【摘要】：目的:通過(guò)檢測(cè)自噬特異性蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的蛋白及m RNA表達(dá)水平,觀察高原低氧環(huán)境下大鼠胃黏膜組織細(xì)胞自噬的變化,探討其對(duì)胃黏膜損傷的影響。方法:以60只6-8周齡的成年雄性Wistar大鼠為研究對(duì)象,隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組(n=50,低壓氧艙,海拔5000m)和對(duì)照組(n=10,西寧,海拔2260m),實(shí)驗(yàn)組根據(jù)進(jìn)入低壓氧艙不同時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)分為1d、7d、14d、21d、28d五組,每組各10只。取大鼠胃黏膜組織,HE染色觀察組織大體形態(tài)改變及組織細(xì)胞凋亡情況;免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)自噬特異性蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的蛋白表達(dá)水平;提取大鼠胃黏膜組織細(xì)胞總RNA,采用Real-time PCR法檢測(cè)Beclin-1、LC3-Ⅱ的m RNA表達(dá)水平;統(tǒng)計(jì)分析相關(guān)結(jié)果。結(jié)果:(1)胃黏膜組織HE染色結(jié)果:隨著實(shí)驗(yàn)組大鼠進(jìn)入高原低氧環(huán)境的時(shí)間延長(zhǎng),胃黏膜損傷程度逐漸加重,主要病理表現(xiàn)為胃黏膜腺體結(jié)構(gòu)破壞,大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),局部甚至有出血、凋亡等;(2)免疫組化結(jié)果:與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)各組大鼠胃黏膜組織細(xì)胞Beclin-1、LC3-Ⅱ的蛋白表達(dá)水平均升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05),且隨著暴露于高原低氧環(huán)境的時(shí)間延長(zhǎng),Beclin-1、LC3-Ⅱ的蛋白表達(dá)水平逐漸升高(均P0.05);(3)Real-time PCR結(jié)果:胃黏膜組織細(xì)胞Beclin-1、LC3-Ⅱ的m RNA表達(dá)水平其變化趨勢(shì)與蛋白表達(dá)水平基本一致,即每組實(shí)驗(yàn)大鼠表達(dá)水平均高于對(duì)照組,且隨著低氧暴露時(shí)間延長(zhǎng),表達(dá)水平逐漸升高(均P0.05)。結(jié)論:(1)高原低氧可導(dǎo)致大鼠胃黏膜組織細(xì)胞損傷,且隨著低氧作用時(shí)間延長(zhǎng)程度逐漸加重;(2)高原低氧可誘導(dǎo)胃黏膜組織細(xì)胞自噬水平增加;(3)高原低氧可能通過(guò)升高細(xì)胞自噬水平導(dǎo)致胃黏膜組織細(xì)胞損傷。
【圖文】：

8圖 2.1 免疫組化染色步驟圖2.2.2.4 圖像采集與分析利用顯微鏡拍照，， LeciaApplaction Stiue 圖象系統(tǒng)采集分析樣本相關(guān)部位。采用 Image-pro plus 6.0 軟件分析免疫組織化學(xué)染色所得圖像，使用 IOD（Integrated optical density，積分光密度）進(jìn)行半定量分析。

3.2 各組大鼠胃黏膜組織細(xì)胞 Beciln-1、LC3-Ⅱ的蛋白表達(dá)水平免疫組化法檢測(cè)不同組大鼠胃黏膜組織細(xì)胞 Beclin-1、LC3-Ⅱ的蛋白表達(dá)水平并運(yùn)用 IOD（Integrated optical density，積分光密度）半定量分析。結(jié)果顯示（表 3.1，圖 3.2-3.4）：與對(duì)照組相比，低氧 1d、7d、14d、21d、28d 五組實(shí)驗(yàn)組大鼠胃黏膜組織細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白 Beclin-1、LC3-Ⅱ的蛋白表達(dá)水平均升高，且隨著進(jìn)入高原低氧時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)水平逐漸升高（均 P＜0.05）。綜上，高原低氧可誘導(dǎo)胃黏膜組織細(xì)胞發(fā)生自噬，且隨著高原低氧暴露時(shí)間延長(zhǎng)自噬水平增加。
【學(xué)位授予單位】：青海大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R594.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2595383