【摘要】：為研究胰高血糖素樣肽-1(Glucogon like peptide-1,GLP-1)對(duì)晚期糖基化終產(chǎn)物(Advanced Glycation End Products,AGEs)誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制研究。體外培養(yǎng)成纖維細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)分為5組:正常對(duì)照組,200 mg/L AGEs試驗(yàn)組,AGEs(200 mg/L)+GLP-1(5 nmol/L)組,AGEs(200 mg/L)+GLP-1(10 nmol/L)以及AGEs(200 mg/L)+GLP-1(20 nmol/L)組,處理24 h。通過CCK-8比色法檢測(cè)細(xì)胞存活率,相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),雙氯熒光素(DCFH-DA)染色熒光顯微鏡攝片觀察細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平;運(yùn)用Hoechst33258檢測(cè)試劑盒及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)成纖維細(xì)胞的凋亡率,Western Blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3、Bcl-2的表達(dá)量。結(jié)果表明:與正常組相比,200 mg/L AGEs組降低成纖維細(xì)胞生存率,活性氧(ROS)生成量增加;與AGEs組相比,AGEs+GLP-1組成濃度依賴性提高細(xì)胞生成率,活性氧(ROS)含量減少。與正常組相比,AGEs組導(dǎo)致促凋亡蛋白Caspase-3增加,抑制凋亡蛋白Bcl-2減少,細(xì)胞凋亡率升高;AGEs+GLP-1組較AGEs組下調(diào)促凋亡蛋白Caspase-3,上調(diào)抑制蛋白凋亡Bcl-2,細(xì)胞凋亡率減少。由此可見,GLP-1可以通過拮抗活性氧(ROS)發(fā)揮對(duì)AGEs誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用。
【圖文】：

h。結(jié)果顯示200mg/L處理細(xì)胞生成率明顯降低，而AGEs+GLP-1組成濃度依賴性提高細(xì)胞生成率。表1GLP-1對(duì)成纖維細(xì)胞生成率的影響Table1EffectsofGLP-1oncellviabilityofdifferentgroups組別Group細(xì)胞生成率Cellviability(%)ofcontrol(mean±SD)NormalControl94．17±3．38200mg/LAGEs68．16±2．24##200mg/LAGEs+5nmol/LGLP-174．22±3．11200mg/LAGEs+10nmol/LGLP-178．68±1．96*200mg/LAGEs+20nmol/LGLP-182．66±1．62*注:##P＜0．01vscontrol;*P＜0．05vsAGEsgroup．3．2細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察如圖1所示，運(yùn)用倒置相差顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn):正常組細(xì)胞呈圓形，排列規(guī)整，大小均一，胞核、胞質(zhì)境界清楚。200mg/LAGEs損傷組細(xì)胞大小不規(guī)則，胞體變圓、皺縮，胞核增大。加入不同濃度的GLP-1后，與AGEs組相比，加入5、10、20nmol/LGLP-1組細(xì)胞大小較為均一，細(xì)胞呈圓形，形態(tài)趨向正常，損傷的細(xì)胞減少。圖1不同處理組細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察(×100)Fig.1Cellularmorphologyobservationofdifferentgroups(×100)1948天然產(chǎn)物研究與開發(fā)Vol.29

g/LAGEs30．71±2．28##200mg/LAGEs+5nmol/LGLP-125．61±2．54*200mg/LAGEs+10nmol/LGLP-118．32±1，28*200mg/LAGEs+20nmol/LGLP-116．26±3．12*注:##P＜0．01vscontrol;*P＜0．05vs200mg/LAGEsgroup．3．4GLP-1抑制AGEs誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞凋亡如圖2中Hoechst33258核染色檢測(cè)結(jié)果顯示，與正常組比較，200mg/LAGEs處理成纖維細(xì)胞24h后，細(xì)胞凋亡率明顯增多;與200mg/LAGEs組損傷相比。200mg/LAGEs+10nmol/LGLP-1、200mg/LAGEs+20nmol/LGLP-1組對(duì)細(xì)胞凋亡的作用，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。圖2GLP-1對(duì)AGEs誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞凋亡的影響Fig.2EffectofGLP-1onAGEs-inducedapoptosisoffibroblastcells(Mean±SD，n=4)注:##P＜0．01vscontrol;*P＜0．05vs200nmol/LAGEsgroup3．5GLP-1減少AGEs誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞凋亡如圖3中流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，正常組凋亡率為6．73%，200mg/LAGEs處理細(xì)胞凋亡率明顯增加，而200mg/LAGEs+10nmol/LGLP-1組、200mg/LAGEs+20nmol/LGLP-1組處理24h可明顯地減少凋亡細(xì)胞的數(shù)量;與AGEs組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。3．6Westernblot檢測(cè)各組凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3、Bcl-2的水平細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，促凋亡蛋白Caspase-3產(chǎn)生增加，而抑制凋亡蛋白Bcl-2減少。WesternBlot檢測(cè)結(jié)果如圖4所示:與對(duì)照組相比，200mg/LAGEs組的Caspase-3上調(diào)及Bcl-2下調(diào)明顯。說(shuō)明AGEs促進(jìn)成纖維細(xì)胞凋亡。而加入GLP-1后，與AGEs組相比，200mg/LAGEs+10nmol/LGLP-1、200mg/LAGEs+20nmol/LGLP-1的Caspase-3表達(dá)量均下調(diào)，而抑制凋亡Bcl-2分別上調(diào)，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。4討論與結(jié)論糖尿病心肌病中活性氧(ＲOS)增強(qiáng)，，最主要的原因是高血糖引起的糖自身氧化，而在AGEs形成
【作者單位】： 九江學(xué)院附屬醫(yī)院心內(nèi)科;九江學(xué)院轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(地區(qū))基金(81660152) 江西省教育廳科技課題(GJJ09350)
【分類號(hào)】：R587.2

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本文編號(hào)：2551828