【摘要】：尿酸(Uric Acid,UA)是人體嘌呤代謝終產(chǎn)物,其水溶性較差,37℃時(shí),血漿尿酸的飽和度約420μmol/L,高于此限度血液中的尿酸可在組織內(nèi)結(jié)晶沉積,這種血尿酸高于正常范圍的機(jī)能狀態(tài)即是高尿酸血癥(Hyperuricemia,HUA)。按照中國(guó)無(wú)癥狀高尿酸血癥診斷標(biāo)準(zhǔn),受試者非同日兩次檢測(cè)血尿酸值超過(guò)420μmol/L者即可診斷高尿酸血癥。隨著我國(guó)西部經(jīng)濟(jì)的飛速發(fā)展,越來(lái)越多的平原人來(lái)到高原工作、學(xué)習(xí)、旅游或定居,高尿酸血癥的發(fā)病現(xiàn)狀、特點(diǎn)、規(guī)律都沒(méi)有一個(gè)統(tǒng)一的認(rèn)識(shí),與之相關(guān)的報(bào)道也有差異。為此,我們選取移居高原4520米地區(qū)的一批青年漢族男性作為研究對(duì)象,對(duì)高尿酸血癥的發(fā)病特點(diǎn)及規(guī)律及相關(guān)因素進(jìn)行了一次全面調(diào)查,以消除以上困擾人們多年的疑惑,也為探討其發(fā)病機(jī)制奠定基礎(chǔ)。HUA的發(fā)病具有明顯的種族差異和個(gè)體易感傾向,提示HUA的發(fā)生可能有遺傳因素參與。以往有關(guān)于HUA遺傳易感性相關(guān)基因的研究報(bào)道,與之相關(guān)的基因分為兩類(lèi),一是與尿酸生成增多相關(guān),如磷酸核糖焦磷酸合成酶(PRPS)基因、次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT)基因亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因和β3-腎上腺素能受體(β3-AR)基因。二是與尿酸的腎臟排泄相關(guān)基因,如人尿酸鹽陰離子交換器(hURAT1)基因、SLC17A1蛋白(NPT1)基因、SLC2A9基因、載脂蛋白E(ApoE)基因和瘦素(Leptin)基因。在本研究的第一部分我們發(fā)現(xiàn)移居高原漢族青年男性的血尿酸濃度與黃嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XO)密切相關(guān)。因此,我們選取了與尿酸生成密切相關(guān)的XO基因的十個(gè)單核苷酸多態(tài)性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)位點(diǎn),在高原地區(qū)移居漢族人群中,檢測(cè)男性高尿酸血癥患者以及健康對(duì)照上述SNP位點(diǎn)的基因型分布,對(duì)其多態(tài)性進(jìn)行分析,旨在探討XO基因SNP與男性漢族高尿酸血癥的相關(guān)性。本課題針對(duì)上述問(wèn)題進(jìn)行研究。本研究的主要內(nèi)容有:1、依據(jù)中國(guó)無(wú)癥狀高尿酸血癥診斷標(biāo)準(zhǔn),針對(duì)移居西藏那曲地區(qū)的高原漢族青年男性HUA的發(fā)病情況進(jìn)行調(diào)查。研究對(duì)象分為HUA組(UA≥420μmol/L的移居高原漢族青年男性,排除其他相關(guān)疾病)和NUA組(UA420μmol/L,移居高原漢族健康青年男性)。采集研究對(duì)象的生活背景、一般生理指標(biāo)、飲食衛(wèi)生習(xí)慣和高原停留時(shí)間等一系列信息,采集清晨空腹肘靜脈血,探討移居高原漢族青年男性hua發(fā)病的現(xiàn)狀、規(guī)律及特點(diǎn)。2、利用相應(yīng)的分析檢驗(yàn)方法和線(xiàn)性回歸統(tǒng)計(jì),分析hua患者xo基因多態(tài)性與hua易感性的關(guān)系,希望找到hua發(fā)生的易感基因和遺傳機(jī)制。結(jié)果:1、三個(gè)月時(shí)間里四次檢測(cè)血尿酸濃度,移居高原漢族男性hua發(fā)病率為77.5%。2、hua組的血紅蛋白(hb)濃度非常顯著的高于健康對(duì)照組,血氧飽和度顯著低于健康對(duì)照組(p0.01),而hua組的年齡、高原停留時(shí)間、收縮壓、舒張壓、心率和平均肺動(dòng)脈壓(pamp)則與nua組沒(méi)有差異。3、血尿酸濃度和hua發(fā)生率在不同年齡組(16~19歲、20~23歲、23歲)和不同高原停留時(shí)間組(0~12月、13~36月、36月)之間沒(méi)有差異(p0.05)。4、經(jīng)相關(guān)分析發(fā)現(xiàn),長(zhǎng)期移居高原漢族血漿中xo濃度與ua濃度有非常顯著的正相關(guān)性(p0.01),hb濃度隨血漿中xo含量的增加而增加。hua組血漿中的xo含量非常顯著地高于nua組(p0.01)。5、hua組xo基因rs17038412位點(diǎn)at基因型的頻率(58.6%)顯著高于nua組(37.1%)(p0.05,or=3.96,95%ci:1.42-11.08)。結(jié)論:1、移居高原漢族男性hua的發(fā)生率高達(dá)77.5%。2、hua的發(fā)生率在初入高原一年內(nèi)即可達(dá)到高峰,且不隨高原生活時(shí)間的延長(zhǎng)而出現(xiàn)明顯改變。3、血尿酸濃度在初入高原一年內(nèi)即可達(dá)到高峰,同樣不隨高原生活時(shí)間的延長(zhǎng)而出現(xiàn)明顯改變。4、血尿酸含量與xo的濃度、活性及血紅蛋白濃度成正相關(guān),與血氧飽和度成負(fù)相關(guān)。5、xo基因rs17038412多態(tài)性位點(diǎn)a等位基因可增加移居高原漢族男性hua的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn),而該多態(tài)性位點(diǎn)at基因型是移居高原漢族男性hua發(fā)生的危險(xiǎn)因素。
【圖文】：

將所有成分混合好之后，每孔加入 24μl 混合液，再加入 1μl 模板 DNA。(2) 摸索十個(gè) SNP 位點(diǎn)引物退火溫度及摸索退火溫度：rs 6710015 引物序列：Forward primer (5`-3`)：TGACACATTGTCCACCCAGCReverse primer (5`-3`)：GCGGTTGGTAAAGAGAACAAGGProduct length 96bp。摸索退火溫度：此方法參考陳郁碩士期間所采用的方法95 度預(yù)變性 5 分鐘95 度變性 5 秒退火溫度梯度參考引物合成附帶的說(shuō)明書(shū)，反應(yīng) 30 秒72 度延伸 30 秒（共反應(yīng) 40 個(gè)循環(huán)）72 度補(bǔ)延伸 3 分鐘設(shè)置溫度范圍 55℃-95℃，讀取溶解曲線(xiàn)PCR 結(jié)果如下：

圖 3-2 rs206811 引物擴(kuò)增曲線(xiàn)圖及融解曲線(xiàn)圖rs206811 這對(duì)引物最佳退火溫度為 60℃。rs743163 引物序列：Forward primer (5`-3`)：ATTTAGTGGTCCCTGTGGCTReverse primer (5`-3`)：TGTTGGCAGTTATCATTTCAGTGCProduct length 116bp。摸索退火溫度：反應(yīng)條件同上PCR 結(jié)果如下：
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R589.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2552135