發(fā)布時(shí)間：2019-07-30 20:11

【摘要】：目的探討Wnt信號(hào)通路在百草枯(paraquat,PQ)誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化模型中的作用,進(jìn)一步闡明PQ致肺纖維化的機(jī)制,研究調(diào)控Wnt信號(hào)通路對(duì)肺纖維化的影響,為新藥研發(fā)及臨床上治療PQ中毒提供新的思路。方法實(shí)驗(yàn)一:選用SD大鼠36只,隨機(jī)分為對(duì)照組和PQ組,每組18只,PQ組大鼠采用一次性腹腔注射百草枯20 mg/Kg,對(duì)照組腹腔給予等量生理鹽水,于第7天、14天、28天各取6只斷頸處死,取肺組織行HE染色、馬松染色、HYP含量,RayBio蛋白芯片技術(shù)檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)情況,Western blot檢測(cè)β-catenin和MMP2的表達(dá)水平,免疫組化檢測(cè)occludin、E-cadherin和α-SMA、vimentin的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)二:選用SD大鼠54只,隨機(jī)分為對(duì)照組、PQ組、抑制劑組,每組18只,抑制劑組一次性給予腹腔注射百草枯20 mg/Kg同時(shí)經(jīng)氣道給予Wnt信號(hào)通路抑制劑DKK1(2mg/kg,100μ 1 PBS,連續(xù)給藥一周),對(duì)照組和PQ組按實(shí)驗(yàn)一方法處理,于第7天、14天、28天隨機(jī)各取6只取血行血?dú)夥治鰴z查,處死后取肺組織行HE染色、馬松染色、HYP含量測(cè)定,Western blot檢測(cè)β-catenin和MMP2的表達(dá)水平,免疫組化檢測(cè)occludin、E-cadherin和α-SMA、vimentin的表達(dá)情況。結(jié)果實(shí)驗(yàn)一:1.PQ組大鼠肺大體標(biāo)本呈點(diǎn)片狀出血灶、大量白色結(jié)節(jié)、質(zhì)地硬。HE染色顯示PQ組大鼠肺泡結(jié)構(gòu)破壞、肺泡間隔增寬、增厚,馬松染色示大量藍(lán)色纖維條索的沉積,而對(duì)照組正常。2.與對(duì)照組相比,PQ-7d組HYP含量并未增加,PQ-14d組HYP含量明顯增加,并隨著染毒時(shí)間的延長(zhǎng),HYP含量逐漸增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.RayBio 蛋白芯片技術(shù)顯示 PQ 組 IL-1β、PDGF、β-catenin、MMP-2 和 TGF-β 1等5種細(xì)胞因子表達(dá)水平異常升高。4.Western blot顯示PQ-28d肺組織β-catenin和MMP2蛋白表達(dá)明顯增加,免疫組化結(jié)果示occludin、E-cadherin表達(dá)水平下調(diào),α-SMA、vimentin蛋白表達(dá)水平上調(diào)。實(shí)驗(yàn)二:1.血?dú)夥治鲲@示PQ組Pa02、Sp02明顯下降,PaC02明顯上升,與PQ組相比,抑制劑組的Pa02、Sp02明顯上升,PaC02明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.HE染色和馬松染色結(jié)果示:與PQ組相比,抑制劑組肺上皮結(jié)構(gòu)破壞較少,肺泡結(jié)構(gòu)較完整、有序,藍(lán)色纖維條索較少沉積。3.與同期PQ組相比,抑制劑組羥脯氨酸含量明顯下降,Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)抑制劑組β-catenin和MMP2蛋白表達(dá)明顯下降。4.免疫組化結(jié)果示:與PQ組相比,抑制劑組上皮標(biāo)記物occludin、E-cadherin表達(dá)水平上升,成纖維標(biāo)記物α-SMA、vimentin蛋白表達(dá)水平有所下降。結(jié)論1.一次性腹腔注射百草枯法可建立穩(wěn)定的大鼠肺纖維化模型,Wnt信號(hào)通路參與了 PQ致大鼠肺纖維化的過程。2.PQ可能通過激活Wnt信號(hào)通路誘導(dǎo)肺上皮細(xì)胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-MesenchymalTransition,EMT),促進(jìn)成纖維細(xì)胞灶的形成,而抑制Wnt信號(hào)通路能減輕PQ中毒大鼠肺纖維化程度,為新藥研發(fā)及臨床上治療PQ中毒提供新的思路。
【圖文】：

點(diǎn)片狀出血灶、質(zhì)韌、邊緣鈍，局部有白色結(jié)節(jié)，ＰＱ組第２８天肺標(biāo)本無光澤、逡逑表面大量白色結(jié)節(jié)、質(zhì)地硬。說明ＰＱ中毒大鼠早期主要表現(xiàn)為肺損傷，２周后逡逑逐漸發(fā)生肺纖維化。（見圖１）逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ邋．邐ＰＱ邋－７ｄａｖｓ逡逑，，擺ｐＨ逡逑ＰＱ邋－１４ｄａｙｓ邐ＰＱ邐：逡逑圖１兩組大鼠不同時(shí)期肺大體標(biāo)本病理改變逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１邋ｌｕｎｇ邋ｇｒｏｓｓ邋ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ邋ｃｈａｎｇｅｓ邋ｄｕｒｉｎｇ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｐｅｒｉｏｄｓ邋ｏｆ邋ｔｗｏ邋ｇｒｏｕｐｓ逡逑２．１．邋３兩組大鼠肺組織病理光鏡變化逡逑光鏡觀察兩組不同時(shí)間段病理切片，ＨＥ染色顯示：對(duì)照組肺泡結(jié)構(gòu)正常，逡逑肺泡無充血、水腫、滲出、肺泡間隔無增厚、血管壁光滑，而ＰＱ組第７天肺泡逡逑１６逡逑

蛋白的沉積，ＰＱ組第７天可見少量藍(lán)色纖維條索的沉積，隨著時(shí)間的推移，第逡逑１４、２８天藍(lán)色纖維條索越來越多、越來越明顯，這些都說明了邋ＰＱ中毒大鼠早逡逑期肺組織以炎癥反應(yīng)為主，中毒后期逐漸發(fā)生肺纖維化。（見圖２、圖３）逡逑＿＿逡逑對(duì)照組邐ＰＱ－７ｄ逡逑W逡逑ＰＱ－１４ｄ邐ＰＱ－２８ｄ逡逑圖２兩組大鼠不同時(shí)期的肺組織ＨＥ染色（Ｘ１００）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２邋Ｔｈｅ邋ＨＥ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋ｄｕｒｉｎｇ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｐｅｒｉｏｄｓ邋ｏｆ邋ｌｕｎｇ邋ｔｉｓｓｕｅ邋ｉｎ邋ｔｗｏ邋ｇｒｏｕｐｓ逡逑１７逡逑
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R595.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2521125