【摘要】：第一部分TXNIP通過影響自噬介導(dǎo)高脂高糖導(dǎo)致的胰島功能障礙目的:探討TXNIP與胰島細(xì)胞分泌功能障礙及胰島自噬功能紊亂的關(guān)系方法:選擇1月齡C57BL/6J雄性小鼠、TXNIP基因敲除雄性小鼠(TXNIP~(-/-))各12只,每種小鼠分成SD組(普通飲食)、HFD組(高脂高糖飲食)喂養(yǎng)16周。行葡萄糖耐受性實驗(GTT)和胰島素耐量實驗(ITT)檢測。分離胰島細(xì)胞,凍存胰腺組織檢測TXNIP、P62、LC3B蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:高脂高糖飼養(yǎng)后,C57BL/6J小鼠胰腺組織中TXNIP表達(dá)升高(p0.01)。與對應(yīng)普食組相比,高脂高糖各組小鼠空腹血糖升高,GTT、ITT血糖曲線下面積增大(p0.01)。TXNIP~(-/-)小鼠與同種喂養(yǎng)方式的C57BL/6J小鼠相比,其空腹血糖較低,GTT、ITT血糖曲線下面積較小(p0.05)。與普食組相比,高脂高糖各組小鼠胰腺中自噬相關(guān)蛋白P62、LC3B、LC3Ⅱ/Ⅰ比值上升(P0.01),而它們在TXNIP~(-/-)小鼠HFD組的表達(dá)較C57BL/6J小鼠HFD組減少(p0.05)。結(jié)論:高脂高糖飼養(yǎng)促進(jìn)胰腺組織TXNIP表達(dá)增加、胰島素分泌水平下降、胰島素抵抗增加,同時導(dǎo)致胰島細(xì)胞自噬底物蛋白累積;TXNIP缺失能夠有效抵抗高脂高糖誘導(dǎo)的胰島自噬功能紊亂及胰島細(xì)胞功能障礙。第二部分TXNIP介導(dǎo)胰島細(xì)胞自噬和功能障礙的機制研究目的:探討TXNIP對胰島細(xì)胞自噬的影響及其相關(guān)機制方法:常規(guī)培養(yǎng)MIN6小鼠胰島細(xì)胞,用慢病毒感染構(gòu)建穩(wěn)定陰性對照病毒(LV-GFP)、TXNIP過表達(dá)(LV-TXNIP)、TXNIP抑制(LV-TXNIP-si RNA)三組細(xì)胞,熒光顯微鏡及Western Blot法檢測感染效率。使用游離脂肪酸(FFA)、自噬激動劑雷帕霉素、抑制劑巴佛洛霉素A1分別處理上述各組細(xì)胞。使用電鏡觀察自噬小體;用Western blot法檢測TXNIP、P62、LC3B、Atg3、Atg5、Atg12、Atg16蛋白表達(dá)水平及mTOR通路激活水平。結(jié)果:與LV-GFP組相比,LV-TXNIP組TXNIP、P62、Atg12、Atg16蛋白表達(dá)明顯增加(P0.01),Atg3、Atg5及LC3Ⅱ/Ⅰ、m TOR磷酸化水平升高(p0.05);LV-TXNIP-si RNA組TXNIP、P62、Atg3、Atg5表達(dá)明顯降低(p0.01),Atg16表達(dá)減少(p0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ比值增加(p0.01),而m TOR磷酸化水平、Atg12無明顯差異。MIN6細(xì)胞用雷帕霉素處理后,P62表達(dá)下降(P0.01),LC3Ⅱ/Ⅰ比值增加(p0.01);LV-TXNIP組較LV-GFP組相比,P62升高(p0.01),LC3Ⅱ/Ⅰ比值增加(p0.05)。FFA處理各組細(xì)胞后,P62、LC3B及LC3Ⅱ/Ⅰ比值均增加(p0.05);與LV-GFP組相比,LV-TXNIP組的P62、LC3B表達(dá)增加(p0.05),自噬小體增多,LC3Ⅱ/Ⅰ比值無明顯變化;LV-TXNIP-si RNA組與LV-GFP組相比,自噬小體減少,P62表達(dá)下降、LC3Ⅱ/Ⅰ比值增大(p0.05)。自噬抑制劑巴佛洛霉素A1作用后,LV-TXNIP組P62、LC3Ⅱ/Ⅰ較LV-GFP組表達(dá)上調(diào)(p0.05)。結(jié)論:TXNIP過表達(dá)能夠促進(jìn)MIN6細(xì)胞自噬體形成相關(guān)蛋白表達(dá)上調(diào)、自噬底物蛋白及自噬小體累積;沉默TXNIP后,自噬小體及自噬相關(guān)蛋白表達(dá)均減少。說明TXNIP上調(diào)能導(dǎo)致胰島細(xì)胞自噬轉(zhuǎn)換流通功能障礙。這可能與TXNIP激活mTOR信號通路,或抑制溶酶體降解途徑相關(guān)。
【圖文】：

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文3.2 高脂高糖飼養(yǎng)后，胰島素分泌水平下降、胰島素抵抗增強。TXNIP-/-小鼠與同種喂養(yǎng)方式的 C57BL/6J 小鼠相比，空腹血糖較低、胰島素分泌功能較好、胰島素抵抗較弱。如圖 1.2 和 1.3 所示，兩種飲食飼養(yǎng)的 C57、TXNIP-/-小鼠各組 GTT 結(jié)果表明，與對應(yīng)普食組相比，高脂高糖各組小鼠空腹血糖升高(p<0.01)，曲線下面積增加，胰島素分泌功能減低（p<0.01）,其中 C57 小鼠高脂高糖組 GTT 高峰延遲。TXNIP-/-小鼠與同種喂養(yǎng)方式的 C57 小鼠相比，胰島素分泌功能好（p<0.01），普食組空腹血糖較 C57 普食組低。表 1.2 四組小鼠 GTT 血糖變化情況Table 1.2 GTT among the four groups

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文如圖 1.4 和 1.5 所示，兩種飲食飼養(yǎng)的 C57、TXNIP-/-小鼠各組 ITT 結(jié)果顯示，與對應(yīng)普食組相比，高脂高糖各組空腹血糖升高（p<0.01）,曲線下面積增大(P<0.01)，靶器官的胰島素敏感性降低，胰島素抵抗增強。兩個高脂高糖組相比，TXNIP-/-鼠的 ITT 曲線下面積較�。╬<0.05），胰島素抵抗較弱。表 1.4 4 組小鼠 ITT 血糖變化情況Table 1.4 ITT among the four groups
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R587.1

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本文編號：2594436