【摘要】：隨著人民生活水平的提高,生活方式西方化及人口老齡化,人類健康面臨的慢性疾病威脅正日益加重,其中糖尿病及其慢性并發(fā)癥更是危害健康的無情殺手。近年來研究認(rèn)為,2型糖尿病(T2DM)是一種免疫相關(guān)性慢性炎癥性疾病,機(jī)體免疫調(diào)節(jié)異�？赡茉赥2DM及其并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。協(xié)調(diào)刺激分子OX40L是腫瘤壞死因子超家族(TNFSF)成員,與其特異性受體OX40相結(jié)合,為T、B細(xì)胞的長效激活提供第二信號[1],發(fā)揮重要的免疫調(diào)節(jié)作用。本課題通過流式細(xì)胞技術(shù)以及ELISA法檢測單純糖尿病患者、糖尿病合并頸動脈斑塊患者和糖尿病合并急性心肌梗死患者外周血中單核細(xì)胞表面OX40L和可溶性O(shè)X40L(s OX40L)的水平變化,分析膜型和可溶性O(shè)X40L在糖尿病大血管病變發(fā)生發(fā)展中的生物學(xué)作用。一、OX40/OX40L信號通路在2型糖尿病合并大血管病變中的表達(dá)及意義目的探討2型糖尿病及其合并大血管病變患者外周血免疫細(xì)胞表面OX40/OX40L和血清中可溶性O(shè)X40L(s OX40L)的表達(dá)變化。方法采用免疫熒光標(biāo)記流式細(xì)胞技術(shù)檢測A組(單純2型糖尿病組,42例)、B組(2型糖尿病合并頸動脈斑塊組,31例)、C組(2型糖尿病合并急性心肌梗死組,25例)、D組(健康對照組,33例)人群外周血免疫細(xì)胞膜表面OX40和OX40L的表達(dá)水平,ELISA法檢測四組血清s OX40L的濃度。結(jié)果四組人群中,外周血CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞表面OX40的表達(dá)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與D組比較,A、B、C三組CD14+單核細(xì)胞表面OX40L的表達(dá)均上調(diào)(P0.01);C組CD14+單核細(xì)胞表面OX40L表達(dá)水平高于A組、B組(P0.01、P0.05)。與D組相比,A、B、C組患者血清s OX40L的水平明顯升高(P0.01),C組患者血清s OX40L的表達(dá)水平高于A組、B組(P0.01、P0.05)。結(jié)論論2型糖尿病患者外周血單核細(xì)胞表面及血清中上調(diào)表達(dá)OX40L,其表達(dá)水平與糖尿病大血管病變嚴(yán)重程度密切相關(guān)。二、高糖對單核細(xì)胞表面OX40L以及可溶性O(shè)X40L表達(dá)的影響及生物學(xué)意義目的探討高糖對單核細(xì)胞表面OX40L分子表達(dá)和培養(yǎng)上清中可溶性O(shè)X40L產(chǎn)生的影響,觀察高糖對單核細(xì)胞生物學(xué)作用的影響。方法(1)收取健康人外周血,淋巴細(xì)胞分離液(Ficoll)分離出外周血單個核細(xì)胞(PBMCs),貼壁1~2h后,移除懸浮細(xì)胞,收集貼壁細(xì)胞即為CD14+單核細(xì)胞(純度可達(dá)90%左右);(2)實驗分組均以不同濃度葡萄糖(5.5、11、22、33mmol/L)加入培養(yǎng)基中干預(yù)CD14+單核細(xì)胞,分別于12h、24h、36h、48h收細(xì)胞和培養(yǎng)上清;(3)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測CD14+單核細(xì)胞表面OX40L的表達(dá);(4)應(yīng)用ELISA試劑盒檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中s OX40L和TNF-α的含量。結(jié)果(1)流式結(jié)果顯示:高糖濃度組單核細(xì)胞表面OX40L表達(dá)較對照組均顯著增加(P0.05),且呈濃度和時間依賴性(P0.05);(2)ELISA檢測結(jié)果顯示:高糖濃度組培養(yǎng)上清中s OX40L水平較對照組顯著增高(P0.05),且各濃度組之間有明顯差異(P0.05);同時高糖促進(jìn)炎癥因子TNF-α的水平升高。結(jié)論高濃度葡萄糖上調(diào)單核細(xì)胞OX40L和s OX40L的表達(dá),且與炎癥因子水平相關(guān)。表明高糖通過單核細(xì)胞協(xié)同刺激分子的表達(dá)增加了炎癥效應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R587.2

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本文編號：2548830