發(fā)布時間：2020-02-05 21:38

【摘要】：目的：CNP作為利鈉肽家族中一種新型的利鈉肽,其具有調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等多方位的血管活性。本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建pEGFP-C1-NPPC真核表達(dá)載體、轉(zhuǎn)化DH5a菌株,并轉(zhuǎn)染人血管內(nèi)皮細(xì)胞,獲得含目的基因的菌株及對轉(zhuǎn)染的細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)檢測,有助于后續(xù)研究的進(jìn)行,同時可為糖尿病下肢動脈閉塞的基因治療提供新的選擇。方法：以小鼠cDNA為模板,通過反轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增NPPC基因片段,通過雙酶切,定向亞克隆至pEGFP-C1載體,轉(zhuǎn)化DH5a菌株并篩選,質(zhì)粒提取,重組質(zhì)粒經(jīng)酶切正確,送測序公司測序。分別用pEGFP-C1空質(zhì)粒及pEGFP-C1-NPPC轉(zhuǎn)染人血管內(nèi)皮細(xì)胞。對兩組細(xì)胞進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡法及熒光定量PCR監(jiān)測,對比目的基因表達(dá)量差異。結(jié)果：1、酶切和測序圖譜證明載體構(gòu)建正確2、轉(zhuǎn)染得到帶抗性的菌株和細(xì)胞3、轉(zhuǎn)入重組質(zhì)粒組細(xì)胞目的基因表達(dá)量明顯增加結(jié)論：構(gòu)建pEGFP-C1-NPPC質(zhì)粒成功,并可在真核細(xì)胞內(nèi)實(shí)現(xiàn)高表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：Q78;R587.2

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本文編號：2576732