【摘要】：同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)在機體內的異常升高,會導致高同型半胱氨酸血癥(Hyperhomocysteinemia,HHcy)。如今,我國HHcy的患病率顯著高于西方國家,并且大量研究發(fā)現(xiàn)HHcy與腦卒中、冠心病等心腦血管疾病密切相關,嚴重危害人類健康,其已經(jīng)成為了值得人們關注的公共衛(wèi)生學問題。目前,口服葉酸作為干預HHcy最安全有效的手段,被證實可以顯著降低機體血漿Hcy的濃度,對于腦卒中的發(fā)生和發(fā)展有預防作用。先前的許多調查僅僅報告了葉酸能否降低Hcy的水平,卻很少有研究者關注Hcy是否被降至了正常范圍。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了很多因素會對人體血漿Hcy的水平產生影響,如年齡、性別、生活習慣、肝腎功能、營養(yǎng)因素以及遺傳因素等。在遺傳因素中,Hcy代謝酶關鍵基因的單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphism,SNP)則是近些年來研究的熱點。本研究將會結合環(huán)境因素,分析基因多態(tài)性對葉酸干預HHcy效果的作用,探究葉酸治療效果不達標的原因。目的結合HHcy患者的相關環(huán)境因素,探究Hcy代謝通路中甜菜堿同型半胱氨酸甲基轉移酶(Betaine-homocysteine methyltransferase,BHMT)和胱硫醚β合成酶(Cystathionine-β-synthase,CBS)的基因多態(tài)性對葉酸治療HHcy效果的影響。方法篩選了2014年7月-12月期間,在河南省鄭州市鄭州大學第五附屬醫(yī)院神經(jīng)內科住院,且入院檢查血漿Hcy水平高于15μmol/L的HHcy病人作為研究對象,對其進行了為期90天的口服葉酸(5mg/d)干預治療。在治療中期(第45天)和治療末期(第90天)分別進行兩次電話隨訪,并對患者服藥依從性進行評估,治療結束后復查血漿Hcy水平。根據(jù)患者治療后的血漿Hcy水平是否大于15μmol/L,將患者分為干預達標組(Hcy15μmol/L)和干預未達標組(Hcy≥15μmol/L)。通過MassArray平臺對BHMT基因rs3733890位點、CBS基因rs2851391和rs706209位點進行基因分型檢測,運用基于logistic回歸的相加模型和廣義多因素降維軟件分析基因多態(tài)性與環(huán)境因素間的交互作用。結果1.干預未達標組患者的基線血漿Hcy水平(24.28±9.72μmol/L)顯著高于干預達標組患者(20.17±6.36μmol/L)。經(jīng)90天葉酸治療后,干預達標組患者的Hcy下降程度(35.63%)優(yōu)于干預未達標組(10.16%)。2.吸煙、飲酒、糖尿病、高血壓、冠心病和血脂異常對葉酸的治療效果有顯著影響,并且其累積效應會明顯升高HHcy患者葉酸干預效果不達標的風險(P0.001)。3.BHMT基因rs3733890位點基因型在兩組間的分布存在明顯差異(P0.05),攜帶突變基因型(GA/AA)和突變等位基因(A)的患者,葉酸干預效果不達標的風險升高(OR=1.45,95%CI:1.06~1.97;OR=1.38,95%CI:1.09~1.75);CBS基因rs706209位點基因型在兩組間的分布同樣有明顯差異(P0.05),攜帶突變基因型(CT/TT)和突變等位基因(T)的患者,葉酸治療效果不達標的風險顯著提升(OR=2.02,95%CI:1.23~3.31;OR=1.27,95%CI:1.01~1.60);CBS基因rs2851391位點的基因型在兩個不同治療結局組間的分布沒有表現(xiàn)出統(tǒng)計學差異(P0.05)。4.BHMT基因rs3733890位點的突變基因型(GA/AA)聯(lián)合吸煙、飲酒、糖尿病、高血壓、冠心病和血脂異常,可使葉酸干預效果不達標的風險顯著升高(P0.05,RERI0);CBS基因rs706209位點的突變基因型(CT/TT)聯(lián)合吸煙、飲酒、糖尿病、高血壓、冠心病和血脂異常,亦可使葉酸干預效果不達標的風險明顯提升(P0.05,RERI0);CBS基因rs2851391位點的多態(tài)性未發(fā)現(xiàn)與以上環(huán)境因素有交互作用。5.BHMT rs3733890、CBS rs2851391和rs706209之間存在著基因-基因交互作用,同時攜帶這三個位點的HHcy患者有著更高的葉酸干預效果不達標的風險(OR=2.14,95%CI:1.33~3.43)。吸煙、飲酒、糖尿病、高血壓、冠心病、血脂異常、rs3733890、rs2851391和rs706209間的基因-環(huán)境、多因素交互作用,對HHcy患者的葉酸干預效果有顯著影響(OR=23.01,95%CI:12.46~42.51)。結論1.BHMT基因rs3733890位點和CBS基因rs706209位點的基因多態(tài)性與葉酸治療HHcy的效果有明顯關聯(lián),其突變基因會升高患者葉酸治療效果不達標的風險。2.BHMT基因rs3733890位點以及CBS基因rs2851391和rs706209位點的基因多態(tài)性與吸煙、飲酒、糖尿病、高血壓、冠心病和血脂異常間存在著基因-結果基因、基因-環(huán)境的交互作用,對HHcy患者經(jīng)葉酸治療后的效果有顯著影響。
【圖文】：

引言同型半胱氨酸（Homocysteine, Hcy）是一種含硫氨基酸，其作為蛋氨酸在體代謝的中間產物，不參與蛋白質的合成。并且只由通過食物攝取的蛋氨酸轉基而來，人體內不能合成[1]。Hcy 在體內有兩條代謝去路[2, 3]：1）再甲基途徑。途徑包括兩個部分，一是由五甲基四氫葉酸（5-methyltetrahydrofolate，-MTHF）作為甲基供體，在蛋氨酸合成酶（methionine synthase，MTR）的催化用下，以維生素B12為輔酶，將Hcy再甲基化為蛋氨酸；二是以甜菜堿（betaine）為甲基供體，在甜菜堿同型半胱氨酸甲基轉移酶（betaine-homocysteineethyltransferase，BHMT）的催化下，將 Hcy 再甲基化為蛋氨酸。前者可在除細胞外的所有細胞內發(fā)生，，而后者則主要發(fā)生在肝、腎細胞中。2）轉硫化途。其是蛋氨酸代謝的主要途徑，Hcy 與絲氨酸在胱硫醚 β 合成酶cystathionine-β-synthase, CBS）在作用下，以維生素 B6 作為輔基，合成胱硫（cystathionine），進而在胱硫醚 γ 裂解酶（cystathionine-γ-lyase）的作用下，解為半胱氨酸（cysteine）與牛磺酸。見圖 1。

6圖 2 技術路線圖5 實驗室檢查.1 基因組 DNA 的提取和定量院檢驗室在對血液進行檢測并上報結果后，調查員篩查血漿 Hcmol/L 的病人，根據(jù)在醫(yī)院病歷管理系統(tǒng)中查詢的病人信息，找到檢者血樣，并將剩余的血樣運至課題組實驗室，對血細胞和血清進于 2ml 的 EP 管中保存，采用北京百泰克生物技術有限公司提供的DNA 提取試劑提取患者的基因組 DNA。具體步驟如下：
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R589

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本文編號：2597465