【摘要】：同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)在機(jī)體內(nèi)的異常升高,會(huì)導(dǎo)致高同型半胱氨酸血癥(Hyperhomocysteinemia,HHcy)。如今,我國(guó)HHcy的患病率顯著高于西方國(guó)家,并且大量研究發(fā)現(xiàn)HHcy與腦卒中、冠心病等心腦血管疾病密切相關(guān),嚴(yán)重危害人類健康,其已經(jīng)成為了值得人們關(guān)注的公共衛(wèi)生學(xué)問題。目前,口服葉酸作為干預(yù)HHcy最安全有效的手段,被證實(shí)可以顯著降低機(jī)體血漿Hcy的濃度,對(duì)于腦卒中的發(fā)生和發(fā)展有預(yù)防作用。先前的許多調(diào)查僅僅報(bào)告了葉酸能否降低Hcy的水平,卻很少有研究者關(guān)注Hcy是否被降至了正常范圍。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了很多因素會(huì)對(duì)人體血漿Hcy的水平產(chǎn)生影響,如年齡、性別、生活習(xí)慣、肝腎功能、營(yíng)養(yǎng)因素以及遺傳因素等。在遺傳因素中,Hcy代謝酶關(guān)鍵基因的單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphism,SNP)則是近些年來研究的熱點(diǎn)。本研究將會(huì)結(jié)合環(huán)境因素,分析基因多態(tài)性對(duì)葉酸干預(yù)HHcy效果的作用,探究葉酸治療效果不達(dá)標(biāo)的原因。目的結(jié)合HHcy患者的相關(guān)環(huán)境因素,探究Hcy代謝通路中甜菜堿同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶(Betaine-homocysteine methyltransferase,BHMT)和胱硫醚β合成酶(Cystathionine-β-synthase,CBS)的基因多態(tài)性對(duì)葉酸治療HHcy效果的影響。方法篩選了2014年7月-12月期間,在河南省鄭州市鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院,且入院檢查血漿Hcy水平高于15μmol/L的HHcy病人作為研究對(duì)象,對(duì)其進(jìn)行了為期90天的口服葉酸(5mg/d)干預(yù)治療。在治療中期(第45天)和治療末期(第90天)分別進(jìn)行兩次電話隨訪,并對(duì)患者服藥依從性進(jìn)行評(píng)估,治療結(jié)束后復(fù)查血漿Hcy水平。根據(jù)患者治療后的血漿Hcy水平是否大于15μmol/L,將患者分為干預(yù)達(dá)標(biāo)組(Hcy15μmol/L)和干預(yù)未達(dá)標(biāo)組(Hcy≥15μmol/L)。通過MassArray平臺(tái)對(duì)BHMT基因rs3733890位點(diǎn)、CBS基因rs2851391和rs706209位點(diǎn)進(jìn)行基因分型檢測(cè),運(yùn)用基于logistic回歸的相加模型和廣義多因素降維軟件分析基因多態(tài)性與環(huán)境因素間的交互作用。結(jié)果1.干預(yù)未達(dá)標(biāo)組患者的基線血漿Hcy水平(24.28±9.72μmol/L)顯著高于干預(yù)達(dá)標(biāo)組患者(20.17±6.36μmol/L)。經(jīng)90天葉酸治療后,干預(yù)達(dá)標(biāo)組患者的Hcy下降程度(35.63%)優(yōu)于干預(yù)未達(dá)標(biāo)組(10.16%)。2.吸煙、飲酒、糖尿病、高血壓、冠心病和血脂異常對(duì)葉酸的治療效果有顯著影響,并且其累積效應(yīng)會(huì)明顯升高HHcy患者葉酸干預(yù)效果不達(dá)標(biāo)的風(fēng)險(xiǎn)(P0.001)。3.BHMT基因rs3733890位點(diǎn)基因型在兩組間的分布存在明顯差異(P0.05),攜帶突變基因型(GA/AA)和突變等位基因(A)的患者,葉酸干預(yù)效果不達(dá)標(biāo)的風(fēng)險(xiǎn)升高(OR=1.45,95%CI:1.06~1.97;OR=1.38,95%CI:1.09~1.75);CBS基因rs706209位點(diǎn)基因型在兩組間的分布同樣有明顯差異(P0.05),攜帶突變基因型(CT/TT)和突變等位基因(T)的患者,葉酸治療效果不達(dá)標(biāo)的風(fēng)險(xiǎn)顯著提升(OR=2.02,95%CI:1.23~3.31;OR=1.27,95%CI:1.01~1.60);CBS基因rs2851391位點(diǎn)的基因型在兩個(gè)不同治療結(jié)局組間的分布沒有表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。4.BHMT基因rs3733890位點(diǎn)的突變基因型(GA/AA)聯(lián)合吸煙、飲酒、糖尿病、高血壓、冠心病和血脂異常,可使葉酸干預(yù)效果不達(dá)標(biāo)的風(fēng)險(xiǎn)顯著升高(P0.05,RERI0);CBS基因rs706209位點(diǎn)的突變基因型(CT/TT)聯(lián)合吸煙、飲酒、糖尿病、高血壓、冠心病和血脂異常,亦可使葉酸干預(yù)效果不達(dá)標(biāo)的風(fēng)險(xiǎn)明顯提升(P0.05,RERI0);CBS基因rs2851391位點(diǎn)的多態(tài)性未發(fā)現(xiàn)與以上環(huán)境因素有交互作用。5.BHMT rs3733890、CBS rs2851391和rs706209之間存在著基因-基因交互作用,同時(shí)攜帶這三個(gè)位點(diǎn)的HHcy患者有著更高的葉酸干預(yù)效果不達(dá)標(biāo)的風(fēng)險(xiǎn)(OR=2.14,95%CI:1.33~3.43)。吸煙、飲酒、糖尿病、高血壓、冠心病、血脂異常、rs3733890、rs2851391和rs706209間的基因-環(huán)境、多因素交互作用,對(duì)HHcy患者的葉酸干預(yù)效果有顯著影響(OR=23.01,95%CI:12.46~42.51)。結(jié)論1.BHMT基因rs3733890位點(diǎn)和CBS基因rs706209位點(diǎn)的基因多態(tài)性與葉酸治療HHcy的效果有明顯關(guān)聯(lián),其突變基因會(huì)升高患者葉酸治療效果不達(dá)標(biāo)的風(fēng)險(xiǎn)。2.BHMT基因rs3733890位點(diǎn)以及CBS基因rs2851391和rs706209位點(diǎn)的基因多態(tài)性與吸煙、飲酒、糖尿病、高血壓、冠心病和血脂異常間存在著基因-結(jié)果基因、基因-環(huán)境的交互作用,對(duì)HHcy患者經(jīng)葉酸治療后的效果有顯著影響。
【圖文】：

引言同型半胱氨酸（Homocysteine, Hcy）是一種含硫氨基酸，其作為蛋氨酸在體代謝的中間產(chǎn)物，不參與蛋白質(zhì)的合成。并且只由通過食物攝取的蛋氨酸轉(zhuǎn)基而來，人體內(nèi)不能合成[1]。Hcy 在體內(nèi)有兩條代謝去路[2, 3]：1）再甲基途徑。途徑包括兩個(gè)部分，一是由五甲基四氫葉酸（5-methyltetrahydrofolate，-MTHF）作為甲基供體，在蛋氨酸合成酶（methionine synthase，MTR）的催化用下，以維生素B12為輔酶，將Hcy再甲基化為蛋氨酸；二是以甜菜堿（betaine）為甲基供體，在甜菜堿同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶（betaine-homocysteineethyltransferase，BHMT）的催化下，將 Hcy 再甲基化為蛋氨酸。前者可在除細(xì)胞外的所有細(xì)胞內(nèi)發(fā)生，，而后者則主要發(fā)生在肝、腎細(xì)胞中。2）轉(zhuǎn)硫化途。其是蛋氨酸代謝的主要途徑，Hcy 與絲氨酸在胱硫醚 β 合成酶cystathionine-β-synthase, CBS）在作用下，以維生素 B6 作為輔基，合成胱硫（cystathionine），進(jìn)而在胱硫醚 γ 裂解酶（cystathionine-γ-lyase）的作用下，解為半胱氨酸（cysteine）與�；撬�。見圖 1。

6圖 2 技術(shù)路線圖5 實(shí)驗(yàn)室檢查.1 基因組 DNA 的提取和定量院檢驗(yàn)室在對(duì)血液進(jìn)行檢測(cè)并上報(bào)結(jié)果后，調(diào)查員篩查血漿 Hcmol/L 的病人，根據(jù)在醫(yī)院病歷管理系統(tǒng)中查詢的病人信息，找到檢者血樣，并將剩余的血樣運(yùn)至課題組實(shí)驗(yàn)室，對(duì)血細(xì)胞和血清進(jìn)于 2ml 的 EP 管中保存，采用北京百泰克生物技術(shù)有限公司提供的DNA 提取試劑提取患者的基因組 DNA。具體步驟如下：
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R589

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本文編號(hào)：2597465