【摘要】：尿酸(Uric Acid,UA)是人體嘌呤代謝終產物,其水溶性較差,37℃時,血漿尿酸的飽和度約420μmol/L,高于此限度血液中的尿酸可在組織內結晶沉積,這種血尿酸高于正常范圍的機能狀態(tài)即是高尿酸血癥(Hyperuricemia,HUA)。按照中國無癥狀高尿酸血癥診斷標準,受試者非同日兩次檢測血尿酸值超過420μmol/L者即可診斷高尿酸血癥。隨著我國西部經濟的飛速發(fā)展,越來越多的平原人來到高原工作、學習、旅游或定居,高尿酸血癥的發(fā)病現狀、特點、規(guī)律都沒有一個統一的認識,與之相關的報道也有差異。為此,我們選取移居高原4520米地區(qū)的一批青年漢族男性作為研究對象,對高尿酸血癥的發(fā)病特點及規(guī)律及相關因素進行了一次全面調查,以消除以上困擾人們多年的疑惑,也為探討其發(fā)病機制奠定基礎。HUA的發(fā)病具有明顯的種族差異和個體易感傾向,提示HUA的發(fā)生可能有遺傳因素參與。以往有關于HUA遺傳易感性相關基因的研究報道,與之相關的基因分為兩類,一是與尿酸生成增多相關,如磷酸核糖焦磷酸合成酶(PRPS)基因、次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶(HGPRT)基因亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因和β3-腎上腺素能受體(β3-AR)基因。二是與尿酸的腎臟排泄相關基因,如人尿酸鹽陰離子交換器(hURAT1)基因、SLC17A1蛋白(NPT1)基因、SLC2A9基因、載脂蛋白E(ApoE)基因和瘦素(Leptin)基因。在本研究的第一部分我們發(fā)現移居高原漢族青年男性的血尿酸濃度與黃嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XO)密切相關。因此,我們選取了與尿酸生成密切相關的XO基因的十個單核苷酸多態(tài)性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)位點,在高原地區(qū)移居漢族人群中,檢測男性高尿酸血癥患者以及健康對照上述SNP位點的基因型分布,對其多態(tài)性進行分析,旨在探討XO基因SNP與男性漢族高尿酸血癥的相關性。本課題針對上述問題進行研究。本研究的主要內容有:1、依據中國無癥狀高尿酸血癥診斷標準,針對移居西藏那曲地區(qū)的高原漢族青年男性HUA的發(fā)病情況進行調查。研究對象分為HUA組(UA≥420μmol/L的移居高原漢族青年男性,排除其他相關疾病)和NUA組(UA420μmol/L,移居高原漢族健康青年男性)。采集研究對象的生活背景、一般生理指標、飲食衛(wèi)生習慣和高原停留時間等一系列信息,采集清晨空腹肘靜脈血,探討移居高原漢族青年男性hua發(fā)病的現狀、規(guī)律及特點。2、利用相應的分析檢驗方法和線性回歸統計,分析hua患者xo基因多態(tài)性與hua易感性的關系,希望找到hua發(fā)生的易感基因和遺傳機制。結果:1、三個月時間里四次檢測血尿酸濃度,移居高原漢族男性hua發(fā)病率為77.5%。2、hua組的血紅蛋白(hb)濃度非常顯著的高于健康對照組,血氧飽和度顯著低于健康對照組(p0.01),而hua組的年齡、高原停留時間、收縮壓、舒張壓、心率和平均肺動脈壓(pamp)則與nua組沒有差異。3、血尿酸濃度和hua發(fā)生率在不同年齡組(16~19歲、20~23歲、23歲)和不同高原停留時間組(0~12月、13~36月、36月)之間沒有差異(p0.05)。4、經相關分析發(fā)現,長期移居高原漢族血漿中xo濃度與ua濃度有非常顯著的正相關性(p0.01),hb濃度隨血漿中xo含量的增加而增加。hua組血漿中的xo含量非常顯著地高于nua組(p0.01)。5、hua組xo基因rs17038412位點at基因型的頻率(58.6%)顯著高于nua組(37.1%)(p0.05,or=3.96,95%ci:1.42-11.08)。結論:1、移居高原漢族男性hua的發(fā)生率高達77.5%。2、hua的發(fā)生率在初入高原一年內即可達到高峰,且不隨高原生活時間的延長而出現明顯改變。3、血尿酸濃度在初入高原一年內即可達到高峰,同樣不隨高原生活時間的延長而出現明顯改變。4、血尿酸含量與xo的濃度、活性及血紅蛋白濃度成正相關,與血氧飽和度成負相關。5、xo基因rs17038412多態(tài)性位點a等位基因可增加移居高原漢族男性hua的發(fā)病風險,而該多態(tài)性位點at基因型是移居高原漢族男性hua發(fā)生的危險因素。
【圖文】：

將所有成分混合好之后，每孔加入 24μl 混合液，再加入 1μl 模板 DNA。(2) 摸索十個 SNP 位點引物退火溫度及摸索退火溫度：rs 6710015 引物序列：Forward primer (5`-3`)：TGACACATTGTCCACCCAGCReverse primer (5`-3`)：GCGGTTGGTAAAGAGAACAAGGProduct length 96bp。摸索退火溫度：此方法參考陳郁碩士期間所采用的方法95 度預變性 5 分鐘95 度變性 5 秒退火溫度梯度參考引物合成附帶的說明書，反應 30 秒72 度延伸 30 秒（共反應 40 個循環(huán)）72 度補延伸 3 分鐘設置溫度范圍 55℃-95℃，讀取溶解曲線PCR 結果如下：

圖 3-2 rs206811 引物擴增曲線圖及融解曲線圖rs206811 這對引物最佳退火溫度為 60℃。rs743163 引物序列：Forward primer (5`-3`)：ATTTAGTGGTCCCTGTGGCTReverse primer (5`-3`)：TGTTGGCAGTTATCATTTCAGTGCProduct length 116bp。摸索退火溫度：反應條件同上PCR 結果如下：
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R589.7

【參考文獻】

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本文編號：2552135