【摘要】：第一部分應(yīng)用人全基因組表達譜芯片篩選糖尿病前期相關(guān)差異基因目的:糖尿病日益成為嚴重威脅人類健康的慢性疾病之一,隨著糖尿病前期人群的增多,造成糖尿病人群的大量增長,糖尿病并發(fā)癥隨之發(fā)生,將嚴重降低患者的生活質(zhì)量和加重社會及家庭的經(jīng)濟負擔(dān)。糖尿病前期是正常糖耐量和糖尿病的中間狀態(tài),是機體早期糖代謝的紊亂階段,大多糖尿病前期患者不表現(xiàn)出“三多一少”(多食、多飲、多尿、體重下降)的糖尿病典型癥狀,甚至沒有任何癥狀,不能引起人們的警覺和重視,因而認為自己不是糖尿病的高危人群。再者糖尿病前期是一個可逆的過程,如果在早期能夠發(fā)現(xiàn)基因水平的改變,并予以有針對性的干預(yù),可使糖尿病的發(fā)病風(fēng)險明顯下降。近年來,人們已經(jīng)認識到糖尿病前期的發(fā)病是多基因共同參與的過程,對糖尿病前期基因水平上的檢測能提早發(fā)現(xiàn)組織學(xué)上可能忽略或者無法發(fā)現(xiàn)的變化,這些基因的改變可能預(yù)示糖尿病前期的發(fā)生。本研究是廣譜篩選糖尿病前期患者與正常人之間的表達差異基因,初步分析差異表達基因在糖尿病前期發(fā)病機制中的作用,為進一步研究糖尿病前期基因診斷及基因靶向干預(yù)治療奠定新的理論基礎(chǔ)。方法:收集糖尿病前期患者及健康人外周血液標本各24例,共48例,選用Agilent人全基因組表達譜芯片4*44K技術(shù)分析樣本基因表達情況,再利用t檢驗、差異倍數(shù)的方法篩選差異基因,在大量差異基因中結(jié)合基因功能篩選出與糖尿病前期發(fā)病相關(guān)的基因。結(jié)果:與健康對照組相比,P0.05時,選出差異基因共13252個,其中上調(diào)基因7414個,下調(diào)基因5838個,差異倍數(shù)大于2.0倍的探針共65個,其中上調(diào)的37個,下調(diào)的28個,差異倍數(shù)大于1.5倍以上的探針共474個,其中上調(diào)279個,下調(diào)195個。差異基因主要參與細胞周期、免疫反應(yīng)、代謝等生物過程,與細胞周期通路、煙酸和煙酰胺代謝、氮代謝、嘌呤代謝、嘧啶代謝、組氨酸代謝、MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及黑色素瘤等信號通路有關(guān)。結(jié)論:應(yīng)用人全基因組表達譜芯片能有效的篩選出與糖尿病前期相關(guān)的差異基因。第二部分糖尿病前期差異基因的鑒定目的:為了排除芯片實驗結(jié)果中篩選出的差異基因的錯誤和假陽性,選擇表達差異明顯且與糖代謝相關(guān)的ENPP1和TCF7L2進行實時熒光定量PCR驗證,觀察其在糖尿病前期組和正常組的基因表達情況。通過對糖尿病前期相關(guān)差異基因的初步篩選與驗證,可以提早發(fā)現(xiàn)潛在的糖尿病前期風(fēng)險,為糖尿病前期的早期診斷及靶向干預(yù)治療提供依據(jù)。方法:在前期納入的兩組樣本中隨機選擇12例樣本,糖尿病前期組(驗證組)6例,正常對照組6例,采用實時熒光定量PCR(real-time PCR)技術(shù)檢測ENPP1、TCF7L2基因在兩組樣本中的表達量。結(jié)果:實時熒光定量PCR結(jié)果顯示,糖尿病前期組基因ENPP1、TCF7L2表達量均高于正常對照組(P0.05),與芯片結(jié)果趨勢一致;且ENPP1和TCF7L2在糖尿病前期組中的表達量高于正常對照組。結(jié)論:經(jīng)過基因芯片驗證的基因結(jié)果是可靠的,但仍不排除基因芯片中假陽性結(jié)果的可能。運用基因芯片能篩選出有意義的差異基因,但其結(jié)果仍需要進一步的驗證�；駿NPP1和TCF7L2可能是糖尿病前期的致病基因,但仍需要得到進一步大樣本的驗證。
【圖文】：

Agilent2100質(zhì)檢結(jié)果

(圖 1 中僅代表 8 例不同樣本的 Agilent 2100 質(zhì)檢結(jié)果，，一圖 Ladder 代表 Marker 經(jīng) Agilent 2100 檢測的結(jié)果。）
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R587.1

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本文編號：2586866