【摘要】：肥胖和超重已經(jīng)成為全球性的健康問(wèn)題,最近的研究發(fā)現(xiàn)亮氨酸可以通過(guò)降低食物攝入量、改善胰島素抵抗、抑制脂肪生成、促進(jìn)脂肪分解以及促進(jìn)能量消耗等途徑減輕體重。但是也有很多研究認(rèn)為亮氨酸并不能減輕體重甚至還會(huì)促進(jìn)體重增長(zhǎng)。這可能跟亮氨酸激活的mTOR通路對(duì)代謝的多重調(diào)控有關(guān)。本研究則探討亮氨酸對(duì)脂肪分解和瘦素信號(hào)通路的影響。第一部分:亮氨酸對(duì)3T3-L1細(xì)胞增殖和分化的影響目的:以3T3-L1前脂肪細(xì)胞為研究對(duì)象,觀察不同濃度的亮氨酸對(duì)其增殖和分化的影響,確定亮氨酸的合適濃度。方法:MTT法測(cè)量不同濃度的亮氨酸對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖狀況的影響。IBMX、地塞米松和胰島素誘導(dǎo)3T3-L1細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞,分別在分化過(guò)程中和分化完成后用亮氨酸干預(yù),并用油紅O染色,觀察不同濃度的亮氨酸對(duì)3T3-L1細(xì)胞分化過(guò)程及分化后的3T3-L1細(xì)胞中脂滴數(shù)的影響。結(jié)果:0,0.5,1,2mM的亮氨酸處理3T3-L1細(xì)胞,48h后,細(xì)胞數(shù)量無(wú)明顯差異。整個(gè)分化過(guò)程中添加亮氨酸作用14d,3T3-L1細(xì)胞內(nèi)的脂滴數(shù)會(huì)隨著亮氨酸濃度的增加而減少,但是亮氨酸對(duì)分化后的3T3-L1脂肪細(xì)胞中的脂滴數(shù)并無(wú)影響。結(jié)論:0--2mM的亮氨酸不影響3T3-L1細(xì)胞增殖。亮氨酸抑制分化過(guò)程中的3T3-L1細(xì)胞內(nèi)脂滴的生成,不影響分化完成脂肪細(xì)胞內(nèi)脂滴的生成。第二部分:亮氨酸對(duì)脂肪分解的影響目的:在第一部分研究的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步了解亮氨酸對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞內(nèi)脂滴數(shù)影響的原因,即研究細(xì)胞內(nèi)脂肪分解相關(guān)的信號(hào)通路。方法:收集細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的培養(yǎng)基,用試劑盒檢測(cè)其中的甘油含量。收集細(xì)胞,裂解提取蛋白,用Western blot的方法檢測(cè)細(xì)胞中HSL、磷酸化HSL、PLIN和PKA蛋白的變化情況。結(jié)果:在分化過(guò)程中添加亮氨酸,培養(yǎng)基中的甘油含量隨亮氨酸濃度的增加而增加;分化完成后添加亮氨酸,培養(yǎng)基中的甘油含量不隨亮氨酸濃度的增加而改變。在分化過(guò)程中添加亮氨酸,第4天和第14天細(xì)胞中HSL蛋白和PKA蛋白的表達(dá)量不隨亮氨酸濃度的增加而改變;但磷酸化HSL蛋白的表達(dá)量隨亮氨酸濃度的增加而增加,且第14天比第4天更為明顯;細(xì)胞中PLIN蛋白的表達(dá)量隨亮氨酸濃度的增加而減少,且第14天比第4天更為明顯。在分化完成后添加亮氨酸,細(xì)胞中的HSL、磷酸化HSL、PLIN和PKA蛋白的表達(dá)量都不隨亮氨酸濃度的增加而改變。結(jié)論:分化過(guò)程中添加亮氨酸,降低脂滴周?chē)h(huán)繞的PLIN蛋白,上調(diào)磷酸化HSL,促進(jìn)脂肪分解,產(chǎn)生甘油向培養(yǎng)基中分泌。但對(duì)分化完成后的細(xì)胞則無(wú)影響。第三部分:亮氨酸對(duì)瘦素信號(hào)通路的影響目的:在第二部分的基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討亮氨酸對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞中與脂代謝密切相關(guān)的瘦素信號(hào)通路的影響。方法:在3T3-L1分化的不同階段添加不同的亮氨酸進(jìn)行干預(yù),在不同的時(shí)間點(diǎn)收集細(xì)胞,Western blot檢測(cè)細(xì)胞中Leptin、Ob-R、JAK1、JAK2和STAT3蛋白表達(dá)量的變化。結(jié)果:在分化過(guò)程中添加亮氨酸,第4天和第14天細(xì)胞中Leptin、Ob-R、JAK1、JAK2、STAT3蛋白表達(dá)量隨亮氨酸濃度的增加而減少,且第14天更為明顯。在分化完成后添加亮氨酸,以上蛋白的表達(dá)量不隨亮氨酸濃度的增加而改變。結(jié)論:在分化過(guò)程中添加亮氨酸,由于抑制了脂肪的生成,而使其分泌的瘦素減少,其下游的通過(guò)Ob-R激活的JAK/STAT3信號(hào)通路也相應(yīng)被抑制。而對(duì)分化完成后的細(xì)胞則無(wú)抑制作用�？偟慕Y(jié)論:亮氨酸促進(jìn)3T3-L1細(xì)胞在分化過(guò)程中的脂肪分解,但不影響分化完成后的脂肪細(xì)胞。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R589.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2547496