本文關(guān)鍵詞：雷公藤多苷對(duì)糖尿病腎病大鼠腎臟TGF-β1及FN表達(dá)的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 2010年糖尿病患者人數(shù)達(dá)到2.85億,將近全世界成人數(shù)量的7%,糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病患者常見的慢性微血管并發(fā)癥,也是終末期腎衰竭的最主要原因。DN的發(fā)生是多種原因綜合作用的結(jié)果,近年來研究揭示DN的發(fā)病除了與代謝紊亂和血流動(dòng)力學(xué)改變的影響有關(guān)外,炎癥機(jī)制是其持續(xù)發(fā)展的關(guān)鍵因素之一,其中炎性細(xì)胞因子轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(Transforming growth factor-β,TGF-β1)、纖維粘連蛋白(Fibronectin,FN)起重要作用。雷公藤多苷是我國傳統(tǒng)中草藥,具有免疫抑制作用,目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用于多種自身免疫性疾病的治療。其是否可以減少尿蛋白,改善腎臟損害,需要進(jìn)一步研究證實(shí)。此外,觀察DN時(shí)腎臟組織TGF-β1和FN的表達(dá)情況,有助于我們對(duì)DN發(fā)病機(jī)制的理解,還有重要的治療意義。 本研究主要通過建立2型DN模型大鼠,應(yīng)用雷公藤多苷(Tripterygium wilfordii polyglucoside,TWP)對(duì)該模型進(jìn)行干預(yù)性治療,觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的24小時(shí)尿蛋白、血常規(guī)、肝功能、腎功能,光鏡、電鏡觀察腎臟病理形態(tài)學(xué)以及RT-PCR、免疫組織化學(xué)法分析腎組織中TGF-β1及FN等的變化,探討雷公藤多苷對(duì)DN大鼠腎臟預(yù)防治療作用的可能機(jī)制。 方法： 清潔級(jí)雄性SD大鼠136只,隨機(jī)選取16只分為預(yù)防正常對(duì)照組(PNC組)、治療正常對(duì)照組(TNC組),每組8只,飼以常規(guī)飼料；其余120只大鼠以高糖高脂飼料喂養(yǎng)4周聯(lián)合小劑量STZ(30mg/kg)尾靜脈注射建立T2DM模型,將成模大鼠隨機(jī)分為預(yù)防模型對(duì)照組(PDM組)、預(yù)防雷公藤多苷低劑量組(PTL組,6mg/kg)、預(yù)防雷公藤多苷中劑量組(PTM組,12mg/kg)、預(yù)防雷公藤多苷高劑量組(PTH組,24mg/kg)及治療模型對(duì)照組(TDM組)、治療雷公藤多苷低劑量組(TTL組,6mg/kg)、治療雷公藤多苷中劑量組(TTM組,12mg/kg)、治療雷公藤多苷高劑量組(TTH組,24mg/kg),每組15只。雷公藤多苷預(yù)防組于成模后即開始灌胃,灌胃4周后處死；雷公藤多苷治療組于成模后第5周開始灌胃,第8周末處死；PNC、TNC組和PDM、TDM組以等量蒸餾水灌胃。實(shí)驗(yàn)過程中記錄大鼠體重(BW)、血糖、24小時(shí)尿微量白蛋白(UMA)變化,STZ注射前內(nèi)眥取血測(cè)血脂。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)：①留取血標(biāo)本用于血常規(guī)、肝腎功能、血脂測(cè)定；記錄BW、腎臟重量(KW)；②留取腎組織標(biāo)本,光鏡、電鏡觀察腎臟病理及超微結(jié)構(gòu)的變化；RT-PCR法檢測(cè)TGF-β1和FN的表達(dá)；免疫組化法檢測(cè)TGF-β1和FN的表達(dá),明確TGF-β1和FN在DN中的作用以及雷公藤多苷治療的影響和可能機(jī)制。 結(jié)果 (1)成功制備DN模型,24h尿蛋白特點(diǎn)及腎臟病理變化符合人類2型糖尿病腎病的特點(diǎn)及病理變化。 (2)預(yù)防及治療組模型大鼠血糖均維持在16.7mmol/L以上；腎重／體重的比重均較正常對(duì)照組增加(P0.05)；雷公藤多苷給藥后各組腎重／體重的比重較模型組均有所降低,其中雷公藤多苷給藥中劑量組下降最明顯。 (3)預(yù)防組成模第4周末時(shí),各組的UMA水平均比正常對(duì)照明顯升高,雷公藤多苷給藥后各組UMA均有所下降,其中給藥中劑量組UMA水平下降最明顯(P0.05)；治療組成模第4周末及第8周末時(shí),各組的UMA水平均較成模時(shí)明顯升高(P0.05),成模第8周末時(shí),模型對(duì)照組及雷公藤多苷給藥各組的UMA水平均比正常對(duì)照組明顯升高(P0.05),雷公藤多苷給藥后各組UMA均有所下降(P0.05),其中PTM組UMA水平下降最明顯(P0.05)。 (4)肝腎功、血脂結(jié)果顯示：預(yù)防PTH組AST水平較其余各組明顯升高(P0.05)；預(yù)防組各組間ALT、SCr及BUN水平比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)；治療組各組間AST、ALT、SCr及BUN水平比較也無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。高脂飼料飼養(yǎng)4周后,模型組大鼠TG、TC水平與正常組大鼠比較明顯升高(P0.05),預(yù)防組和治療組大鼠分別與正常對(duì)照組比較,模型對(duì)照組、雷公藤多苷給藥各組TG、TC均明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 血常規(guī)結(jié)果顯示：雷公藤多苷治療給藥組淋巴細(xì)胞較TNC組明顯降低(P0.05),雷公藤多苷預(yù)防組中淋巴細(xì)胞無明顯差異(P0.05),其余白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板、血紅蛋白、單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞在各組間均無明顯差異(P0.05)； (5)光鏡、電鏡結(jié)果顯示：預(yù)防組和治療組中正常對(duì)照組大鼠腎小球體積、腎小球系膜區(qū)、腎小囊,腎小管及腎間質(zhì)均未見明顯異常。預(yù)防組和治療組的模型對(duì)照組均可腎小球和腎小管DN的腎臟病理改變。雷公藤多苷給藥后各組上述病理性改變均有所改善,其中雷公藤多苷給藥中劑量組均改善最明顯。 (6)實(shí)時(shí)熒光定量PCR顯示,與正常對(duì)照組相比較,所有DM組TGF-β1、FNmRNA表達(dá)水平均顯著升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；雷公藤多苷干預(yù)和治療組的TGF-β1、FN mRNA表達(dá)水平與模型對(duì)照組比較均顯著下降,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；其中,中劑量組表達(dá)量下降最顯著,與其余各組比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 (7)免疫組化結(jié)果顯示,TGF-β1、FN在DM各組的腎小球及腎小管中均有表達(dá),且主要表達(dá)于腎小管區(qū)域。雷公藤多苷干預(yù)和治療組的TGF-β1、FNmRNA表達(dá)水平與模型對(duì)照組比較均顯著下降,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；其中,中劑量組表達(dá)量下降最顯著。 結(jié)論 (1)成功制備DN模型,24h尿蛋白特點(diǎn)及腎臟病理變化符合人類2型糖尿病腎病的特點(diǎn)及病理變化。 (2)雷公藤多苷給藥后,預(yù)防組和治療組UMA均有所下降,尤其是雷公藤多苷中劑量給藥組UMA水平下降最明顯,雷公藤多苷具有降低尿蛋白的作用,可有效延緩DN的發(fā)生發(fā)展。 (3)糖尿病大鼠腎臟組織炎性相關(guān)因子TGF-β1、FN的表達(dá)水平明顯上調(diào),提示腎組織局部的炎癥反應(yīng)和纖維化作用,導(dǎo)致腎小管間質(zhì)及腎小球損傷,參與了DN的發(fā)生與發(fā)展。 (4)雷公藤多苷給藥后,預(yù)防組和治療組TGF-β1、FN表達(dá)量均分別較模型對(duì)照組顯著下降,尤其是中劑量組TGF-β1、FN表達(dá)量下降明顯,推測(cè)雷公藤多苷可能具有抑制炎性細(xì)胞因子的表達(dá),減少腎組織局部的炎癥反應(yīng)和纖維化作用,從而延緩DN的發(fā)生發(fā)展。
【關(guān)鍵詞】：雷公藤多苷 糖尿病腎病 FN TGF-β1 大鼠
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R587.2;R692
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-13
• ~.略語/符號(hào)說明13-15
• 前言15-17
• 研究現(xiàn)狀、成果15-16
• 研究目的與方法16-17
• 一、材料與方法17-30
• 1. 動(dòng)物飼養(yǎng)和模型的建立、分組及取材17-21
• 1.1. 動(dòng)物飼養(yǎng)和主要試劑、儀器17-18
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法18-21
• 2. 主要試劑及儀器21-22
• 2.1 Real-time(PCR)主要試劑及儀器21
• 2.2 免疫組化實(shí)驗(yàn)所需主要試劑及儀器21-22
• 2.3 主要溶液配制22
• 3. 實(shí)驗(yàn)方法22-29
• 3.1 逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)(RT-PCR)23-28
• 3.2 免疫組化法28-29
• 4. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法29-30
• 二、結(jié)果30-61
• 1. 建立了2型糖尿病SD大鼠模型30-43
• 2. RT-PCR法43-49
• 2.1 RNA純度及完整性鑒定結(jié)果43
• 2.2 甲醛變性瓊脂糖凝膠電43
• 2.3 普通PCR擴(kuò)增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳43
• 2.4 Real-timePCR檢測(cè)目的基因mRNA水平43-49
• 3. 免疫組化方法檢測(cè)TGF-β1、FN的蛋白水平表達(dá)情況49-55
• 3.1 免疫組化方法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)大鼠TGF-β1蛋白水平表達(dá)49-53
• 3.2 免疫組化方法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)大鼠FN蛋白水平表達(dá)情況53-55
• 4. 病理學(xué)檢查55-61
• 4.1 光鏡檢查55-59
• 4.2 電鏡檢查59-61
• 討論61-67
• 結(jié)論67-68
• 參考文獻(xiàn)68-72
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明72-73
• 綜述73-85
• 綜述參考文獻(xiàn)80-85
• 致謝85

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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  本文關(guān)鍵詞：雷公藤多苷對(duì)糖尿病腎病大鼠腎臟TGF-β1及FN表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：258957