【摘要】：背景與目的支氣管哮喘是由多種細(xì)胞、細(xì)胞因子共同參與的一種異質(zhì)性氣道慢性炎癥性疾病。據(jù)報(bào)道,此病患病率較高,可侵及各個(gè)年齡段,不僅嚴(yán)重影響人們的日常生活及工作,還給家庭和社會(huì)帶來了極大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。最新研究發(fā)現(xiàn),微小RNA(microRNA,miR)在支氣管哮喘的發(fā)生發(fā)展中起著相當(dāng)重要的作用。本課題組前期研究也證實(shí)了miR-625-5p可通過靶向蛋白激酶B(Protein Kinase B,AKT2)減輕經(jīng)脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞炎癥表現(xiàn)。而本實(shí)驗(yàn)旨在體外構(gòu)建由卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)誘導(dǎo)的支氣管哮喘BALB/c小鼠模型,研究miR-625-5p對(duì)OVA誘導(dǎo)的支氣管哮喘小鼠的影響及其可能的機(jī)制。方法1.OVA誘導(dǎo)BALB/c小鼠急性支氣管哮喘模型的構(gòu)建1.1.使用OVA聯(lián)合氫氧化鋁[Aluminium hydroxide,Al(OH)3]凝膠配置致敏液(每1ml致敏液含OVA0.05mg,Al(OH)320mg),以O(shè)VA致敏液于第0、7、14天對(duì)BALB/c小鼠腹腔注射致敏,第21天起用1%OVA溶液對(duì)BALB/c小鼠進(jìn)行霧化激發(fā)支氣管哮喘,持續(xù)霧化30分鐘/天,連續(xù)5天,觀察霧化時(shí)小鼠表現(xiàn)。1.2.在末次霧化激發(fā)后24h,處死BALB/c小鼠,行肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)細(xì)胞計(jì)數(shù)分類;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測(cè)總血清免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)E、OVA特異性IgE(OVA specific IgE,OVA-sIgE)及BALF中細(xì)胞因子白細(xì)胞介素(Interleukin,IL)-4的水平;肺組織蘇木精-伊紅(Hematoxylin-Eosin,HE)染色觀察氣道炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況。2.miR-625-5p上調(diào)對(duì)OVA誘導(dǎo)的支氣管哮喘小鼠的影響2.1.將20只6-8周齡雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分為4組:正常組(N組)、支氣管哮喘組(OVA組)、干擾組(Ago組)及陰性對(duì)照組(NC組)。OVA組、Ago組、NC組BALB/c小鼠均于第0、7、14天使用0.2mlOVA溶液(OVA100μg,氫氧化鋁凝膠4 mg)腹腔注射致敏,自第21天起用1%OVA溶液對(duì)BALB/c小鼠進(jìn)行霧化,持續(xù)霧化30分鐘/天,連續(xù)5天,激發(fā)BALB/c小鼠支氣管哮喘發(fā)作。Ago組、NC組分別在第20、22、24天在霧化前30分鐘尾靜脈注射agomiR-625-5p(10nmol/只)和agomiR-NC(10nmol/只)的PBS溶液400μl。N組以等量無菌生理鹽水代替相應(yīng)量的OVA溶液對(duì)小鼠進(jìn)行處理。2.2.在末次霧化激發(fā)后24h,使用動(dòng)物肺功能儀測(cè)定不同乙酰膽堿(Acetylcholine,Ach)濃度刺激下BALB/c小鼠的氣道阻力(Resistance of Lung,RL);通過肺組織病理切片HE染色觀察氣道炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);ELISA法檢測(cè)總血清IgE、OVA-sIgE及BALF中細(xì)胞因子IL-4的水平;顯微鏡下計(jì)數(shù)BALF中的細(xì)胞總數(shù),再經(jīng)瑞士吉姆薩染色后行BALF細(xì)胞分類計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì);RT-qPCR法分析各組BALB/c小鼠肺組織中miR-625-5p、IL-6、腫瘤壞死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)-α的相對(duì)mRNA水平變化。2.3.蛋白免疫印跡(Western blot,WB)法檢測(cè)各小組小鼠肺組織AKT2及磷酸化AKT2(phospho-AKT2,p-AKT2)的蛋白表達(dá)水平變化。結(jié)果1.OVA成功誘導(dǎo)BALB/c小鼠支氣管哮喘模型1.1.兩組模型小鼠霧化時(shí)都表現(xiàn)出抓撓鼻尖、抓耳朵、打噴嚏、活動(dòng)減少等現(xiàn)象。1.2.哮喘模型小鼠BALF細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)較正常小鼠增加,肺組織HE染色可見明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);以200μl/只致敏液致敏的小鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)較0.1ml/只致敏液致敏的小鼠更高,肺組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)更明顯。2.miR-625-5p對(duì)OVA誘導(dǎo)的小鼠哮喘表現(xiàn)有一定的抑制作用2.1.氣道阻力:測(cè)肺功能時(shí),隨Ach激發(fā)霧化濃度梯度升高,N組小鼠氣道阻力僅有輕微升高;OVA組和NC組小鼠氣道阻力升高明顯;Ago組氣道阻力較OVA組顯著下降(p0.05)。2.2.HE染色:N組小鼠支氣管及肺組織結(jié)構(gòu)正常,氣道上皮黏膜完整,無纖毛脫落,炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)較少;OVA組和NC組小鼠肺組織切片染色可見氣道黏膜明顯腫脹,黏膜皺襞明顯增多增厚,氣道上皮細(xì)胞破壞明顯,支氣管及血管周圍有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn);Ago組氣道炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較OVA及NC組明顯減輕,氣道上皮完整,水腫較輕。2.3.ELISA檢測(cè):OVA組和NC組小鼠血清總IgE、OVA-sIgE明顯高于N組小鼠,Ago組小鼠血清總IgE、OVA-sIgE較OVA組明顯降低(p0.05);較N組小鼠,OVA組和NC組小鼠BALF中細(xì)胞因子IL-4的水平增高明顯,Ago組小鼠BALF中細(xì)胞因子IL-4較OVA組顯著下降(p0.05)。2.4.BALF細(xì)胞計(jì)數(shù):OVA組和NC組小鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)顯著高于N組,Ago組小鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)明顯低于OVA組(p0.05)。2.5.WB檢測(cè):OVA組和NC組小鼠肺組織p-AKT2的蛋白表達(dá)水平明顯高于N組,Ago組小鼠肺組織p-AKT2的蛋白表達(dá)水平較OVA組明顯下降(p0.05)。結(jié)論1.通過OVA成功構(gòu)建了支氣管哮喘小鼠模型,miR-625-5p可降低OVA誘導(dǎo)的支氣管哮喘小鼠的氣道高反應(yīng)性,減輕氣道炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。2.miR-625-5p可能通過抑制AKT2磷酸化,從而調(diào)控下游細(xì)胞因子,最終抑制了OVA誘導(dǎo)的支氣管哮喘模型小鼠的氣道高反應(yīng)性及氣道炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。
【圖文】：

予氣管插管，行肺泡灌洗2次，回收液體經(jīng)離心、移取上清、重懸后，利用細(xì)胞計(jì)數(shù)版進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，發(fā)現(xiàn)哮喘組小鼠肺泡灌洗液中細(xì)胞總數(shù)明顯高于對(duì)照組小鼠肺泡灌洗液細(xì)胞數(shù)（見圖1 a）。經(jīng)再次重懸離心后，棄上清，行瑞士吉姆薩染色，，分類計(jì)數(shù)兩組肺泡灌洗液細(xì)胞中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)，可見哮喘組小鼠肺泡灌洗液中嗜酸性粒細(xì)胞較對(duì)照組明顯增高（見圖1 b）。圖 1 對(duì)照組和哮喘組 BCLB/c 小鼠肺泡灌洗液中細(xì)胞數(shù)的變化Figure 1 Changes of cell number in alveolar lavage fluid of BCLB/c mice incontrol group and asthma group（注：與對(duì)照組相比：*P<0.05）a b

3.3 對(duì)照組和哮喘組BALB/c小鼠肺泡灌洗液IL-4水平比較使用ELSA法計(jì)較對(duì)照組和哮喘組BALB/c小鼠肺泡灌洗液IL-4水平，可見哮喘組BALB/c小鼠肺泡灌洗液中IL-4水平顯著高于對(duì)照組（見圖2）。圖2 對(duì)照組和哮喘組BALB/c小鼠肺泡灌洗液IL-4水平比較Figure 2 Comparison of IL-4 levels in alveolar lavage fluid of BALB/c mice incontrol and asthma groups（注：與對(duì)照組相比：*P<0.05）3.4 對(duì)照組和哮喘組BALB/c小鼠血清總IgE和OVA-sIgE水平比較使用ELSA法計(jì)較對(duì)照組和哮喘組BALB/c小鼠血清中總IgE和OVA-sIgE水平，可見哮喘組血清中總IgE和OVA-sIgE水平均顯著高于對(duì)照組（見圖3）。圖3 對(duì)照組和哮喘組BALB/c小鼠血清總IgE和OVA-sIgE水平比較Figure 3 Comparison of serum total IgE and OVA-sIgE levels in BALB/c micein control and asthma groups（注：與對(duì)照組相比：*P<0.05）3.5 對(duì)照組和哮喘組BALB/c小鼠肺組織病理變化小鼠經(jīng)眼球取血處理后，取肺組織于4%多聚甲醛溶液中固定，后行HE染色，結(jié)果示：對(duì)照組小鼠肺組織結(jié)構(gòu)完整，支氣管管壁規(guī)則，氣道皺襞正常，未見明顯水腫、皺襞增厚，血管及支氣管周圍未見明顯細(xì)胞浸潤(rùn)（見圖 4a）。哮喘組小鼠氣道上皮細(xì)胞明顯壞死、脫落；氣道黏膜水腫明顯，黏膜皺襞明顯增多，且ab
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R562.25

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7 曉魚;支氣管哮喘護(hù)理[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2010年

8 唐語;對(duì)支氣管哮喘不利的藥物[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2009年

9 ;支氣管哮喘常識(shí)[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2009年

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本文編號(hào)：2611064