【摘要】：第一部分TXNIP通過影響自噬介導高脂高糖導致的胰島功能障礙目的:探討TXNIP與胰島細胞分泌功能障礙及胰島自噬功能紊亂的關系方法:選擇1月齡C57BL/6J雄性小鼠、TXNIP基因敲除雄性小鼠(TXNIP~(-/-))各12只,每種小鼠分成SD組(普通飲食)、HFD組(高脂高糖飲食)喂養(yǎng)16周。行葡萄糖耐受性實驗(GTT)和胰島素耐量實驗(ITT)檢測。分離胰島細胞,凍存胰腺組織檢測TXNIP、P62、LC3B蛋白表達水平。結(jié)果:高脂高糖飼養(yǎng)后,C57BL/6J小鼠胰腺組織中TXNIP表達升高(p0.01)。與對應普食組相比,高脂高糖各組小鼠空腹血糖升高,GTT、ITT血糖曲線下面積增大(p0.01)。TXNIP~(-/-)小鼠與同種喂養(yǎng)方式的C57BL/6J小鼠相比,其空腹血糖較低,GTT、ITT血糖曲線下面積較小(p0.05)。與普食組相比,高脂高糖各組小鼠胰腺中自噬相關蛋白P62、LC3B、LC3Ⅱ/Ⅰ比值上升(P0.01),而它們在TXNIP~(-/-)小鼠HFD組的表達較C57BL/6J小鼠HFD組減少(p0.05)。結(jié)論:高脂高糖飼養(yǎng)促進胰腺組織TXNIP表達增加、胰島素分泌水平下降、胰島素抵抗增加,同時導致胰島細胞自噬底物蛋白累積;TXNIP缺失能夠有效抵抗高脂高糖誘導的胰島自噬功能紊亂及胰島細胞功能障礙。第二部分TXNIP介導胰島細胞自噬和功能障礙的機制研究目的:探討TXNIP對胰島細胞自噬的影響及其相關機制方法:常規(guī)培養(yǎng)MIN6小鼠胰島細胞,用慢病毒感染構建穩(wěn)定陰性對照病毒(LV-GFP)、TXNIP過表達(LV-TXNIP)、TXNIP抑制(LV-TXNIP-si RNA)三組細胞,熒光顯微鏡及Western Blot法檢測感染效率。使用游離脂肪酸(FFA)、自噬激動劑雷帕霉素、抑制劑巴佛洛霉素A1分別處理上述各組細胞。使用電鏡觀察自噬小體;用Western blot法檢測TXNIP、P62、LC3B、Atg3、Atg5、Atg12、Atg16蛋白表達水平及mTOR通路激活水平。結(jié)果:與LV-GFP組相比,LV-TXNIP組TXNIP、P62、Atg12、Atg16蛋白表達明顯增加(P0.01),Atg3、Atg5及LC3Ⅱ/Ⅰ、m TOR磷酸化水平升高(p0.05);LV-TXNIP-si RNA組TXNIP、P62、Atg3、Atg5表達明顯降低(p0.01),Atg16表達減少(p0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ比值增加(p0.01),而m TOR磷酸化水平、Atg12無明顯差異。MIN6細胞用雷帕霉素處理后,P62表達下降(P0.01),LC3Ⅱ/Ⅰ比值增加(p0.01);LV-TXNIP組較LV-GFP組相比,P62升高(p0.01),LC3Ⅱ/Ⅰ比值增加(p0.05)。FFA處理各組細胞后,P62、LC3B及LC3Ⅱ/Ⅰ比值均增加(p0.05);與LV-GFP組相比,LV-TXNIP組的P62、LC3B表達增加(p0.05),自噬小體增多,LC3Ⅱ/Ⅰ比值無明顯變化;LV-TXNIP-si RNA組與LV-GFP組相比,自噬小體減少,P62表達下降、LC3Ⅱ/Ⅰ比值增大(p0.05)。自噬抑制劑巴佛洛霉素A1作用后,LV-TXNIP組P62、LC3Ⅱ/Ⅰ較LV-GFP組表達上調(diào)(p0.05)。結(jié)論:TXNIP過表達能夠促進MIN6細胞自噬體形成相關蛋白表達上調(diào)、自噬底物蛋白及自噬小體累積;沉默TXNIP后,自噬小體及自噬相關蛋白表達均減少。說明TXNIP上調(diào)能導致胰島細胞自噬轉(zhuǎn)換流通功能障礙。這可能與TXNIP激活mTOR信號通路,或抑制溶酶體降解途徑相關。
【圖文】：

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文3.2 高脂高糖飼養(yǎng)后，胰島素分泌水平下降、胰島素抵抗增強。TXNIP-/-小鼠與同種喂養(yǎng)方式的 C57BL/6J 小鼠相比，空腹血糖較低、胰島素分泌功能較好、胰島素抵抗較弱。如圖 1.2 和 1.3 所示，兩種飲食飼養(yǎng)的 C57、TXNIP-/-小鼠各組 GTT 結(jié)果表明，與對應普食組相比，高脂高糖各組小鼠空腹血糖升高(p<0.01)，曲線下面積增加，胰島素分泌功能減低（p<0.01）,其中 C57 小鼠高脂高糖組 GTT 高峰延遲。TXNIP-/-小鼠與同種喂養(yǎng)方式的 C57 小鼠相比，胰島素分泌功能好（p<0.01），普食組空腹血糖較 C57 普食組低。表 1.2 四組小鼠 GTT 血糖變化情況Table 1.2 GTT among the four groups

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文如圖 1.4 和 1.5 所示，兩種飲食飼養(yǎng)的 C57、TXNIP-/-小鼠各組 ITT 結(jié)果顯示，與對應普食組相比，高脂高糖各組空腹血糖升高（p<0.01）,曲線下面積增大(P<0.01)，靶器官的胰島素敏感性降低，胰島素抵抗增強。兩個高脂高糖組相比，TXNIP-/-鼠的 ITT 曲線下面積較�。╬<0.05），胰島素抵抗較弱。表 1.4 4 組小鼠 ITT 血糖變化情況Table 1.4 ITT among the four groups
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R587.1

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 劉巧云;沈漢明;夏大靜;;鋅與自噬[J];浙江大學學報(醫(yī)學版);2016年03期

2 韓蘇夏;蔡夢嬌;;自噬在腫瘤治療策略中的角色[J];西部醫(yī)學;2018年09期

3 周岐鳴;劉洋;季光;宋海燕;;調(diào)節(jié)自噬改善非酒精性脂肪性肝病的藥物研究進展[J];中華中醫(yī)藥學刊;2018年10期

4 李曉瓊;何玲玲;李新毅;;自噬與中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病研究進展[J];中風與神經(jīng)疾病雜志;2018年10期

5 馬文科;戴舒惠;羅鵬;楊悅凡;費舟;;線粒體自噬的研究進展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2017年06期

6 付婉;董笛;趙穎;;自噬的相關分子機制[J];中國生物化學與分子生物學報;2017年05期

7 方聰聰;毛善平;董慧敏;劉寶輝;王舜;;線粒體自噬與中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病關系的研究進展[J];卒中與神經(jīng)疾病;2017年02期

8 李旭卉;吳習習;張凱;羅海霞;李敏;;線粒體自噬與癌癥關系的研究進展[J];動物醫(yī)學進展;2017年09期

9 陳延斌;黃建安;;自噬在呼吸系統(tǒng)的研究現(xiàn)狀[J];中國呼吸與危重監(jiān)護雜志;2017年06期

10 張安琪;朱莉拉;劉若冰;;自噬在心肌缺血再灌注過程中的研究進展[J];人人健康;2016年20期

相關會議論文 前10條

1 肖伊寧;呂佩源;;選擇性自噬的研究進展[A];7th中華醫(yī)學會神經(jīng)病學分會全國中青年神經(jīng)病學學術大會暨第十屆全國神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病與腦脊液細胞學學術大會論文匯編[C];2014年

2 胡成楓;胡春蘭;陳良標;;自噬在斑馬魚細胞冷應激過程中的作用機制探究[A];2017年中國水產(chǎn)學會學術年會論文摘要集[C];2017年

3 肖伊寧;呂佩源;;選擇性自噬的研究進展[A];中華醫(yī)學會第十七次全國神經(jīng)病學學術會議論文匯編（下）[C];2014年

4 秦正紅;粱中琴;陶陸陽;黃強;劉春風;蔣星紅;倪宏;邢春根;;自噬在細胞生存與死亡中的作用[A];中國藥理學會第九次全國會員代表大會暨全國藥理學術會議論文集[C];2007年

5 秦正紅;;自噬與腫瘤和神經(jīng)細胞生存——藥物作用的新靶位[A];全國生化與分子藥理學藥物靶點研討會論文摘要集[C];2008年

6 余慧芬;唐李;李妍;;自噬現(xiàn)象對腫瘤發(fā)生影響的研究進展[A];2017第七屆泛環(huán)渤海生物化學與分子生物學會學術交流會論文集[C];2017年

7 王菲菲;邱學敏;王凌;;自噬對骨代謝的調(diào)節(jié)作用[A];第9屆中國中西醫(yī)結(jié)合學會婦產(chǎn)科專業(yè)委員會第二次學術會議論文集[C];2017年

8 申森森;李林楠;徐林楠;白玉;劉虎威;;基于氣相色譜-高分辨質(zhì)譜的饑餓誘導小鼠胚胎成纖維細胞自噬過程的代謝組學研究[A];第21屆全國色譜學術報告會及儀器展覽會會議論文集[C];2017年

9 任栓成;倪娜娜;胡志安;;睡眠覺醒期神經(jīng)元自噬活動的變化[A];中國睡眠研究會第九屆學術年會匯編[C];2016年

10 蔣緒順;;自噬在棕櫚酸誘導的足細胞凋亡中的作用及機制[A];2016年中國中西醫(yī)結(jié)合學會腎臟疾病專業(yè)委員會學術年會論文摘要匯編[C];2016年

相關重要報紙文章 前10條

1 王建新 主持;“自噬”的快車剛剛啟動[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2016年

2 記者 周潔;解密“自噬”，抗癌治病更近一步[N];河北日報;2016年

3 本報記者 房琳琳;“自噬機制”帶來對抗衰老新希望[N];科技日報;2016年

4 生命學院;俞立課題組在《科學》發(fā)文揭示自噬調(diào)控的重要機制[N];新清華;2012年

5 本報首席記者 唐聞佳;上海與新科諾獎得主頗有學術緣[N];文匯報;2016年

6 記者 陶婷婷;成功揭示代謝降解調(diào)控新機制[N];上�？萍紙�;2013年

7 記者 白毅;浙大二院發(fā)現(xiàn)大氣顆粒污染誘導呼吸道自噬性損傷新機制[N];中國醫(yī)藥報;2015年

8 張明永;水稻自噬基因研究取得新進展[N];廣東科技報;2011年

9 本報記者 徐瑞哲 顧泳 黃楊子;生理醫(yī)學界少有東方學者如此領先[N];解放日報;2016年

10 記者 胡德榮;肝癌患者自噬性缺陷表型與預后不良緊密相關[N];健康報;2008年

相關博士學位論文 前10條

1 于織波;TRIM22通過自噬調(diào)控RSV復制的研究[D];河北醫(yī)科大學;2018年

2 王玉;番茄生長發(fā)育和逆境響應中自噬的作用及其調(diào)控機制[D];浙江大學;2017年

3 孫曉琪;雌二醇通過G蛋白偶聯(lián)雌激素受體30 (GPR30)/ERK1/2信號通路調(diào)節(jié)MC3T3-E1細胞線粒體自噬的分子機制研究[D];中國醫(yī)科大學;2018年

4 劉永一;自噬在棕櫚酸誘導骨髓間充質(zhì)干細胞凋亡中的作用及機制研究[D];中國醫(yī)科大學;2018年

5 陳曦;丙泊酚對小鼠成肌細胞自噬的影響及其機制的研究[D];吉林大學;2018年

6 張丹;自噬在新生大鼠支氣管肺發(fā)育不良中的作用及調(diào)控機制研究[D];中國醫(yī)科大學;2018年

7 孟春芹;竹節(jié)香附素A調(diào)控PI3K/AKT/mTOR誘導腸癌細胞自噬和凋亡的研究[D];南京中醫(yī)藥大學;2018年

8 牛國輝;HIF-1α調(diào)節(jié)自噬在缺氧缺血性腦損傷中的作用機制研究[D];鄭州大學;2018年

9 王紅娟;遠隔缺血處理激活自噬對血管認知功能障礙保護機制研究[D];山東大學;2018年

10 陳樹東;慢性頸脊毮壓迫的臨床轉(zhuǎn)歸及自噬在脊毮運動神經(jīng)元中的作用[D];廣州中醫(yī)藥大學;2016年

相關碩士學位論文 前10條

1 謝巍偉;BRF1通過自噬和MAPK/ERK信號通路調(diào)控炎癥的實驗研究[D];重慶醫(yī)科大學;2018年

2 鄧文珍;TXNIP通過介導自噬紊亂促進胰島β細胞功能障礙的機制研究[D];重慶醫(yī)科大學;2018年

3 鄭維;ATG5聯(lián)合ATG7通過PERK信號通路調(diào)控自噬、ERS及D-EAK短肽對小鼠骨關節(jié)炎的效應研究[D];重慶醫(yī)科大學;2018年

4 劉醒然;自由轉(zhuǎn)輪運動通過miR-130a介導自噬延緩大鼠腦衰老的機制研究[D];武漢體育學院;2018年

5 劉一鋒;FBP1通過抑制線粒體自噬促進乳腺癌細胞凋亡及其機制研究[D];重慶醫(yī)科大學;2018年

6 李旭;IFN-λ1下調(diào)自噬因子ATG5和GABARAP表達抑制HCV復制的機制研究[D];廣西醫(yī)科大學;2017年

7 文巧林;錳誘導SH-SY5Y細胞發(fā)生線粒體自噬及BNIP3調(diào)控作用的初步研究[D];廣西醫(yī)科大學;2017年

8 蔣夢彤;胰腺癌自噬相關非編碼RNA及其互作機制的初步探討[D];廣西醫(yī)科大學;2017年

9 李景峰;昆蟲自噬途徑與桿狀病毒AcMNPV侵染關系初探[D];西北農(nóng)林科技大學;2018年

10 龍隆;淫羊藿次苷Ⅱ抗腦缺血再灌注損傷的作用及其機制研究[D];遵義醫(yī)學院;2018年

，

本文編號：2594436