【摘要】：肝臟CYP450酶對藥物的生物轉(zhuǎn)化是一個耗氧的過程。在高海拔地區(qū),機體處于低壓、低氧的環(huán)境,在這種苛刻的條件下,體內(nèi)CYP450酶系的活動均受到不同的影響。CYP450酶的變化可能直接影響藥物的療效,并發(fā)生不良反應。因此,系統(tǒng)的研究CYP450酶在高原環(huán)境的變化具有重要意義。本實驗主要研究急進高原后CYP450酶亞型的活性和蛋白表達量變化,對機制進行探究；給予藥物(CYP450酶誘導劑和酶抑制劑)干預后考察CYP450酶活性的變化,探索在缺氧和藥物的雙重干預下CYP450酶活性的改變；檢測大鼠生化參數(shù)的變化,觀察肝臟病理和電鏡的變化,評價急進高原缺氧對大鼠肝臟的損傷。將大鼠隨機分為A：55m空白組、B：4300m實地空白組、C：4300m低氧艙模擬空白組,進行如下實驗：①腹主動脈采血,血氣分析儀測定血氣；②腹腔靜脈采血,測定主要生化指標；③取大鼠肝組織,分別固定進行病理及電鏡觀察；④剩余肝組織放入組織收集盒中液氮冷凍,提取肝微粒體,CO還原差示光譜法測定總CYP450和CYb5含量；⑤使用Promega公司P450-GloTMssays試劑盒測定各亞型酶活性；⑥Western blot法測定各亞型蛋白含量和PXR、CAR、AhR的蛋白表達量；⑦ELISA試劑盒測定肝組織勻漿液中IFN-γ, IL-1β, IL-2和IL-6的含量。同時,設置藥物干預實驗,方案如下：平原組和4300m高原實地組給予肝藥酶誘導劑苯巴比妥(A1、B1),地塞米松(A2、B2),抑制劑異煙肼(A3、B3),西咪替丁(A4、B4)干預后測定酶活性的變化和細胞因子的變化。血氣結(jié)果顯示,急進高原組pCO2、pO2、 S02顯著性降低,HCO3-、SBC、BE和BB顯著性下降,指示大鼠在急進高原后,機體處于急性缺氧狀態(tài),代償性反應起主要作用,且可能出現(xiàn)呼吸性堿中毒合并代謝性酸中毒。生化結(jié)果顯示,急進高原組轉(zhuǎn)氨酶升高,ALP、DBIL降低,提示大鼠的肝功能受到了不同程度的影響。病理切片結(jié)果顯示,急進高原大鼠肝組織,可見不同程度的小葉中央靜脈水腫,核固縮,中央靜脈周圍少量血管充血。電鏡結(jié)果顯示,急進高原組大鼠細胞水腫,甚至細胞器溶解,說明大鼠急進高原肝臟損傷嚴重。CYP450活性測定結(jié)果顯示,急進高原后CYP1A2和CYP2C11活性顯著性降低,而CYP3A1活性升高,CYP2D4組間無顯著性差異(P0.05)。CYP450亞型蛋白含量測定結(jié)果顯示,急進高原后CYP1A2和CYP2C11含量顯著性降低,其余組間無顯著性差異(P0.05)。在高原缺氧條件下CYP450的活性和含量都發(fā)生了改變,酶蛋白量的表達主要受核受體通路中細胞因子及低氧誘導因子的調(diào)控,其活性主要受到細胞因子的調(diào)控。核受體測定結(jié)果顯示,PXR含量高原組較平原組顯著性降低。分析細胞因子含量測定結(jié)果,急進高原后IFN-γ、IL-2、IL-1β和IL-6的含量與平原組相比均顯著性上升,CYP450酶活性的改變與細胞因子水平變化有良好的對應關系。給予酶誘導劑干預后,苯巴比妥在平原組誘導CYP2C11和CYP3A1活性顯著性上升,海拔4300m組CYP1A2、2C11和2D4的活性均顯著性上升,CYP3A1的活性顯著性下降40.63%。地塞米松誘導后,平原組CYP3A1和CYP2D4的活性顯著性增加,急進4300m海拔CYP2C11和CYP2D4活性顯著性上升,CYP3A1活性較4300m空白組顯著性下降65.24%。給予酶抑制劑干預后,異煙肼在平原組抑制了CYP1A2活性。給予西咪替丁后,平原組CYP1A2活性下降39.63%。海拔4300m組CYP3A1活性顯著性下降而CYP2C11活性升高。其余組間比較均無差異(P0.05)。55m海拔處,與空白組相比,苯巴比妥使IL-2和IL-6的含量顯著性上升；地塞米松上調(diào)了IFN-γ、IL-2和IL-6的表達量；異煙肼和西咪替丁都增加了IFN-γ、IL-2和IL-6的表達量：各給藥組IL-1β的表達量都顯著性下降。急進高原給藥組與4300m空白組相比：苯巴比妥使得IFN-γ、IL-1β和IL-2的含量顯著性下降；地塞米松下調(diào)了IL-1β和IL-2的含量；異煙肼使得IFN-γ、IL-1p和IL-2的含量顯著性下降；西咪替丁增加了IL-6的含量,IFN-γ和IL-1β的含量顯著性降低。大量的研究工作已經(jīng)證實了高原環(huán)境對CYP450存在著明顯的影響,很多藥物的不良反應基本都與常規(guī)藥物的使用有關,藥物代謝與CYP450酶息息相關,故高原環(huán)境對CYP450酶的影響急需進行深入的探究。本實驗系統(tǒng)的研究了急進高原后主要負責藥物代謝的四種CYP450亞型酶的活性和表達量的變化,并討論了在藥物干預下酶活性的變化。實驗結(jié)果為解釋高原藥代動力學發(fā)生變化和藥物的相互作用提供了參考依據(jù)和實驗基礎。
【圖文】：

２．３．３．２邐ＣＹＰ４５０亞型活性測定結(jié)果逡逑檢測化學發(fā)光強度可知，氋原環(huán)境對酶亞型活性的影響差異有統(tǒng)計學意義，逡逑結(jié)果如圖２－１。ＣＹＰ１Ａ２活性隨著海拔的升\齠檔�，与Ａ组相饼x�、Ｃ讬伟櫫x媳鸞檔停擔玻玻梗ズ停擔常擔埃ィ歡茫伲校常粒被钚裕倫榻希磷檣耄吡隋澹玻擔常福�。辶x希茫伲校玻茫保被钚裕倫榻希磷橄陸盜隋澹福埃埃

本文編號：2569513