)程中可能發(fā)揮作用的關(guān)鍵信號(hào)通路。結(jié)果表明,IL33可以促進(jìn)肺結(jié)節(jié)病小鼠模型Th1/Th17/Tregs的再平衡,增強(qiáng)結(jié)節(jié)病中受到損傷的Treg細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)能力。而IL33的調(diào)節(jié)作用可能是通過(guò)促進(jìn)Treg細(xì)胞表面ST2(IL33受體)的過(guò)表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。此外,IL33促進(jìn)肺結(jié)節(jié)病中Th1/Th17/Tregs再平衡的同時(shí),有效地抑制了在結(jié)節(jié)病中異�；罨腜I3K信號(hào)通路。結(jié)果提示:IL33可能通過(guò)抑制P13K信號(hào)通路,恢復(fù)肺結(jié)節(jié)病中Tregs穩(wěn)態(tài),再平衡Th1/Th2,發(fā)揮抗炎作用。PI3K信號(hào)通路可能對(duì)結(jié)節(jié)病中Treg細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)起到重要作用,因此設(shè)計(jì)了后續(xù)實(shí)驗(yàn),對(duì)PI3K通路與結(jié)節(jié)病中Treg細(xì)胞之間調(diào)控關(guān)系進(jìn)行進(jìn)一步研究。第二部分:調(diào)控PI3K信號(hào)通路對(duì)肺結(jié)節(jié)病Treg細(xì)胞紊亂的研究PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì)于維持Treg的體內(nèi)平衡至關(guān)重要。活動(dòng)期結(jié)節(jié)病患者PI3K/Akt信號(hào)通路異常激活。結(jié)合前期數(shù)據(jù),我們選用了兩種PI3K抑制劑(LY294002和BKM120),來(lái)調(diào)控PI3K信號(hào)通路,以調(diào)節(jié)結(jié)節(jié)病中Treg細(xì)胞水平和功能。采用FACS、qPCR和MACS免疫磁珠分選CD4+CD25+T細(xì)胞以檢測(cè)其抑制功能等方法,檢測(cè)PI3K抑制劑對(duì)結(jié)節(jié)病小鼠模型Th1/Th2、Treg/Th17細(xì)胞亞群紊亂的調(diào)節(jié)作用以及對(duì)Treg細(xì)胞增殖、分化和功能的影響。結(jié)果顯示,在肺結(jié)節(jié)病模型小鼠的Treg細(xì)胞群中存在著PI3K/Akt信號(hào)通路的異�；罨�,同時(shí)Treg細(xì)胞的抑制功能受損。PI3K抑制劑可有效抑制肺內(nèi)和Treg細(xì)胞中PI3K/Akt信號(hào)通路的活化,恢復(fù)結(jié)節(jié)病中受損的Treg細(xì)胞的免疫抑制功能,再平衡Th1/Treg,控制肺結(jié)節(jié)病的進(jìn)展。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明了抑制PI3K信號(hào)通路,可以有效地恢復(fù)肺結(jié)節(jié)病中Treg細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)。而BKM120較LY294002的作用效果更加顯著,提示PI3Kp110γ在該調(diào)節(jié)過(guò)程中的重要作用。后續(xù)的實(shí)驗(yàn)將深入探尋PI3Kp11Oy在肺結(jié)節(jié)病發(fā)生發(fā)展中的作用,以尋找針對(duì)結(jié)節(jié)病發(fā)病機(jī)制的特異性藥物。
【圖文】：

Ｔ細(xì)胞分別計(jì)數(shù)，然后根據(jù)細(xì)胞濃將不同比例的細(xì)胞到１２孔板，入逡逑完全培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，７２小時(shí)以后收取細(xì)胞并分析。逡逑２．１８統(tǒng)計(jì)學(xué)處理逡逑米用ＧｒａｐｈＰａｄ邋Ｐｒｉｓｍ邋７．０邋（ＧｒａｐｈＰａｄ邋Ｓｏｆｔｗａｒｅ，邋Ｌａ邋Ｊｏｌｌａ，邋ＣＡ，邋ＵＳＡ）軟件進(jìn)行數(shù)逡逑據(jù)分析，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤來(lái)表示，各組間比較采用完全隨機(jī)方法分析逡逑（Ｏｎｅ－ｗａｙ邋ＡＮＯＶＡ），Ｐ邋＜邋０．０５認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。逡逑３．結(jié)果逡逑３．１邋Ｃ５７ＢＬ／６肺結(jié)節(jié)病小鼠模型的建立和鑒定逡逑參照臨床上對(duì)結(jié)節(jié)病患者的給藥時(shí)間，我們?cè)趯?duì)小鼠進(jìn)行第一次敏化的第逡逑４４天（發(fā)病較晚期）給予小鼠ＩＬ３３或抗ＩＬ２３抗體進(jìn)行干預(yù)（圖１）。具體步驟見逡逑方法部分。逡逑

我們檢測(cè)了肺結(jié)節(jié)病小鼠模型ＢＡＬＦ中的Ｔｒｅｇ細(xì)胞的數(shù)量和功能的變逡逑化情況．？與正常組比，結(jié)節(jié)病組小鼠的Ｔｒｅｇ細(xì)胞的數(shù)量顯著升高，，但是免疫抑逡逑制能力卻大幅下降（圖３）。逡逑Ｉ邋３］邐｜６０１邐．逡逑４０－逡逑卜｜逡逑—0邐＾邐邋Ｉ逡逑Ｓａｒｃｏｉｄｏｓｉｓ邐Ｃｏｎｔｒｏｌ邋°邐Ｓａｒｃｏｉｄｏｓｉｓ邐Ｃｏｎｔｒｏｌ逡逑圖３各組小鼠淋巴結(jié)中的Ｔｒｅｇ細(xì)胞的數(shù)量和抑制功能的流式統(tǒng)計(jì)結(jié)果（＊Ｐ＜０．０５，逡逑＊＊＊Ｐ＜０．００１．邋ｎ邋＝邋１０）逡逑３．２經(jīng)過(guò)藥物干預(yù)以后結(jié)節(jié)病中的Ｔｈｌ和Ｔｒｅｇ的變化逡逑ＩＬ３３可以有效地抑制在結(jié)節(jié)病中出現(xiàn)的Ｔｈｌ細(xì)胞群異常增多（１０．０３邋士逡逑３＿６５３邋％邋ｖｓ．邋２８．３８邋±５＿７１４邋％；邋Ｐ邋＜邋０．０１，ｑ邋＝邋４．１３１，ａｎｄ邋Ｐ邋＜０．０１．邋ｑ邋＝邋３．０６７），去Ｐ并不逡逑會(huì)改變?cè)瓉?lái)就沒(méi)有變化的Ｔｈ２細(xì)胞群的水平，抗ＩＬ２３在調(diào)節(jié)Ｔｈｌ型細(xì)胞紊亂的表逡逑８３逡逑
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R597

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 趙萌萌;李惠萍;;結(jié)節(jié)病與感染關(guān)系的研究進(jìn)展[J];同濟(jì)大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2017年06期

2 蘇子涵;;結(jié)節(jié)病的防治[J];心血管病防治知識(shí)(科普版);2011年06期

3 李冉;連偉;幸兵;姚勇;王任直;鐘定榮;;垂體結(jié)節(jié)病一例[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2016年02期

4 王琴;李永慧;劉國(guó)華;朱曉芳;;瘢痕型結(jié)節(jié)病一例[J];中國(guó)美容醫(yī)學(xué);2012年04期

5 王宇;段蘊(yùn)鈾;;結(jié)節(jié)病診斷方法的研究進(jìn)展[J];臨床肺科雜志;2011年01期

6 張立群;劉振千;吳曉光;李雪蓮;謝莉;劉菲;;結(jié)節(jié)病診斷的研究進(jìn)展[J];中國(guó)臨床醫(yī)生;2011年09期

7 謝紅濱;劉存旭;;胸部結(jié)節(jié)病27例臨床特點(diǎn)的回顧性研究[J];臨床薈萃;2010年24期

8 郭菁;張民;;結(jié)節(jié)病的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2009年16期

9 劉俊芳;王麗珍;于化鵬;;結(jié)節(jié)病~(18)F-FDG-PET顯像誤診為肺癌1例[J];廣東醫(yī)學(xué);2009年07期

10 ;《結(jié)節(jié)病專題研討會(huì)》通知[J];中華哮喘雜志(電子版);2009年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 李蕊;鮑健;伍愛民;邱偉;陸正齊;胡學(xué)強(qiáng);;誤診為結(jié)核性腦膜腦炎的腦結(jié)節(jié)病1例報(bào)道[A];第十屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)匯編[C];2015年

2 徐作軍;;我國(guó)結(jié)節(jié)病指南的現(xiàn)狀及修改建議[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第三屆全國(guó)間質(zhì)性肺病暨彌漫性泛細(xì)支氣管炎學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

3 黃慧;陸志偉;張堅(jiān);徐作軍;;186例結(jié)節(jié)病臨床分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第三屆全國(guó)間質(zhì)性肺病暨彌漫性泛細(xì)支氣管炎學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

4 陸志偉;黃慧;張堅(jiān);徐作軍;;結(jié)節(jié)病患者肺功能與支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞學(xué)關(guān)系的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第三屆全國(guó)間質(zhì)性肺病暨彌漫性泛細(xì)支氣管炎學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

5 徐作軍;;結(jié)節(jié)病臨床診斷方法研究進(jìn)展[A];呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)（2010-2011）[C];2011年

6 鄧文靜;楊嵐;;結(jié)節(jié)病19例臨床分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2011（第十二次全國(guó)呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議）論文匯編[C];2011年

7 金建敏;孫永昌;李然;田澄;燕飛;;上呼吸道累及為首發(fā)表現(xiàn)的結(jié)節(jié)病-病例報(bào)道與文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2011（第十二次全國(guó)呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議）論文匯編[C];2011年

8 馮喜英;栗廣偉;劉洪千;;1例結(jié)節(jié)病診治過(guò)程并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2013第十四次全國(guó)呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

9 劉彤云;王紅云;何黎;;結(jié)節(jié)病1例[A];2013全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2013年

10 吳苗;余土根;馬麗俐;;結(jié)節(jié)病1例[A];華東六省一市第八次皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前2條

1 李霞 劉錦銘;如何提高結(jié)節(jié)病的確診率[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2004年

2 本報(bào)記者 胡睿;身體地理中尋找未知結(jié)節(jié)病變[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2013年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 王京嵐;外周血血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE），P物質(zhì)（SP）與結(jié)節(jié)病發(fā)病機(jī)理的關(guān)系[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1995年

2 徐作軍;結(jié)節(jié)病的病因?qū)W研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1995年

3 黃慧;結(jié)節(jié)病患者Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞的表達(dá)水平及糖皮質(zhì)激素治療干預(yù)的影響[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

4 毛晨暉;結(jié)節(jié)病診斷評(píng)析：蛋白質(zhì)組學(xué)與臨床綜合診斷[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張彬;PI3K信號(hào)通路調(diào)控結(jié)節(jié)病中Treg穩(wěn)態(tài)的機(jī)制研究[D];南京大學(xué);2019年

2 孫盼;EBUS-TBNA與cTBNA在結(jié)節(jié)病診斷中的應(yīng)用及比較[D];山東大學(xué);2018年

3 閆麗麗;432例結(jié)節(jié)病病例臨床特點(diǎn)分析[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2018年

4 貊婷婷;88例結(jié)節(jié)病臨床特點(diǎn)和預(yù)后分析及IL-22在結(jié)節(jié)病中的表達(dá)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 陳利娜;胸部結(jié)節(jié)病CT影像表現(xiàn)分析[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2012年

6 趙蘭;不典型結(jié)核病與結(jié)節(jié)病病理組織學(xué)鑒別方法的研究[D];蘇州大學(xué);2006年

7 李秋紅;結(jié)節(jié)病與不典型結(jié)核病鑒別診斷方法的研究[D];蘇州大學(xué);2007年

8 周樂(lè)飛;特發(fā)性肺纖維化和結(jié)節(jié)病患者基質(zhì)金屬蛋白酶的變化及其臨床意義[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2010年

9 金燕琴;胸內(nèi)結(jié)節(jié)病的臨床分析[D];浙江大學(xué);2006年

10 王樹憲;經(jīng)纖維支氣管鏡針吸活檢在肺結(jié)節(jié)病Ⅰ期Ⅱ期中的診斷價(jià)值[D];山東大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2611719